MC002诱导人喉癌细胞Hep-2凋亡及其作用机制

目的与雷公藤内酯醇(PG490)进行比较,观察雷公藤内酯醇衍生物MC002对人喉癌Hep-2细胞体外增殖的抑制作用及其分子机制。方法以MC002和PG490分别处理人喉癌细胞Hep-2,采用噻唑蓝比色法(MTT)检测药物对Hep-2细胞的增殖抑制作用并计算IC50值;利用软琼脂克隆形成实验观察细胞的锚定非依赖性生长能力;选用Hoechst33258染色法观察细胞凋亡的形态学变化;用ROS检测试剂盒分析药物对细胞活性氧水平的影响;以实时荧光定量PCR技术(Realtime-PCR)检测细胞凋亡相关因子Bcl-2及Bax mRNA水平的表达变化。结果 MC002及PG490均对体外培养的人喉癌Hep-2细胞有增殖抑制作用,且具有剂量依赖性,IC50值分别为183.58nmol/L和119.35nmol/L,而且两种药物可以抑制细胞的锚定非依赖性生长能力;此外,MC002及PG490可以降低ROS水平,并且使凋亡相关因子BaxmRNA表达上调,Bcl-2mRNA表达下调。结论 MC002具有与PG490相同的作用,可以抑制人喉癌细胞株Hep-2的生长,诱导人喉癌Hep-2细胞凋亡,其机制可能与调节凋亡相关因子Bcl-2、Bax及ROS的表达有关。     

人冠状病毒229E寒湿疫毒袭肺证病证结合小鼠模型的建立及评价

目的 建立人冠状病毒229E(hCoV-229E)寒湿疫毒袭肺证病证结合小鼠模型,观察其中医证候、疾病表现与病毒性肺炎典型临床表现的一致性,验证该模型在药效评价中的可靠性.方法 将BALB/c幼龄小鼠置于具有寒湿环境的人工气候箱中,并叠加hCoV-229E滴鼻感染的方法建立小鼠模型,以仅进行感染、仅置于寒湿环境、正常饲...     

复方芩兰口服液对人冠状病毒肺炎疫毒袭肺证的治疗作用

研究省级新型冠状病毒肺炎中医药防治方案推荐用药复方芩兰口服液对BALB/c小鼠人冠状病毒肺炎疫毒袭肺证的治疗作用,并初步探讨其在新型冠状病毒肺炎临床治疗中的作用,为中医药临床提供实验室数据支持。该研究根据国家主管部门对新型冠状病毒肺炎中医病证的分类,确定在寒湿证小鼠模型基础上感染人冠状病毒229E(HCoV-229E),形成人冠状病毒肺炎疫毒袭肺证病证结合模型,该模型可模拟《新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第六版)》中医治疗普通型病证。具体步骤如下:建立寒湿证小鼠模型,在此模型基础上感染HCoV-229E病毒,实验分为正常对照组,感染对照组,寒湿对照组,寒湿感染组(模型组),复方芩兰口服液高(22 mL·kg^-1·d^-1)、低(11 mL·kg^-1·d^-1)剂量组。感染当天给予复方芩兰口服液治疗,连续给药3 d。末次给药第2天解剖取肺组织,计算肺指数及抑制率;提取肺组织核酸,RT-PCR法检测病毒载量;分离血液白细胞,流式细胞术检测T和B淋巴细胞百分比;提取肺组织蛋白,ELISA法检测IL-6,IL-10,TNF-α及IFN-γ含量;分离血清,ELISA法检测胃泌素、胃动素含量;组织病理学检测肺组织病变。结果显示,复方芩兰口服液高、低剂量能显著降低人冠状病毒肺炎疫毒袭肺证小鼠的肺指数(P<0.01),抑制率分别为59.01%,47.72%;显著降低人冠状病毒肺炎疫毒袭肺证小鼠的肺组织病毒载量(P<0.01);显著升高人冠状病毒肺炎疫毒袭肺证小鼠外周血CD4^+ T淋巴细胞、CD8^+ T淋巴细胞及总B淋巴细胞百分比(P<0.01);显著降低人冠状病毒肺炎疫毒袭肺证小鼠的血清胃动素(MTL)含量(P<0.01);显著降低人冠状病毒肺炎疫毒袭肺证小鼠肺组织中IL-6,IL-10,TNF-α及IFN-γ含量(P<0.01);明显改善肺组织炎症。复方芩兰口服液对小鼠人冠状病毒肺炎疫毒袭肺证有较好的疗效,可能通过抑制肺组织病毒复制,改善胃肠道功能,增强机体免疫能力,降低肺细胞炎性因子表达发挥作用。     

BN大鼠和豚鼠对卵清白蛋白致主动过敏反应的免疫学特性比较

目的比较BN大鼠和豚鼠对卵清白蛋白(OVA)致敏前后机体免疫学特性的变化。方法BN大鼠和豚鼠分别用OVA(每只1 mg)隔日致敏(i.p.),共5次；于末次致敏第10天以OVA(每只2 mg)激发致敏(i.v.)；分别设正常对照组和OVA致敏组。于激发致敏后1 h处死动物,分离腹腔肥大细胞、脾脏和骨髓,并制备脾脏和骨髓淋巴细胞。以annexin-V作为标志检测肥大细胞活性,同时以Fluo-3/AM标记胞内钙离子,检测钙离子水平；以PHA和LPS作为有丝分裂原,分别检测脾脏和骨髓T、B淋巴细胞活性。结果①致敏BN大鼠和豚鼠脾脏及骨髓T、B淋巴细胞活性均升高,其中骨髓淋巴细胞活性BN大鼠显著高于豚鼠,脾脏淋巴细胞活性两种属间差异无显著性；②致敏后,腹腔肥大细胞活性两种属间差异无显著性,但BN大鼠致敏后是致敏前的6倍,豚鼠是3倍；③肥大细胞内钙离子水平两种属致敏后均升高,豚鼠致敏前后钙离子水平具有统计学意义。结论OVA致敏后,BN大鼠骨髓淋巴细胞活性明显高于豚鼠,豚鼠肥大细胞内钙离子较BN大鼠升高明显,肥大细胞活性两者无明显差异。因此,在实验中可以根据两种属在过敏反应中的特点以及具体的实验要求选择动物模型。     

解痉汤治疗动脉瘤性蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛临床研究*

目的:探讨中药解痉汤对动脉瘤性蛛网膜下腔出血(SAH)后脑血管痉挛(CVS)患者血管性血友病因子(vWF)和内皮素水平的影响。方法:纳入继发性动脉瘤性SAH后CVS患者74例,随机分为对照组(36例)和治疗组(38例)。对照组采用西药治疗,治疗组在对照组基础上同时口服解痉汤。vWF定量分析基于酶联免疫吸附测定(ELISA)检测; 内皮素检测采用放射免疫分析。采用Fisher分级法判断患者脑出血情况及TCD检查衡量CVS程度。结果:治疗后两组临床症状、Fisher分级、大脑中动脉平均流速(MCA-Vm)和颈内动脉颅外段平均流速(VICA-Vm)和Lindegaard指数均显著改善,vWF和内皮素均显著降低,治疗前后组间比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。同时,组间治疗后比较发现,治疗组各指标的改善明显优于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。且治疗组vWF浓度和内皮素含量与于脑血管痉挛程度相关性分析提示,二者水平与脑血管痉挛程度呈正相关(P<0.05)。结论:中药解痉汤可改善动脉瘤性SAH后CVS的临床症状、缓解颅内出血及血管痉挛、并降低vWF和内皮素水平进而改善患者血管内皮细胞功能。     

不同条件下 Propex 全自动根尖定位仪定位水平斜行根折位置准确性的体外研究

目的采用体外模型研究 Propex 全自动根尖定位仪在不同环境下定位水平斜行根折位置的准确性。方法选取30颗离体前磨牙,采用金刚砂车针从牙根中下段颊侧面以65°的角度斜向冠方破坏牙根,根管暴露即停止切磨且保证根管断面距根尖8 mm ,建立水平斜行根折体外模型。然后用 Propex 根尖定位仪分别于0．9％生理盐水、3％双氧水、17％乙二胺四乙酸（EDTA）3种条件下测量根折位置。对测量结果采用χ2检验进行统计学分析。结果 Propex 全自动根尖定位仪在0．9％生理盐水、3％双氧水、17％ EDTA 条件下测得的准确率分别是83．33％,86．67％,80．00％,虽然3种液体环境下测得的准确率不同,但这种差异没有统计意义（P ＞0．05）。结论 Propex全自动根尖定位仪能够比较准确定位水平斜行根折的位置,且不受液体环境影响。     

不同工艺感冒灵流膏治疗流感体内药效学试验研究

目的：采用甲型H1N1流感病毒感染小鼠肺炎模型评价不同工艺感冒灵流膏对流感的治疗作用,为临床治疗流感的应用提供试验依据。方法：采用甲型H1N1流感病毒FM1和PR8株分别感染正常动物造成肺炎模型,新工艺大、中、小剂量分别为1.8,0.9,0.45 g生药·kg^-1·d^-1（分别相当于人临床用药量的2倍、等倍和1/2倍）,原工艺小鼠剂量为1.34 g生药·kg^-1·d^-1（相当于人临床用药量的2倍）,醇沉沉淀小鼠用量为0.48 g生药·kg^-1·d^-1（相当于人临床用药量的2倍）,感染当天给药4 d,观察不同工艺感冒灵流膏对肺指数、死亡率、死亡保护率、平均存活天数和生命延长率的影响,并测定血清中免疫球蛋白M（IgM）含量以及肺组织中病毒载量和γ干扰素（IFN-γ）含量,进行机理的探索性研究。结果：FM1和PR8株感染正常小鼠造成肺炎模型,感染当天给予感冒灵浸膏治疗4 d后,FM1株新工艺大、中剂量组和原工艺组肺指数均有明显降低（P〈0.05、P〈0.01）;PR8株新工艺大剂量组和原工艺组肺指数明显降低（P〈0.05）;FM1株新工艺大、中剂量组和原工艺组均可显著降低小鼠肺组织中病毒载量,与模型对照组比较差异有统计学意义（P〈0.01）;各工艺药物对FM1模型小鼠血清IFN-γ含量和IgM含量无明显影响（P〉0.05）。对PR8株模型新工艺大、中、小、原工艺和醇沉部分各给药组均可提高肺组织IFN-γ含量（P〈0.05,P〈0.01）。新工艺大、中、小3个剂量和原工艺组可明显减少FM1和PR8株感染动物的死亡数,并可明显延长动物存活天数（P〈0.05、P〈0.01）;醇沉沉淀对PR8株模型有一定程度延长动物存活天数的作用（P〈0.05）。结论：新工艺及原工艺制剂对FM1和PR8株感染小鼠肺炎均有明显治疗作用;醇沉部分也有一定的治疗作用。     

金柴抗病毒胶囊对IFITM3蛋白表达的影响

探讨金柴抗病毒胶囊对甲型H1N1流感病毒FM/1/47株感染小鼠肺炎模型的治疗作用机制。滴鼻感染正常小鼠,建立流感病毒肺炎模型并进行治疗性给药。采用实时荧光定量PCR法、Western blot在流感病毒感染后第1、3、5、7天检测小鼠肺组织中病毒载量、干扰素诱导跨膜蛋白的动态变化。实验结果显示,金柴抗病毒胶囊可降低肺组织病毒载量,其中大、中、小3个剂量组在病毒感染正常小鼠后各检测时间点均能明显降低肺组织中病毒载量的表达(P<0.05,P<0.01)。金柴抗病毒胶囊可上调干扰素诱导跨膜蛋白相对表达量。与模型对照组比较,其中大剂量在各个时间点均明显高表达(P<0.05,P<0.01),中剂量在第3、5天具有明显高表达(P<0.05);小剂量组在第3天表现显著高表达(P<0.05)。实验结果表明:金柴抗病毒胶囊可能通过上调流感病毒感染小鼠肺组织内干扰素诱导跨膜蛋白表达量来发挥抗流感病毒的作用。     

补气通络解毒方联合GEMOX方案对中晚期胰腺癌CT影像学变化的影响

目的 观察补气通络解毒方联合GEMOX(吉西他汀+奥沙利铂)方案治疗对中晚期胰腺癌(PC)CT影像学变化的影响。方法 将我院60例中晚期PC患者随机分为治疗组与对照组各30例。对照组采用GEMOX方案治疗,治疗组采用补气通络解毒方联合GEMOX方案治疗。比较两组客观有效率(RR)、卡氏评分(KPS)评分、糖链蛋白(CA)19-9、CA424、癌胚抗原(CEA)、证候和副反应量表(TESS)评分以及平扫、动脉期、延迟期CT值。结果 治疗后,治疗组RR与对照组比较无统计学差异(P>0.05);治疗组KPS评分好转率高于对照组(P<0.05);两组CA19-9、CA424、CEA水平低于治疗前,治疗组CA19-9、CA424、CEA水平低于对照组(P<0.05);两组证候评分降低,TESS评分增加,治疗组证候评分低于对照组,TESS评分高于对照组(P<0.05);两组平扫、动脉期、延迟期CT值低于治疗前,治疗组平扫、动脉期、延迟期CT值低于对照组(P<0.05)。结论 补气通络解毒方联合GEMOX方案治疗中晚期PC患者疗效较好,能显著提高患者体力状况,降低肿瘤标...     

参味宁郁片对慢性束缚应激大鼠海马TLR4/MyD88信号通路介导免疫炎症的影响

目的 探究治疗抑郁症中药新药参味宁郁片对抑郁模型大鼠行为学及海马Toll样受体4（TLR4）/髓样分化因子88（MyD88）信号通路介导免疫炎症的影响。方法 将44只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、艾司西酞普兰组和参味宁郁片组。除正常组外,其余各组大鼠均采用慢性束缚应激（CRS）结合孤养建立抑郁症模型、持续接受21 d CRS刺激;艾司西酞普兰组每日在CRS应激前1 h给予艾司西酞普兰（30 mg·kg^-1）灌胃给药;参味宁郁片组每日在CRS应激前1 h给予参味宁郁片（18 mg·kg^-1）灌胃干预。实验前、后通过体质量变化、糖水实验、旷场实验测试,观察各组大鼠体质量、糖水偏好指数、水平运动评分、垂直运动评分变化;采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测海马TLR4,MyD88蛋白表达水平,应用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清炎性因子白细胞介素-1β（IL-1β）,白细胞介素-10（IL-10）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量变化。结果 行为学结果显示,实验前,各组大鼠行为学基线水平具有一致性、各组均值差异无统计学意义。随着时间推移应激负荷增加,与正常组比较,模型组大鼠在接受CRS应激21 d后体质量、糖水偏好指数、水平运动评分和垂直运动评分均显著降低（P?0.01）,与模型组比较,参味宁郁片组和艾司西酞普兰组大鼠体质量、糖水偏好指数、水平运动评分和垂直运动评分均显著升高（P?0.01）,参味宁郁片表现出明显的抗抑郁效应;Western blot和ELISA结果显示,与正常组比较,模型组大鼠海马TLR4,MyD88蛋白及血清炎性因子IL-1β,TNF-α含量显著升高（P?0.01）,血清IL-10含量降低（P?0.01）,而与模型组比较,参味宁郁片组和艾司西酞普兰组有效逆转了应激诱导的海马TLR4,MyD88蛋白及血清炎性因子IL-1β含量显著升高、血清IL-10含量降低情况,差异具有统计学意义（P?0.01）。结论 治疗抑郁症中药新药参味宁郁片对慢性应激诱导抑郁症的抗抑郁作用可能是通过抑制海马TLR4/MyD88信号通路介导的免疫炎性反应途径有关。