不同方法显像骨组织微血管的对比研究

[目的]比较血管墨汁灌注-Van Gieson（VG）复合染色法与其他组织染色法在组织切片血管显像中的优缺点，为骨组织血管化检测寻找一种简单直观的方法。[方法]青山羊一侧股动脉内灌注10％中华墨汁、10％甲醛和20％甘露醇混合液（体积比7：2：1）至股静脉流出液呈黑色。取下胫骨，10％甲醛溶液固定，EDTA脱钙，香柏油浸泡，制成50-100μm厚切片，用复合墨汁灌注-VG染色法观察山羊胫骨微血管。[结果]复合墨汁灌注-VG染色法既可清楚显示微血管的数量、大小、分支和吻合，还能清楚显示微血管与周围组织的关系。较单纯墨汁灌注厚切片、HE、Masson和Weigert间苯二酚-碱性品红染色VG复染法显示微血管清楚。[结论]复合墨汁灌注-VG染色法对微血管显像较清楚，且还可清楚显示微血管与周围组织的关系，可在骨组织工程血管化检测中试用。     

长骨大段缺损修复用的脱蛋白骨制备和性能研究

目的:通过对脱蛋白骨制备过程中骨块大小、保存方法的改进及理化性能研究,探索为长骨大段缺损修复提供合适的支架材料。方法:将猪股骨下端松质骨沿骨小梁方向制成30mm×3mm×3mm大小骨块。参照改良法制备脱蛋白骨,进行深低温(-85℃)冷冻3个月,蒸馏水浸泡48 h后置入干燥箱内烘干,真空抽气、包装,60Co照射消毒,-4℃保存备用。对脱蛋白骨进行形态结构、组成成分、力学性质及细胞相容性检测。结果:本法制备的脱蛋白骨具有天然网状结构,其无机成分为羟基磷灰石,有机成分为Ⅰ型胶原,力学性能良好,有良好的细胞相容性,细胞上架率高,无明显的免疫排斥反应。结论:本法制备的猪脱蛋白骨各项性能良好,可用作长骨大段缺损修复的支架材料。     

应用半环槽外固定器建立山羊胫骨缺损模型

背景:方便成骨及其成骨量的检测、占用空间相对较小,半环槽式外固定器属于骨外固定器,结构相对简单,多平面式固定,作者尚未查到用其建立胫骨缺损大动物模型可信性的较多实验报告.目的:验证半环槽外固定器构建山羊胫骨段缺损模型的可操作性及可重复性.设计、时间、地点:随机对照观察.实验于2005-03/2007-02在第三军医大学动物实验室完成.材料:9只健康成年山羊由第三军医大学动物中心提供;半环槽外固定器为第三军医大学李起鸿教授研制、直径2.5 mm骨元针为上海医疗器械公司产品.方法:动物经麻醉后,在距胫骨上关节面1.5～2.0 cm的松质骨同一平面各穿两针为第1组,两针夹角为40°在第1组下3.0～5.0cm处与第1组任一针平行穿一针为第2组.第4组穿针处距胫骨下端关节面2.0 cm松质骨处.第3组与第4组任一针平行,与第2组交叉成40°角,两组相距3.5～5.0 cm,共6针.上半环槽外固定器,游离胫骨中段,根据X线片得到的胫骨长度,在胫骨中下段中间两穿针处之间用线锯锯断胫骨和骨膜,造成20%骨与骨膜缺损.主要观察指标:①术后动物一般情况及半环槽外固定器应用状况.②采用X线及Lane-Sandhu评分观察骨缺损自行修复成骨情况.结果:纳入实验山羊9只,1只因术后感染死亡,1只出现针道感染,已予补充,其余均存活并进入结果分析.①实验动物术后2～6 h苏醒,并能站立进食.螺母松动后及时旋紧,无外固定松动失败,皮肤无坏死.术后2 d内伤肢能落地,但不能负重,2周后可以部分负重,3周有轻微跛行,4周后能自由活动,无跛行.②术后5周X-侧位片胫骨缺损处可见少许骨膜反应,术后10周断端有硬化,髓腔开始有闭合迹象,术后15周残端髓腔闭合,残端骨膜反应未加重,各时间点Lane-Sandhu X线评分均为0分.术后5,10,15周组织学检查未见骨形成,各时间点Lane-Sandhu组织学评分均为0分.结论:应用半环槽外固定器在造成山羊胫骨20%缺损的条件下构建的骨缺损动物模型,术后15周经检X线及组织学检测未出现骨愈合现象,证明该方法具有可操作性及可重复性,适用于组织工程用大段骨缺损动物模型的建立.     

异种脱蛋白骨复合物修复大段骨缺损的血管化观察

背景: 异种骨修复动物大段骨缺损过程中血管化的报道较少.目的: 验证异种脱蛋白骨作为组织工程支架材料修复长骨大段缺损成骨过程中的血管化特点.设计、时间及地点: 随机对照动物实验,于2005-03/2007-02在解放军第三军医大学完成.材料: 山羊24只,体质量(22.5±2.5)kg,右侧胫骨中下段截除胫骨总长度20%形成节段性骨缺损.方法: 24只实验山羊随机分为2组,实验组16只动物植入异种脱蛋白骨 自体间充质干细胞 重组人骨形态发生蛋白2,用半环槽式外固定器固定;以另8只植入自体骨为对照.术后每隔4周进行股动脉墨汁灌注后,取新骨组织制成厚切片.主要观察指标: ①大体解剖及影像学观察新骨血管化情况.②厚切片观察新骨血管网,并用Image-proplus真彩图像分析软件测量血管数目和面积.结果: 所有实验山羊术后伤口无溃烂、流脓,无死亡.①动物肌肉和软组织已经被墨汁黑染,皮下、肌肉筋膜和骨膜可见血管大小、分支、走行方向及相互吻合呈网状.术后4周骨缺损区出现植入物边缘毛糙,8周出现大小不等、形状不规则的透光性骨吸收区.12周以后,两组骨缺损区两断端之间高密度钙化影,新生骨与两断端完全相连接.②术后4～24周,实验组与对照组血管表现数目逐渐增多,排列渐趋规则,血管大小、分布区域趋向均匀.两组血管数目和面积相比,差异均无显著性意义(P>0.05).结论: 异种脱蛋白骨复合物材料修复大动物大块骨缺损过程中血管化程度与自体骨相当.     

汉防己甲素干预急性损伤脊髓神经元凋亡及bcl-2和bax表达:与甲基强的松龙的比较

背景:研究证实汉防己甲素对急性脊髓损伤有保护作用,但其具体机制尚不清楚.目的:观察汉防己甲素对急性脊髓损伤大鼠的神经保护作用,并从细胞凋亡通路探讨其作用机制.方法:将100只成年大鼠随机分为4组.采用加速压迫型Allen's打击法制备脊髓损伤模型.甲强龙组和汉防己甲素组分别于造模前和造模后24,48 h经尾静脉注射甲基强的松龙和汉防己甲素.假手术组与模型组注射等量生理盐水.造模后8 h,1,3,7,14 d采用BBB评分评估大鼠的运动功能,苏木精-伊红染色观察损伤脊髓组织的形态改变,免疫组织化学染色检测bcl-2和bax的表达.结果与结论:伤后7,14 d,甲强龙组和汉防己甲素组大鼠的BBB评分显著高于模型组(P<0.05),各时间点甲强龙组和汉防己甲素组间BBB评分差异无显著性意义(P>0.05).伤后3～7 d,脊髓组织损伤最为严重,甲强龙组和汉防己甲素组的损伤程度较模型组轻,同时bax表达较模型组少,而bcl-2表达较模型组多(P<0.01).说明汉防己甲素可通过增加bcl-2表达、降低bax表达,抑制急性脊髓损伤大鼠神经细胞凋亡,促进大鼠运动功能恢复,其作用不逊于甲基强的松龙.     

下颈椎脱位合并小关节交锁的治疗策略

目的 探讨下颈椎脱位合并小关节交锁患者的治疗方法选择. 方法颈椎脱位患者49例.损伤脱位节段:C3,4 7例,C4,5 15例,C5,6 14例,C6,7 13例,其中陈旧性脱位11例,病程2 h～61 d.脊髓损伤按Frankel分级:A级14例,B级9例,C级10例,D级9例,E级7例.所有患者均在颅骨牵引治疗试复位后进行手术治疗. 结果新鲜脱位患者牵引复位成功率63%,脊髓损伤平均改善0.65级.所有植骨块于术后4个月均获骨性融合.结论 颈椎脱位患者的病情决定治疗方式,应根据患者脱位新鲜与否、是否截瘫、椎间盘的损伤的大小、经牵引是否可复位等来制订严密的手术计划,以最小的创伤恢复患者的健康.     

骨形成蛋白-2基因活化纳米骨浆促进脊柱椎体间融合的作用

目的观察骨形成蛋白(BMP)-2基因活化纳米骨浆促进脊柱椎体间融合的作用。方法取20只年龄5~7岁的雌性山羊构建模型,构建并验证BMP-2基因活化纳米骨浆,构建成功后选择15具椎体标本,经Micro CT扫描检测60个椎体骨密度,保证其在椎体骨密度一致的条件下,将其随机分为3组,包括空白对照组(n=30)、纳米骨浆组(n=15)、BMP-2基因活化纳米骨浆组(n=15)。在C型臂X线机引导下,分别经双侧椎弓根为其填充纳米骨浆、BMP-2基因活化纳米骨浆,压缩椎体高度至原始高度50%,对比3组模型脊柱椎骨最大压缩应力与最大载荷。将20只雌性山羊使用Micro CT扫描,确认山羊骨密度一致后,随机分为正常组(n=5)、假手术组(n=5,开腹后便将切口缝合)、双侧卵巢切除术组(n=10,将山羊双侧卵巢切除),建立骨质疏松模型。分别于术前、术后6个月检测山羊血清内骨钙素与碱性磷酸酶表达。选取骨质疏松模型构建成功的双侧卵巢切除山羊每只L2~L6椎体,麻醉后向其中4只经椎弓根注射纳米骨浆,4只注射BMP-2基因活化纳米骨浆,其他2只不注射并作为空白对照组。注射成功后4个月,处死山羊,取出椎体检测骨密度与结构力学,检测并对比各组脊柱椎体最大压缩应力及最大压缩载荷。结果BMP-2基因活化骨浆BMP-2水平表达明显增强,与实验要求相符,构建成功。BMP-2基因活化纳米骨浆组最大压缩应力、最大压缩载荷均明显高于空白对照组与纳米骨浆组,差异有统计学意义(P<0.05),空白对照组与纳米骨浆组比较差异无统计学意义(P>0.05)。术后6个月,双侧卵巢切除术组山羊模型血清骨钙素、碱性磷酸酶水平表达均较正常组、假手术组显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);正常组与假手术组术后6个月血清骨钙素、碱性磷酸酶水平较术前未见明显变化,且组间表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。3组骨质疏松山羊模型中,BMP-2基因活化纳米骨浆组最大压缩应力、最大压缩载荷最高,其次为纳米骨浆组,空白对照组最低,组间两两比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论BMP-2基因活化纳米骨浆较普通纳米骨浆更利于提高脊柱椎体骨密度及生物力学强度,在促进脊柱椎体间融合方面应用价值高,可作为合并骨质疏松骨折患者椎体成形术理想的填充材料。     

医用硫酸钙颗粒治疗骨缺损研究

目的 采用采用医用硫酸钙作为人工材料治疗骨缺损,观察其临床疗效.方法 选择我院骨缺损患者62例,采用美国Wright公司生产的医用硫酸钙颗粒和硫酸钙粉剂制作人工替代骨填充骨缺损,术后1、3、6、12周及半年、1年、1年半复查X线片,观察硫酸钙吸收情况,成骨过程及骨粒吸收情况.结果 术后8个月,所有患者硫酸钙颗粒吸收,髓腔再通.术后4-6个月,62例骨缺损处达到临床愈合.功能恢复达到优和良.结论 硫酸钙颗粒是修复良性骨病损中较为理想的骨移植替代材料.