血管内皮生长因子与肾脏疾病

血管内皮生长因子是一种特异性作用于血管内皮细胞的多功能细胞因子 ,在正常生理或病理情况下 ,可有多种细胞合成与分泌。通过与相应受体的相互作用 ,在急性或慢性肾衰的发病及肾脏炎性损伤疾病过程中 ,VEGF可能参与了其发病机制。因此 ,可以通过干预血管内皮生长因子及受体 ,达到减轻肾脏损伤 ,改善肾功能的目的。     

褪黑素对高糖条件下培养的大鼠系膜细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响

糖尿病肾病（DN）晚期肾脏细胞凋亡与肾功能恶化程度成正比，抑制凋亡则可延缓肾小球硬化。褪黑素（MT）是松果体分泌的神经内分泌激素，肾脏是其靶器官之一。研究显示MT对DN肾脏有明显的保护作用，但MT对DN晚期肾小球系膜细胞（MC）凋亡的影响尚未检索到有关报道。本试验选用大鼠MC为研究对象，来观察MT对高糖诱导的MC凋亡的影响。     

EGCG对实验性糖尿病大鼠肾脏的保护作用

目的观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对大鼠糖尿病肾脏的保护作用。方法采用链脲佐菌素(65 mg.kg-1)腹腔注射建立糖尿病大鼠模型,实验分4组:对照组、模型组、EGCG治疗组Ⅰ和治疗组Ⅱ,后两组于模型成功后1 wk和4 wk给予EGCG 5 mg.kg-1.d-1腹腔注射。分别测定各组4、8、12 wk时尿白蛋白/肌酐比值(A/C)。12 wk后,采用高效液相测定血浆同型半胱氨酸(tHcy)含量;观察肾脏损伤后病理形态学变化;应用免疫组化检测肾组织细胞外基质蛋白酶-9(MMP-9)的表达;生化分析肾脏氧化应激状态。结果模型组与对照组相比:大鼠肾重/体重明显升高;肾小球肥大,细胞增生,PAS阳性物质明显沉积;血浆tHcy含量及肾组织MMP-9的表达明显增加。经EGCG干预后大鼠生化指标和肾重/体重明显改善;肾脏的抗氧化能力增强和氧化应激降低;血浆tHcy含量下降和MMP-9的表达减弱。EGCG两治疗组相比较,其结果也存在差异。模型组大鼠尿A/C在不同时相点都维持在高水平,且随着时间的延长而逐渐升高,EGCG治疗组I在各时间点与模型组相比A/C明显降低(P<0.01),而治疗组Ⅱ在12 wk时明显低于模型组(P<0.05),在不同时间点治疗组I和治疗组Ⅱ之间存在差异。结论EGCG对糖尿病肾病具有保护作用,其作用机制可能是通过提高机体抗氧化应激能力,降低血浆tHcy含量,抑制肾组织MMP-9表达而减少糖尿病肾病损害。     

黏着斑激酶在转化生长因子β1诱导的人肾小管上皮细胞转分化中的作用

目的 观察转化生长因子（TGF）β1诱导的正常人近端肾小管上皮细胞（HK-2）转分化（EMT）过程中黏着斑激酶（FAK）的表达及下调FAK的表达后对TGF-β1诱导的HK-2细胞转分化进程的影响。 方法 应用TGF-β1（10 μg/L）刺激HK-2细胞,采用RT-PCR、Western印迹和免疫荧光方法分别检测E钙黏蛋白（E-cadherin）、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、FAK mRNA和蛋白的表达及磷酸化（p）-FAK（Tyr397）的蛋白表达。应用Lipofectmine2000将FAK siRNA转染HK-2细胞,采用Western印迹观察下调表达FAK对上述指标的影响。 结果 TGF-β1刺激后,HK-2细胞α-SMA蛋白和mRNA水平上调,E-cadherin蛋白和mRNA表达下调。FAK蛋白和mRNA随时间的延长表达逐渐增多,48 h达到高峰。p-FAK（Tyr397）蛋白表达趋势与FAK相同。脂质体转染siRNA后FAK的mRNA和蛋白分别下调了50%和41%,下调表达FAK后可以显著抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞α-SMA蛋白的上调表达,逆转 E-cadherin蛋白的下调表达。 结论 在TGF-β1诱导的HK-2细胞转分化进程FAK蛋白表达上调,敲低FAK蛋白表达后可以部分减轻EMT的程度,提示FAK在TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化和肾脏纤维化中发挥一定的作用。     

褪黑素在肾脏疾病中的研究现状

松果体褪黑素是一种吲哚类激素,具有多种生理功能。随着对褪黑素研究的不断深入,发现它在各种肾脏疾病过程中都发挥着保护作用,其作用机制主要是通过抗氧化、抗炎、降血压等作用实现,探讨其在各种肾脏疾病过程中的作用,具有一定的理论研究价值和临床应用价值。     

CD2相关蛋白在肾脏细胞中的分布及其在足细胞中的作用

目的 观察CD2相关蛋白(cD2AP)在肾脏不同细胞系中的表达分布,及其与足细胞裂孔隔膜分子nephrin和细胞骨架蛋白F-actin之间的联系.方法 以DMEM培养基培养人肾小球系膜细胞(HMC)和人肾小管上皮细胞系(HK-2),RPMI 1640培养基培养条件永生化小鼠足细胞系.以RT-PCR及Western blotting方法检测足细胞内CD2AP和nephrin的表达.间接免疫荧光结合激光共焦方法观察CD2AP在HMC、HK-2、未分化及已分化足细胞中的表达情况,及CD2AP与nephtin在足细胞中的共存.直接免疫荧光结合激光共焦方法观察F-actin在足细胞的表达及其与CD2AP的共存.结果 CD2AP均匀分布于HK-2及未分化足细胞的核周及胞浆,而不表达于HMC细胞.在足细胞分化过程中,CD2AP的分布发生了变化,出现向周边聚集的现象.CD2AP与足细胞裂孔隔膜分子nephrin及细胞骨架蛋白F-actin在足细胞中存在共定位关系.结论 CD2AP表达于上皮来源的肾脏固有细胞.CD2AP在足细胞中的分布特点,提示CD2AP可能参与足细胞的分化过程,并与裂孔隔膜分子功能及细胞骨架凋节有关.     

罗格列酮抑制大鼠肾间质纤维化的实验研究

目的：探讨过氧化物酶体增生物激活受体-γ激动剂——罗格列酮对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠。肾间质纤维化的影响。方法：将30只wistar大鼠随机分成罗格列酮治疗组、模型组和假手术组。对治疗组，模型组行单侧输尿管结扎术建立输尿管梗阻的动物模型。术后第21天取3组术侧。肾组织做HE和Masson三色病理染色及用免疫组化方法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子-β1(TGF-β1)和Ⅰ型胶原(ColⅠ)在肾组织的表达水平。结果：罗格列酮可显著下调α-SMA、TGF—β1的表达．减轻Ⅰ型胶原在肾间质中的沉积，改善了肾脏病理改变。结论：罗格列酮对UUO所致的肾间质纤维化的形成有抑制作用。     

A Rho-kinase inhibitor,fasudil, attenuates progressive glomerulosclerosis induced by daunorubicin in rats

Accumulating evidence suggests that the small G protein Rho and its downstream effec-tor Rho kinase may play important roles in kidney biology. The present study examined the effects of a Rho-kinase inhibitor, fasudil, on daunorubicin-induced progressive glomerulosclerosis and explored the underlying mechanism by which fasudil ameliorates glomerulosclerosis. Thirty-six male SD rats were randomly allocated into sham-operation group （sham group, n=12）, unilateral nephrectomy （UNX）＋daunorubicin （DRB） group （model group, n=12）, UNX＋DRB＋Fasudil group （treatment group, n=12）. Two to four weeks after the establishment of the animal model, 6 rats in each group were taken randomly for the detection of 24-h urine protein excretion. Kidney sections were exam-ined by HE and PAS staining, immunohistochemistry and transmission electric microscopy （TEM）. The expression of Rho-kinase mRNA and P27 mRNA in kidney were detected by RT-PCR. It was found that the 24-h urine protein excretion in model group was increased significantly as compared with sham group （P〈0.01）. But this increase was significantly suppressed by fasudil （P〈0.05）. At 4 week, the foot process effacement in podocytes, mesangial proliferation and ECM accumulation were observed in model group, presenting as focal segmental glomerulosclerosis. But in the treatment group, the fasudil alleviated glomerular injury, with proliferating cell nuclear antigen （PCNA）-positive cell infiltration ameliorated and the expression of P27 increased. The expression of Rho-kinase mRNA was significantly enhanced in model group and was suppressed in treatment group. Moreover, fasudil up-regulated the mRNA expression of P27. Our study demonstrated that the glomerulosclerosis was substantially ameliorated by inhibiting the expression of Rho-kinase. It is suggested that Rho-kinase pathway is involved in the renal injury and the inhibition of Rho-kinase may constitute a therapeutic strategy for the treatment of renal injury.     

CD2相关蛋白在肾病综合征中的表达及意义

目的观察不同病理类型的原发性肾病综合征(nephrotic syndrome,NS)患者肾小球足细胞中CD2相关蛋白(CD2AP)的表达,探讨其与足细胞损伤的关系。方法选取原发性NS患者54例,10例同期肾肿瘤切除患者正常肾组织作为对照。肾活检后常规染色观察肾脏组织病理改变,肾组织行免疫荧光法CD2AP和肾小球上皮细胞蛋白-1(GLEPP1)双重标记,对肾小球CD2AP的表达进行定位;分别用real time PCR和免疫组化SP法检测组织中CD2AP的表达,采用real time PCR检测nephrin的表达,透射电镜观察足细胞的结构变化,并定量测量足突密度。结果 (1)NS患者肾小球中CD2AP的表达及nephrin的表达下调,足细胞足突不同程度融合,足突密度降低。(2)病理表现为微小病变性肾病(minimal change disease,MCD)、局灶性节段性肾小球硬化(focal segmental glomerulosclerosis,FSGS)和膜性肾病(membranous nephropathy,MN)的NS患者CD2AP表达及nephrin表达较对照组明显降低,且CD2AP与nephrin表达呈正相关,病理表现为MCD和FSGS的NS患者CD2AP表达与足突密度呈正相关。结论本研究首次发现原发性NS患者肾小球足细胞中CD2AP的表达降低,且在MCD和FSGS中与足细胞病变程度相关,提示CD2AP低表达在足细胞病变为主的肾小球疾病中发挥重要作用。CD2AP有利于诊断足细胞病变的早期检测,对CD2AP表达减低进行早期干预可能有助于延缓疾病进展。     

大鼠足细胞损害后肾小球血管生成素的异常表达及其意义

 目的：探讨大鼠足细胞损害后，内源性血管生成素的异常变化及其在进行性肾小球硬化中的病理作用。方法: 选择柔红霉素诱导足细胞损害的大鼠模型作为研究对象，80只健康雄性Wistar大鼠，随机分为假手术(sham)组25只、单侧肾切除(UNx)组25只和UNx ＋柔红霉素（DRB）组30只。DRB组大鼠，摘除左肾后的第7、14 d，从尾静脉注射柔红霉素5 mg·kg-1各1次。然后，分别于造模后的第1、2、4、6、8周，随机取各组大鼠5只，收集24 h尿量，采血取肾，检测24 h尿蛋白定量（24hUPQ）、血肌酐（Scr）和尿素氮（BUN），用PAS染色、免疫组化、原位杂交和透射电镜技术进行病理形态学分析。结果: DRB组的24hUPQ、BUN、Scr显著高于相同时点的sham组和UNx组；肾小球硬化指数（GSI）随病变的进展逐步升高。免疫组化和原位杂交显示，DRB组的肾小球表达Ang1 mRNA和Ang1蛋白下调，表达Ang2 mRNA和Ang2蛋白上调。电镜显示，DRB组逐步出现严重的足细胞损害。Sham组和UNx组的肾小球没有病理改变。DRB组的Ang1 mRNA表达与Ang2 mRNA表达呈负相关；Ang1蛋白表达与Ang1 mRNA表达呈正相关，与Ang2蛋白表达、四型胶原（CoIV）蛋白表达、GSI 、24hUPQ、Bun、Scr呈负相关； Ang2蛋白表达与Ang2 mRNA表达、CoIV蛋白表达、GSI 、24hUPQ、BUN 、Scr之间呈正相关。结论: 足细胞损伤可能是导致肾小球内Ang1和Ang2表达失衡的主要原因，Ang1表达下调，失去对Ang2的抑制，使Ang2表达上调，并介导肾小球滤过膜通透性增高和肾小球硬化的形成。