CIK细胞体外逆转多药耐药性的研究

目的:研究CIK细胞体外逆转多药耐药(multidrug resistance,MDR)可行性。方法:用人外周血分离出的单个核细胞,在不同细胞因子诱导下培养成细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer,CIK)及树突状细胞(DC),然后将其与成熟DC进行共培养,作为效应细胞,以K562敏感株与耐药细胞株为靶细胞进行体外逆转研究。流式细胞术检测靶细胞的P-gp表达及细胞内的ADR相对含量,MTT法测定其细胞毒作用,RT-PCR检测mdr-1基因耐药性逆转表达状况。结果:K562/ADR耐药细胞株ADR含量经效应细胞细胞作用后,细胞内的ADR含量分别提高了13.80%、39.50%,(P<0.01);,P-gp分别降低12.00%、42.69%,(P<0.01),mdr-1基因表达呈下调趋势,效应细胞对靶细胞的细胞毒作用分别达45.8%、78.9%,(P<0.01)。结论:CIK+K562/ADR-DC对P-gp高表达K562/ADR耐药细胞株具有特异性的细胞毒作用,有效提高了细胞内的ADR含量,下调了P-gp、mdr-1表达,使免疫效应细胞体外逆转多药耐药的效果得以显现。     

应用自动磁性细胞分选器分选人CD_4~+CD_(25)~+调节T细胞

目的:建立应用自动磁性细胞分选器(autoMACS)分选人CD4+CD2+5免疫调节T细胞(Tregs)的方法。方法:应用密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞,应用autoMACS分选其中的CD4+CD2+5T细胞,流式细胞技术检测分选细胞的纯度。结果:分别从5.7×107及5.6×107外周血单个核细胞中分选出6.9×105及6.7×105个CD4+CD2+5T细胞,其纯度>98%。结论:应用autoMACS可高效分选出高纯度的CD4+CD25+T细胞,为深入研究其功能打下了基础。     

人骨髓瘤细胞RPMI 8226的生物学特性

目的观察人骨髓瘤细胞RPMI 8226的生物学特性。方法光镜下观察RPMI 8226细胞形态、生长特点、体外克隆形成率;流式细胞仪分析其免疫表型、周期分布、多药耐药蛋白P-170和ABCG2的表达情况;MTT法分析其药物敏感性;PCR-SSP法检测HLA-Ⅰ类分子基因型;动物实验观察成瘤情况。结果 RPMI 8226细胞呈圆形,悬浮生长,细胞体积较大,细胞群体倍增时间为24.48 h。14 d和21 d时的克隆形成率分别为（10.27&#177;1.38）%、（42.56&#177;2.98）%。RPMI 8226细胞表达CD38、CD138和CD49e,不表达CD20、CD19、CD11a、CD3、CD13、κ、λ。RPMI 8226细胞周期为：G0/G1期细胞占（57.64&#177;2.31）%,S期细胞占（35.75&#177;1.18）%、G2/M期细胞占（6.73&#177;0.21）%;P-170和ABCG2表达率分别为（2.27&#177;0.35）%、（1.33&#177;0.26）%。RPMI 8226细胞对ADM、VCR、DDP、VP16和MMC药物的IC50分别为（0.56&#177;0.06）、（0.92&#177;0.10）、（1.17&#177;0.32）、（1.83&#177;0.16）和（4.91&#177;0.84）μmol/L。染色体数目在43－49之间。HLA-Ⅰ基因型为A19,19;B 15,37;Cw02,02。BALB/c裸鼠皮下接种1&#215;107个细胞可以成瘤,病理证实为浆细胞瘤。结论 RPMI 8226细胞具有多发性骨髓瘤细胞的特点,可以用于基础和临床研究。     

磨痂保留变性真皮自体皮片移植修复手深度烧伤的研究

目的探讨磨痂保留变性真皮自体皮片移植修复手深度烧伤的可行性。方法31名烧伤患者，双手为深Ⅱ、混合度（混合深Ⅱ度、Ⅲ度）烧伤。在同体中设立磨痂组（31只手），用自制的医用烧伤磨痂器磨痂保留变性真皮，移植自体薄中厚皮片；削痂组（31只手），上止血带，用辊轴刀削痂，移植自体中厚皮片。观察两组患者术中出血量、手术时间、皮片成活率、供皮区愈合情况、组织病理学、自制医用烧伤磨痂器的使用情况、外形与功能情况。结果磨痂组术中失血量与削痂组比较无差异性（P〉0．05）；手术时间明显缩短（P〈0．01）；皮片成活率高（P〈0．05）；外形及功能满意（P〈0．05）；磨痂组供皮区愈合时间较削痂组明显缩短（P〈0．01）。组织病理学检查示，磨痂保留的创基基本无坏死组织残留，保留的真皮为玻璃透明样变性。自制的医用烧伤磨痂器结构简单、使用方便、不需电源、造价低廉、效率较高。结论磨痂保留变性真皮自体皮片移植修复手深度烧伤可作为手深度烧伤微创治疗方法的常规术式，值得推广应用。自制的医用烧伤磨痂器结构简单、使用方便、造价低廉、效率较高，可作为磨痂术的常用手术器械。     

痔结扎器胶圈弹力研究

痔胶圈套扎治疗是近年来推荐使用的方法[1] ,其原理是完全阻断被结扎组织的血液并维持足够长的时间 ,从而引起被结扎组织干性坏死 ,结扎组织脱落、修复并为疤痕组织代替。该方法简单方便 ,是目前治愈率最高的非手术治疗法[2 ] ,但该方法易出现术后疼痛和出血 ,目前研究表明其发生与胶圈弹力有关[3] 。为此 ,我们设计了新型的结扎胶圈 ,并进行了弹力方面的研究 ,现将结果报告如下。1　材料和方法1·1　材料　电筒式负压吸引痔结扎器[4 ] 。胶圈 :配方由硅橡胶、天然胶和硫化系统组成 ,按一定配比生产 ,无毒、无害、无特殊气味[5] 。1·2　方…     

细胞因子诱导杀伤细胞联合阿霉素逆转多药耐药的研究

目的:探讨细胞因子诱导杀伤细胞联合阿霉素逆转多药耐药的可能性及其机制。方法:以人外周血分离单个核细胞后进行体外诱导、扩增作为效应细胞,联合不同浓度的阿霉素与其耐药靶细胞K562/ADR进行共培养,经四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法计算半数抑制浓度(IC50)、耐药倍数和逆转倍数;流式细胞仪检测细胞内阿霉素相对含量和P糖蛋白表达水平;RT-PCR检测mdr-1基因mRNA表达。结果:未经细胞因子诱导杀伤细胞联合阿霉素处理时,阿霉素对K562和K562/ADR的IC50分别为(0.68±0.04)μmol/L和(66.23±4.38)μmol/L;K562/ADR对阿霉素的耐药倍数为97.43倍;经细胞因子诱导杀伤细胞联合阿霉素处理48 h(效靶比1∶5、阿霉素1.1μmol/L)后,IC50为(32.15±0.79)μmol/L,联合逆转倍数为2.06倍,细胞内的阿霉素相对含量增加1.83倍;P糖蛋白表达下调36.7%,mdr-1基因mRNA相对表达值也呈下调趋势。结论:细胞因子诱导杀伤细胞联合阿霉素可提高耐药细胞K562/ADR胞内的阿霉素浓度,下调mdr-1基因及P糖蛋白的表达,提高阿霉素对耐药细胞K562/ADR的敏感性,使细胞因子诱导杀伤联合阿霉素对多药耐药的逆转效果得以显现。     

非霍奇金淋巴瘤患者血中CD+4 CD+25 T细胞/CD+4 T细胞比率意义初探

  目的 探讨非霍奇金淋巴瘤（NHL）患者外周血中CD+4 CD+25 T细胞／CD+4 T细胞比率的意义。方法 应用流式细胞技术检测15例健康人、41例初诊NHL患者、16例CTOP方案化疗后完全缓解后的NHL患者及25例化疗后未达到完全缓解的患者单位体积内外周血中CD+4 CD+25 T细胞数量和CD+4 T细胞,计算CD+4 CD+25 T细胞占CD+4 T细胞的比率。结果 初诊NHL患者CD+4 CD+25 T细胞／CD+4 T细胞的比率为（7.54±2.31）％,高于健康者的（4.13±1.25）％（P＜0.05）;化疗完全缓解后NHL患者外周血CD+4 CD+25 T细胞／CD+4 T细胞的比率为（6.26±2.28）％,低于初诊化疗前患者的（7.54±2.31％）（P＜0.05）。化疗后未达到完全缓解患者CD+4 CD+25 T细胞／CD+4 T细胞的比率为（7.85±2.12）％,高于化疗后完全缓解的患者的比率（6.26±2.28）％（P＜0.05）。结论 化疗缓解后的NHL患者外周血中CD+4 CD+25 T细胞／CD+4 T细胞的比率较化疗前及化疗未缓解的患者降低,提示CD+4 CD+25 T细胞／CD+4 T细胞的比率可能与NHL患者免疫功能及治疗效果有关。     

人同种异体脾LAK细胞治疗晚期恶性肿瘤52例临床观察

本文在人胎脾细胞ＬＡＫ活性诱导，增殖反应能力的基础上，探讨了人胎脾ＬＡＫ细胞制备，质量控制及临床应用的安全性、可靠性及疗效。共治疗５２例晚期恶性肿瘤病人。结果显示：全部病人都有不同程度地改善了一般症状和体征，提高了生活质量，对减轻癌性疼痛和消除癌性胸腹水效果明显。５２例患者中，完全缓解６例（１１％），部分缓解１４例（２７％）．作者认为：该疗法与国内同类方法相比，以人胎脾细胞作为ＬＡＫ前体细胞，取代了传统的自体或异体外周血淋巴细胞，ＬＡＫ细胞获取量大，治疗效果肯定，副作用轻，具有一定的应用价值。