SIRT1/eNOS/NO通路在人参皂苷Rb1抗内皮细胞复制性衰老中的作用

目的:观察人参皂苷Rb1延缓人脐静脉内皮细胞(HUVECs)复制性衰老的作用,并探讨SIRT1/e NOS/NO通路在其中的作用机制。方法:建立原代HUVECs复制性衰老模型,根据细胞形态的变化、衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色阳性率和纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)的表达水平评估HUVECs衰老情况;采用real-time PCR方法和Western blot法检测沉默SIRT1前后衰老细胞中e NOS和PAI-1的mRNA和蛋白表达,并检测细胞上清NO的含量。结果:累积细胞群体倍增水平(CPDL)为16的HUVECs可作为复制性衰老模型; 80μmol/L人参皂苷Rb1处理后衰老细胞内SIRT1和eNOS的mRNA及蛋白表达水平增加,NO含量增加(P 0. 05),而PAI-1的mRNA和蛋白表达水平下降(P 0. 05);沉默SIRT1后,衰老细胞内e NOS的mRNA及蛋白表达减少,PAI-1的mRNA及蛋白表达增加,NO含量减少(P 0. 05);与SIRT1沉默组比较,在沉默SIRT1基础上加用人参皂苷Rb1后,e NOS和PAI-1表达水平及NO的含量未见明显变化。结论:人参皂苷Rb1可通过调控SIRT1/e NOS/NO通路延缓HUVECs复制性衰老。     

当归多糖对D-半乳糖致小鼠胰腺损伤的保护作用

目的 探讨当归多糖（ASP）对D-半乳糖（D-gal）致小鼠胰腺损伤的保护作用。 方法 雄性C57BL/6 J 小鼠随机分为3组,每组10只。D-gal组: 小鼠皮下注射- gal (120 mg/kg, qd×42 d）; ASP+D-gal组: D-gal注射时间与剂量同D-gal模型组,从模型复制第16天起,腹腔注射ASP(40 mg/kg,qd×27 d）;正常对照组: 小鼠皮下注射等量与等时的生理盐水。各组给药完成后第2天检测相关指标,取外周血检测空腹血糖含量并行口服葡萄糖耐量测定（OGTT）;取胰腺称湿重计算脏器指数;制备石蜡切片,HE染色观察胰腺组织病理结构,图像分析法计数胰岛内有核细胞数和相关面积;制备胰腺组织匀浆,检测丙二醛(MDA)含量和总抗氧化能力（T-AOC）。 结果 从注射D-gal第16天开始,腹腔注射ASP共27 d（ASP+D-gal组）,小鼠胰腺湿重与脏器指数明显降低,组织病理损伤减轻;空腹血糖显著下降;在30 min和120 min的OGTT水平差别不明显;OGTT曲线下面积（AUC）降低;胰岛内有核细胞数减少,单个细胞面积减小;T-AOC活性上升,MDA含量下降。 结论 D-gal可致胰腺结构损伤和功能衰退,ASP能拮抗D-gal从而减轻对胰腺的损伤,其机制可能与减轻氧化损伤有关。     

老年人的疼痛问题

何为“老”？理解衰老的最好办法是将其视为一种从生到死的过度和渐变过程。在人们眼中，一旦到了80岁，身体就会变得很衰弱，易受伤，易残疾。但凡事都有例外，最典型的例子就是著名的黑人领袖纳尔逊曼德拉，他虽年事已高（88岁），但他的才学、智慧、饱经磨难和乐观豁达都是少有人能及的。近年来人们开始关注如何成功地安度晚年，但是对于老年人的疼痛问题却关注不足，这或许与衰老过程的复杂性和多变性有关，但老年人的疼痛的确是一件必须提到议事日程上来的大事。     

小鼠皮肤超氧化物歧化酶活性与枸杞多糖的干预

目的:观察枸杞多糖对皮肤胶原代谢和自由基产生的影响,探讨其抗皮肤衰老的作用。方法:实验于2005-06/2006-05在广东医学院整形外科研究所完成。①实验材料:清洁级昆明小鼠60只,月龄2个月,体质量16～24g,雌雄各半。②实验分组:将小鼠随机分为正常对照组、衰老模型组和抗衰老模型组,每组20只。③实验干预:模型组每日用D-半乳糖溶液皮下注射制造衰老模型,用量和时间为80mg/(kg·d)7d,120mg/(kg·d)14d,140mg/(kg·d)14d,180mg/(kg·d)7d。正常对照组每日注射同体积的生理盐水。抗衰老模型组在注射D-半乳糖期间以枸杞多糖灌胃,剂量为20mg/(kg·d),正常对照组和衰老组则以同体积的生理盐水代之灌胃。④实验评估:42d后切取小鼠颈背部皮肤,测定超氧化物歧化酶活力、羟脯氨酸和丙二醛含量。结果:56只小鼠进入结果分析(4只死亡)。①小鼠皮肤超氧化物歧化酶活力:与正常对照组相比,衰老组和抗衰老组小鼠皮肤超氧化物歧化酶活力降低,差异有显著性意义(P<0.01);抗衰老组与衰老模型组比较,超氧化物歧化酶活力增加,差异有显著性意义(P<0.01)。②与正常对照组相比,衰老组和抗衰老组小鼠皮肤羟脯氨酸和丙二醛含量增加,差异有显著性意义(P<0.01);抗衰老组与衰老组比较,羟脯氨酸和丙二醛含量均降低,差异有显著性意义(P<0.01)。结论:枸杞多糖改善皮肤老化的作用与提高小鼠皮肤超氧化物歧化酶活力,降低羟脯氨酸、丙二醛含量,影响胶原代谢有关。     

儿茶素对拟衰老大鼠耳蜗氧自由基生成的影响

【目的】观察儿茶素对衰老大鼠动物模型耳蜗氧自由基生成的影响,初步探讨儿茶素对听觉老化的保护效应及其机制。【方法】通过腹腔注射D-半乳糖（D-gal）建立大鼠衰老动物模型,以腹腔注射生理盐水为阴性对照组,检测其听觉脑干诱发电位（ABR）明确衰老动物听力减退情况,检测大鼠耳蜗组织丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性;并观察胃内灌注儿茶素后衰老动物模型上述指标的变化。【结果】衰老模型组大鼠与对照组大鼠相比较,ABR阈值增高,耳蜗组织中MDA含量明显增高,SOD活性明显降低（P〈0.05）;儿茶素保护组大鼠耳蜗组织中MDA含量和SOD活性水平较对照组无变化（P〉0.05）,而与衰老模型组相比却逆转上述指标变化,并能提高听力（P〈0.05）。【结论】氧自由基及其引发的脂质过氧化反应参与了听觉老化过程,儿茶素可能通过提高SOD活性、减少MDA生成发挥清除自由基抗氧化作用,从而改善听觉功能。     

中药天年饮对衰老大鼠脾淋巴细胞增殖转化能力的影响

目的:观察中药天年饮对衰老大鼠抗氧化能力、脾淋巴细胞增殖转化能力及免疫器官指数的影响。方法:实验于2006-04/07在承德医学院基础医学研究所完成。选择清洁级4月龄雄性SD大鼠40只,按随机数字表法分为4组:正常对照组、衰老模型组、天年饮用药组和阴性对照组,每组10只。正常对照组大鼠常规饲养,自由摄食、饮水。衰老模型组、天年饮用药组和阴性对照组大鼠均采用D-半乳糖连续腹腔注射制备亚急性衰老的大鼠模型。衰老模型组大鼠造模成功后不再做任何处理;天年饮用药组大鼠造模成功后每天用天年饮(由炙何首乌、怀牛膝、肉从蓉、淫羊藿、丹参、茯苓等6味中药组成,经熬制后含生药1.5g/mL,购自承德医学院附属肛肠医院)灌胃(8.1g/kg),共30d;阴性对照组大鼠在造模成功后每天用同等剂量的生理盐水灌胃,时间同天年饮用药组大鼠。造模后30d采用噻唑蓝法检测脾淋巴细胞的增殖转化能力,同时分别检测大鼠血清超氧化物歧化酶活性、丙二醛含量以及大鼠的胸腺指数和脾脏指数。结果:纳入动物40只,均进入结果分析。①衰老模型组大鼠血清超氧化物歧化酶活性低于正常对照组、丙二醛含量高于正常对照组,差异有显著性意义[分别为(1.77±0.16),(2.48±0.22)mkat/L,t=2.613,P<0.05;(447.70±31.20),(267.54±40.82)nmol/L,t=11.088,P<0.01];天年饮用药组大鼠血清超氧化物歧化酶活性高于衰老模型组、丙二醛含量低于衰老模型组,差异有显著性意义[分别为(2.33±0.26),(1.77±0.16)mkat/L,t=-2.258,P<0.05;(276.32±23.30),(447.70±31.20)nmol/L,t=13.917,P<0.01]。②衰老模型组大鼠胸腺指数、脾脏指数和脾淋巴细胞的增殖转化能力(A)低于正常对照组,差异有显著性意义(分别为0.0775±0.0309,0.1239±0.0436,t=2.745,P<0.05;0.347±0.099,0.466±0.108,t=2.568,P<0.05;0.388±0.054,0.470±0.063,t=3.125,P<0.01);天年饮用药组大鼠胸腺指数、脾脏指数和脾淋巴细胞的增殖转化能力(A)高于衰老模型组,差异有显著性意义(分别为0.1130±0.0456,0.0775±0.0309,t=2.238,P<0.05;0.451±0.111,0.347±0.099,t=2.211,P<0.05;0.447±0.061,0.388±0.054,t=2.2902,P<0.05)。结论:中药天年饮可提高机体的抗氧化能力及免疫功能,具有延缓衰老的作用。     

东兰墨米对亚急性衰老模型小鼠的抗衰老作用

目的:通过观察东兰墨米对D-半乳糖致衰老小鼠的血清、肝脏、大脑中超氧化物歧化酶活力、丙二醛含量、谷胱甘肽过氧化物酶活性及抗耐氧时间、抗疲劳时间的影响,探讨东兰墨米对亚急性衰老模型小白鼠抗衰老作用。方法:实验于2005-07在右江民族医学院应用生理研究室完成。选择健康昆明种小白鼠108只,随机分为正常对照组、衰老模型组、衰老加墨米组3组;衰老模型组皮下注射D-半乳糖100mg/(kg·d)(D-半乳糖由美国Amresco公司生产),并用与墨米混悬液(东兰墨米为市购,加双蒸水配制成0.26g/mL混悬液)等剂量的生理盐水灌胃,连续28d。正常对照组每日皮下注射与D-半乳糖等剂量生理盐水,并用与墨米混悬液等剂量的生理盐水灌胃,连续28d。衰老加墨米组皮下注射D-半乳糖100mg/(kg·d),并用东兰墨米混悬液,按100g/kg剂量给药,每天分两次灌胃,连续28d。然后分别测定血清、肝脏、大脑中超氧化物歧化酶活力、丙二醛含量、谷胱甘肽过氧化物酶活性;以及进行抗耐氧试验、抗疲劳试验。结果:纳入动物108只,进入结果分析108只。在建立动物衰老模型过程中有5只死亡,后随机补充动物。①衰老加墨米组血清、大脑、肝脏中超氧化物歧化酶活力与模型衰老组相比,均明显升高[(201.64±38.81),(233.49±33.12)U/mL;(147.68±39.18),(189.88±47.29)U/mg;(176.89±17.22),(196.52±22.74)U/mg;t=2.162,2.380,2.384,P<0.05]。②衰老加墨米组血清、大脑、肝脏中丙二醛含量与衰老模型组相比,均明显下降[(5.92±0.81),(5.18±0.69)μmol/L;(18.98±2.54),(16.55±2.30)μmol/g;(6.66±0.49),(6.09±0.54)μmol/g;t=2.415,2.455,2.705,P<0.05]。③衰老加墨米组血清、大脑、肝脏中谷胱甘肽过氧化物酶活性与衰老模型组相比,均明显升高,分别为[(131.94±21.49),(151.97±21.99)U/mL;(115.86±17.64),(134.09±19.29)U/mg;(115.83±13.54),(131.18±16.73)U/mg;t=2.158,2.417,2.471,P<0.05]。④衰老加墨米组耐缺氧时间、游泳时间与衰老模型组相比,明显升高[(10.19±1.02),(11.18±0.87)min;(18.71±2.45),(20.90±1.24)min;t=2.547,2.761,P<0.05]。结论:东兰墨米具有较好的清除自由基,降低丙二醛含量,提高超氧化物歧化酶活力、谷胱甘肽过氧化物酶活性,增强抗耐氧、抗疲劳的作用;具有抗衰老作用。     

枸杞多糖对D-半乳糖致衰老模型大鼠肝脏DNA修复酶8-羟基鸟嘌呤糖苷酶表达的影响

目的:观察不同剂量枸杞多糖对D-半乳糖致衰老模型大鼠8-羟基鸟嘌呤糖苷酶表达的影响。方法:实验于2005-03/08在黑龙江省佳木斯大学生物化学教研室完成。①选用纯系Wistar大鼠40只。随机将大鼠分为4组:衰老组,枸杞多糖大剂量组,枸杞多糖中剂量组,枸杞多糖小剂量组,每组10只。衰老模型对照组:正常饮食,每日上午颈背部皮下按48mg/kg注射D-半乳糖,同时灌服温开水;枸杞多糖小剂量组、枸杞多糖中剂量组、枸杞多糖大剂量组:每组均正常饮食,除每日上午颈背部皮下按48mg/kg注射D-半乳糖外,同时分别按10,50,100mg/kg灌服枸杞多糖(市售枸杞多糖,用双蒸水分别制成10,50,100g/L溶液),连续给药45d。②用Trizol法提取肝组织核酸,反转录聚合酶链反应及凝胶成像技术检测8-羟基鸟嘌呤糖苷酶的mRNA表达水平。③计量资料差异比较采用方差分析和q检验。结果:大鼠40只均进入结果分析。大鼠肝脏组织的8-羟基鸟嘌呤糖苷酶mRNA表达水平:枸杞多糖小、中、大剂量组均明显低于衰老模型组(1.129±0.03,0.919±0.044,0.903±0.043,1.233±0.042,P<0.05),且随剂量的增加,呈下降趋势,枸杞多糖中剂量和大剂量组之间差异不明显。结论:枸杞多糖可以通过降低氧化损伤,减少DNA损伤,继而使修复酶8-羟基鸟嘌呤糖苷酶的表达下降而发挥抗衰老的作用。     

衰老对离体大鼠主动脉内皮依赖性血管舒张反应的影响

目的研究增龄对离体大鼠主动脉内皮依赖性舒张的影响. 方法成年及老年大鼠各 20只,利用组织器官水浴系统,通过乙酰胆碱、 N 硝基左旋精氨酸,测量离体主动脉环的舒张反应变化(%).同时利用免疫组织化学方法观察诱导型一氧化氮合酶( inducible nitricoxide synthase, iNOS )和内皮型一氧化氮合酶( endothelial nitricoxide synthase , eNOS)在不同年龄大鼠主动脉中的表达. 结果 ①老年组大鼠主动脉环对 1× 10- 8, 1× 10- 7, 1× 10- 6, 1× 10- 5, 1× 10- 4 mol/L乙酰胆碱诱发的内皮依赖舒张反应 [(3.13± 0.85)% ,(12.60± 2.18)% ,(25.23± 4.63)% ,(37.73± 6.95)% ,(50.78± 3.58)% ]均较成年组明显减弱,两组之间有显著差异( P< 0.01).②离体大鼠主动脉环环经 1× 10- 4 mol/L NNLA预处理 20 min,阻断一氧化氮合酶( nitricoxide synthase , NOS)后,同样剂量的乙酰胆碱不再诱发上述内皮依赖性舒血管反应.③ eNOS组在老年组血管内膜层可见棕褐色的阳性反应颗粒 120.524± 2.037,但较成年组相比,可发现阳性反应明显减弱. iNOS组成年组内膜及中膜层可见较弱的棕褐色阳性反应颗粒沉在老年组 (112.371± 1.64),阳性反应明显增强. 结论 随增龄,血管内皮分泌的一氧化氮逐渐减少,导致血管内皮依赖性舒张减弱 ;NOS的异常表达对一氧化氮减少起着重要的作用, eNOS随增龄表达减弱,而 iNOS 随增龄表达则明显增强.     

脱氢表雄酮对衰老大鼠体质量和学习记忆的影响

目的：观察脱氢表雄酮对D-半乳糖致亚急性衰老模型大鼠体质量和学习记忆损害的影响。 方法：实验于2003—11／2004—12在中国医学科学院完成。①分组及模型制备：24只SD大鼠随机分为D-半乳糖组和药物治疗组，每组12只。动物经皮下注射D-半乳糖100mg／kg，1次／d，共56d制备亚急性衰老模型。②给药方法：药物治疗组动物同时腹腔注射脱氢表雄酮30mg／kg、隔日一次，共28次。D-半乳糖组注射等剂量生理盐水。③检测指标：各组大鼠每周定时测量体质量1次。采用Morris水迷宫法测定各组大鼠定位航行试验逃避潜伏期、在平台象限游泳距离和时间占各象限游泳总计距离、时间的百分比，评估大鼠学习记忆功能。 结果：24只大鼠均进入结果分析。①治疗后药物治疗组动物体质量增加百分比显著低于D-半乳糖组（6．23％，13．04％，P〈0．001）。②药物治疗组大鼠水迷宫试验逃避潜伏期明显低于D-半乳糖组（F=557．96，〈0．001）。平台象限游泳距离、时间占各象限游泳总计距离、时间百分比明显高于D-半乳糖组[（55.4&;#177;3．4）％，（28．2&;#177;2.3）％；（57．6&;#177;4．1）％，（28．5&;#177;3．0）％]（P〈0．001）。 结论：脱氢表雄酮能够降低D-半乳糖所致的亚急性衰老模型大鼠体质量．改善衰老动物学习记忆功能。