MMP-7、MMP-10和TIMP-4在心力衰竭心室重构中的表达

目的:应用细胞因子抗体芯片技术筛选与心力衰竭心室重构关系密切的基质蛋白酶。方法:从本院的心脏病组织库中挑选6例病理诊断明确和各方面资料比较齐全的致心律失常性右室心肌病引起心力衰竭的心脏病标本(来源于心脏移植的受体),与年龄、性别和种族等因素相匹配的正常对照心脏组织(来源于心脏移植的供体)进行细胞因子抗体芯片分析,筛选在致心律失常性右室心肌病引起的心力衰竭中差异表达的基质蛋白酶,并应用酶联免疫分析和免疫组织化学的方法加以验证。结果:在所筛选的17种基质金属蛋白酶中,只有MMP-7和MMP-10在致心律失常性右室心肌病引起心力衰竭中高表达,而在4种基质金属蛋白酶内源性组织抑制剂中,只有TIMP-4 低表达。经酶联免疫分析和免疫组织化学的方法证实,不仅在致心律失常性右室心肌病引起心力衰竭的心肌,在缺血性心肌病和扩张性心肌病引起的心力衰竭心肌中也发现MMP-7和MMP-10 的高表达及TIMP-4的低表达。结论:心肌组织中MMP-7和MMP-10的高表达及TIMP-4的低表达在不同心肌病引起的心力衰竭心室重构分子机制中可能发挥重要的作用。     

接触抑制对转化生长因子β诱导基因22（TSC-22）在心脏成纤维细胞中表达的影响

目的通过建立体外原代培养的新生大鼠心脏成纤维细胞模型,研究接触抑制对TSC-22表达的影响,并为进一步探明TSC-22在心脏成纤维细胞中的确切功能奠定基础。方法采用差速贴壁法原代分离培养Sprague-Dawley大鼠心脏成纤维细胞,分别进行下述实验:①以不同初始密度接种细胞,分为两组:A组为50%融合组:以1.0×105/ml密度接种细胞于T25细胞培养瓶中,培养24h;B组为100%融合组:以2.0×105/ml密度接种细胞于T25细胞培养瓶中,培养24h;②均以2.0×105/ml的初始密度接种细胞于T25细胞培养瓶中,分为4组:A组为未融合组:接种后培养6h(至贴壁未融合状态);B组为融合组:接种后培养24h(至100%融合状态);C组为胰酶消化打破融合组:接种后培养至100%融合后,0.25%胰酶消化,离心混悬后重新贴壁,继续培养6h(此时细胞重新贴壁但未融合);D组为胰酶消化重新达融合组:接种后培养至100%融合后,0.25%胰酶消化,离心混悬后重新贴壁,继续培养24h(此时细胞重新达到100%融合)。以上各组分别提取mRNA和蛋白,应用实时定量PCR(real-time PCR)、蛋白印记(Western blotting)法分别检测TSC-22 mRNA、蛋白表达的变化。结果实时定量RT-PCR和蛋白印记结果表明:①心脏成纤维细胞融合度达到100%,即发生接触抑制时,与50%融合度组相比,TSC-22的mRNA和蛋白水平水平均显著升高(P<0.05);②融合组心脏成纤维细胞与未融合组相比,TSC-22的mRNA和蛋白水平均显著升高;胰酶消化打破融合组心脏成纤维细胞与融合组相比,TSC-22的mRNA和蛋白水平均显著下降;胰酶消化重新达融合组成纤维细胞与胰酶消化打破融合组相比,TSC-22的mRNA和蛋白水平均显著升高(P均<0.05)。结论本实验结果明确表明,在体外培养的心脏成纤维细胞中,接触抑制是诱导TSC-22表达升高的重要因素。当心脏成纤维细胞发生接触抑制时,TSC-22可能通过行使其转录因子的生物学功能,在接触抑制后所触发的信号通路中发挥重要调控作用。对TSC-22确切功能的深入研究,将有助于进一步理解和阐明心脏重构机制。     

孤儿肽在自发性高血压大鼠和家兔心血管系统的分布

目的 研究孤儿肽（ｏｒｐｈａｎｉｎ ＦＱ,ＯＲＱ）在自发性高血压大鼠和家兔心血管系统的分布。方法 采用反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ０法和免疫组织化学方法。结果 ＲＴ－ＰＣＲ的结果显示,ＯＦＱ的前体ｍＲＮＡ在自发性高血压大鼠的主动脉,肺动脉,肾动静脉均有较高的表达,其表达水平与脑组织表达水平相似,心房组织也有弱的表达,但在心室组织未见ＯＦＱ前体ｍＲＮＡ的表达。     

汉防己甲素对正常大鼠糖代谢作用的初步观察

本研究观察了汉防己甲素对正常大鼠血糖、血清胰岛素和血浆胰高血糖素水平的影响,结果表明:汉防己甲素(100mg/kg)腹腔注射后,血糖于0.5h明显升高(P<0.01),3h达高峰,7h恢复到空腹水平,24h血糖明显降低(P<0.05);血清胰岛素水平于给药后0.5h明显下降(P<0.05),7h降至更低水平(P<0.01),24h明显升高(P<0.01);血浆胰高血糖素水平于给药后0.5h至5h有逐渐增高的趋势。     

Studies on adrenomedullin: a novel hypotensive peptide.

Adrenomedullin (AdM), consisting of 52 amino acids, is a newly isolated pepotide from human pheochromocytoma. With hypotensive activity in normotensive rat, AdM was thought to be a newly discovered peptide in the regulation of blood pressure. To investigate the biological functions and mechanisms of AdM, we synthesized AdM by the method of solid-phase in a Beckman 990B automatic peptide synthesizer. Synthesized AdM was cyclized and purified with final purity >98%. Its structure was same as AdM isolated from phechromocvtoma.     

钙拮抗剂对在体大鼠血糖和血清胰岛素水平的影响

作者观察了钙拮抗剂一异搏定对在体大鼠血糖和血清胰岛素水平的影响,结果表明,异搏定能升高大鼠基础血糖和基础胰岛素水平。另外,在大鼠糖耐量试验中,异搏定能使大鼠对葡萄糖诱导的胰岛素反应降低和延迟,从而导致大鼠的糖耐量降低和糖耐量高峰的后移。     

大鼠实验性糖尿病免疫组织化学观察

本实验以四氧嘧啶50mg/kg尾静脉注射的方法制成大鼠实验性糖尿病动物模型。用HRP—SPA免疫组织化学方法观察了大鼠患实验性糖尿病后胰岛B细胞的动态变化。结果表明,注射四氧嘧啶后48h每个大鼠的几乎全部胰岛均发生明显的形态学改变,表现为胰岛形态欠规则。细胞极性紊乱,除少数胰岛尚可见数个散在的胰岛素免疫反映阳性细胞外,多数胰岛内胰岛素免疫反应阳性产物缺失与消失,多数细胞核固缩、变形。给药7天后的大鼠胰岛普遍出现散在的免疫反应阳性细胞,数目也较伤后48h时增多,并偶见免疫反应阳性细胞密集分布的胰岛。提示四氧嘧啶致实验性糖尿病一周后,胰岛B细胞有逐渐恢复或再生的迹象。     

急性心肌梗死后CD34^＋干细胞自体动员的意义

目的：已有理论提出急性心肌梗死后骨髓和外周血中的CD34^＋干细胞具有自身动员的潜能，观察这一潜能的变化特征及其对心肌梗死组织再生能力的影响。方法：实验于2004-09／2005-02在阜外心血管病医院完成。①实验动物：雄性SD大鼠40只。随机数字表法分为心肌梗死组、假手术组，20只/组。②实验方法：心肌梗死组大鼠采用冠状动脉结扎法建立心肌梗死模型。心电图ST段抬高或有室性心律出现，前壁心肌呈苍白色为造模成功。假手术组仅作开胸手术，前降支不予结扎。③实验评估：于心肌梗死后3,7，14，28d，流式细胞仪检测骨髓和外周血中CD34^＋干细胞的含量。用免疫组化方法检测梗死心肌组织中的Ki67细胞和毛细血管数量。结果：①外周血及骨髓CD34^＋干细胞含量的变化：心肌梗死组外周血中的CD34^＋干细胞数量于造模后3d开始上升，7d后明显高于假手术组（P〈0.01），至14,28d时逐渐回落至假手术组水平（P〉0.05）。心肌梗死组骨髓中的CD34^＋干细胞数量于造模后各时间点始终无明显变化（P〉0.05）。②组织学评定：心肌梗死组梗死区Ki67细胞和毛细血管数量于造模后3d开始增多，7d时明显多于非梗死区（P〈0.05）；至14，28d梗死区Ki67细胞数量明显少于造模后7d（P〈0.05），毛细血管数量的减少不明显（P〉0.05）。免疫组化染色显示少数Ki67细胞分化为血管内皮细胞，未见向心肌细胞分化。③相关性分析：梗死区Ki67细胞、毛细血管数量于造模后7d与外周血中CD34^＋干细胞数量呈显著正相关（r=0.913，P=0.021；r=0.887，P=0.035）。结论：机体CD34^＋干细胞的自体动员、增殖反应的潜能随急性心肌梗死时间的延长而逐渐减弱，自体动员的干细胞功能尚不足以达到修复梗死心肌组织的效果。