美国临床生化科学院心脏标志物应用指南简介

1998年，美国临床生化科学院（NACB）提出了心脏标志物在急性冠脉综合征（ACS）诊治中的应用准则和建议，并将建议划分为三级。2004年NACB起草了“急性冠脉综合征和心衰生化标志物的实验室医学实践指南”，对原来的准则进行了修正和补充，并在原有建议分组的基础上，进一步对事实型依据的可靠性分为A、B、C三层（表1）。本文将对指南中的各种心脏标志物应用建议作一介绍。     

重组人α_1-微球蛋白在毕赤酵母中的高效分泌性表达

目的获得可溶、稳定、高纯度的α1-微球蛋白(α1-microglobulin,α1-MG),为临床检测标准品、质控品制备奠定基础。方法制备构建重组人毕赤酵母真核分泌表达质粒,并对重组α1-MG进行诱导表达、纯化和鉴定。应用PCR方法扩增重组人α1-MG pET-15b质粒,得到N端带有6个组氨酸“标签”(6×His-tag)的α1-MG融合基因,将该基因插入到真核酵母分泌表达质粒pPIC9中,筛选得到正确序列的重组分泌表达质粒pPIC9-MG、并转化毕赤酵母菌菌株GS115(Pichia pastoris GS115);用甲醇进行重组人α1-MG的诱导表达,摇瓶发酵,上清α1-MG含量测定;目的蛋白采用硫酸铵沉淀、一步亲和层析纯化并通过免疫学含量测定、PAGE电泳、Western blot以及生物质谱进行鉴定;初步进行稳定性观察。结果成功构建了重组人α1-MG真核酵母表达载体,核酸测序与预测一致,并在毕赤酵母中实现了重组人α1-MG的分泌性表达,表达量可达73 mg／L,约占总蛋白的30％。经纯化及鉴定,得到了可溶性的、具有天然蛋白生物学活性的PAGE纯目的蛋白。结论首次在毕赤酵母中实现重组人α1-MG的高效分泌性表达,表达目的蛋白具有良好的生物学活性、稳定性好、易纯化等优点。     

健康孕妇不同孕期和儿童血半胱氨酸蛋白酶抑制剂C水平的调查

目的调查不同孕期孕妇和儿童血Cystatin C水平变化规律.方法采用颗粒增强速率散射比浊法测定186例健康成年人、122例不同孕期孕妇和130例健康儿童血Cystatin C水平.结果健康成人血Cystatin C参考范围0.52～1.0 mg/L;妊娠12周内、13～27周、≥28周血Cystatin C水平分别为0.36～0.81 mg/L、0.41～0.88mg/L和0.78～1.99mg/L.新生儿出生后5个月内的血Cystatin C变化范围为0.8～2.3 mg/L,在5个月以后下降至0.5～1.1 mg/L,接近健康成人水平.结论孕早、中期血Cystatin C水平略低于健康成人水平,晚孕阶段血CystatinC水平明显升高.新生儿血Cystatin C水平明显高于晚期孕妇水平,出生后血Cystatin C水平明显下降,5个月以后即已接近健康成人水平,这可能与儿童肾组织在解剖和功能上的逐渐成熟有关.     

半胱氨酸蛋白酶抑制剂C与肌酐在评价儿童肾小球滤过功能中的比较研究

目的　确定半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(cystatinC ,CC)在儿童中的参考范围 ,并就CC与肌酐 (Cr)在肾小球滤过功能检测中的临床应用进行比较。方法　采用速率散射比浊法测定 13 0例出生到 13 y儿童 ,71例 1～ 16y患不同肾脏疾病的儿童血清CC水平。比较了病人组CC和Cr与肌酐清除率 (Ccr)的相关性。结果　cystatinC在出生后四个月内水平显著高于成人 ,但在出生 5m以后下降至接近成人参考值范围。血清CC与血清Cr有显著正相关 ,Cr=69.4CC - 16.11(r =0 .994) ,CC对数值与Ccr的对数值呈显著负线性相关 ,logCC =- 0 .63 0logCcr+ 1.3 2 (r =- 0 .910 )。CC和Ccr较与Cr有更显著的符合率 ,此外 ,Ccr >80ml/min的肾脏病患儿中有 5 4%显示CC异常。结论　cystatinC比Ccr更能够反映儿童肾滤过功能的损害 ,建议用cystatinC作为儿童患者肾小球的滤过功能指标     

B型钠尿肽的生物学特性及其在心脏病学中的临床应用进展

198 1年,DeBold发现心房钠尿肽(Atrialnatriureticpepetide ,ANP)后,Maekawa等[1] 于1988年首先从猪脑中分离出了钠尿肽家族的第二个成员,称为B型钠尿肽(B typenatriureticpeptide,BNP) ,又称脑钠素或脑钠肽(brainnatriureticpeptide) ,随后于1989年克隆出了人BNP(hBNP)。1990年和1992年又分别发现了C型钠尿肽(C typenatriureticpepetide,CNP)和D型钠尿肽(Dendroaspisnatriureticpeptide,DNP)。这四种钠尿肽拥有相似的结构:中央由17个氨基酸通过二硫键连接构成一环状结构,其中一些氨基酸是保守的,此环状结构对于受体识别和其生…     

血清肌酐和半胱氨酸蛋白酶抑制剂C及估算的肾小球滤过率在评价慢性肾病患者肾小球滤过功能中的比较研究

目的比较血清肌酐（Scr）、肌酐清除率（Ccr）、半胱氨酸蛋白酶抑制剂C（CystatinC）及估算的肾小球滤过率（eGFR）在慢性肾病（CKD）患者各期中的符合率。方法Scr和尿肌酐采用苦味酸动力学法测定，血清CystatinC采用颗粒增强免疫散射比浊法测定，主要基于Scr估计的eC．FR采用简化的肾病膳食改良试验（MDRD）方程进行计算，CKD患者根据1999年美国肾病基金会（NKF）公布的“改善肾病预后及生活质量的倡议”（KidneyDiseaseOutcomeQualityInitiative，K／DOQI）所制定的指南，按照eGFR分为5期。结果228例CKD患者，各期Scr、CystatinC随eGFR的降低而逐渐升高，Ccr随eGFR的降低而逐渐降低，三者在各期间水平的差异均有统计学意义（P〈0．05）。当eGFR≤29ml／min时，Scr、Ccr及CystatinC的异常率均为100％，Scr、CystatinC平均水平是正常参考值上限的4—6倍和3．5—5．5倍，Ccr下降3．8—7．3倍，三者呈平行性改变；在eGFR30—59ml／min组，Scr、Ccr和CystatinC的平均水平分别为129．2μmol／L、44．3ml／min和2．16mg／L，异常率分别为84％、91％和98％，三者间异常率的差异无统计学意义（P〉0．05）；在eGFR60—89ml／min组，血清肌酐的平均水平为83．3μmol／L，异常率仅为6．8％，对于GFR下降的检出不敏感，Ccr、CystatinC分别呈边缘性下降和上升，异常率为70％和86％，三者问异常率的差异有统计学意义（P〈0．05）；在eGFR≥90ml／min组，血清肌酐的异常率为0，Ccr、CystatinC的异常率仍高达44％和59％。结论eGFR〈60ml／min时，与Scr、Ccr及CystatinC的总符合率高，此时可以基本诊断肾小球滤过功能中度下降；60ml／min≤eGFR≤89ml／min时，Scr不能反映肾脏滤过功能的下降，但CystatinC和Ccr至少能检出2／3患者GFR的异常，CystatinC较Ccr更敏感；在eGFR≥90ml／min时，MDRD方程高估了实际GFR，对于Scr水平正常，特别是老年CKD患者，MDRD方程不适用，需联合检测Ccr和CystatinC，以及时发现GFR的下降。     

代谢物浓度酶法测定的现状与发展

20世纪起临床就开始用酶来测定人体中物质的含量 ,它在 70年代得到较大的发展 ,在理论和实践上也趋于成熟。随着蛋白质纯化技术的提高 ,品种齐全、质量可靠的商品酶制剂的大量供应得到保证 ,加上自动化分析仪在检验科的普遍应用 ,使得酶在临床化学测定中的应用日益广泛。近几年来 ,基因重组技术在酶生产上也有应用 ,活力高 ,杂酶含量少且价格低廉的重组酶蛋白不久会面世 ,并应用于临床检验。传统的代谢物酶法测定分为终点法和动力学法 ,循环酶法是新近发展起来的又一种灵敏度高的方法。酶法分析的优点是特异性高 ,它在准确性、精密度、灵敏…     

血液透析和腹膜透析患者血浆游离和总肉毒碱水平的观察

目的 观察血液透析和腹膜透析患者血浆总肉毒碱(TC)和游离肉毒碱(FC)的水平.方法 200名正常对照组标本来自本院健康体检人群,受检病例为本院肾脏内科患者;TC和FC采用循环酶法测定,在日立7170全自动生化分析仪上测定.结果 200名正常对照组TC(56.52±9.61)μmol/L,FC(46.60±8.23)μmol/L;37例血液透析患者透析前TC(41.47±13.22)μmol/L,FC(24.58±8.91)μmol/L;与正常对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01);118例腹膜透析患者TC(40.59±9.94)μmol/L,FC(25.52±7.45)μmol/L;与正常对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01).血透患者透析后TC(14.62±5.32)μmol/L,比透析前下降(64.70±5.95)%,FC(8.62±3.01)μmol/L,比透析前下降(63.84±9.14)%,且TC与FC的水平与透析程呈负相关(r=-0.68,-0.73);118例腹膜透析患者TC与FC的水平与透程无关(P＞0.05).11例血液透析患者静脉给予左旋卡尼汀1 g,透析后TC(70.31±36.18)μmol/L,FC(35.53±19.25)μmol/L,与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 血液透析和腹膜透析患者普遍存在肉毒碱缺乏,血液透析患者随着透析程的延长,缺乏越严重.静脉给予左旋卡尼汀可有效纠正血液透析患者循环肉毒碱的下降.     

重组人胰腺α-淀粉酶在毕赤酵母菌中的分泌性表达

目的:构建人胰腺!-淀粉酶(HPA)真核表达载体并在毕赤酵母中进行表达。方法:从人胰腺组织中提取总RNA,逆转录为cDNA,RT-PCR法扩增HPA基因,将其插入到酵母分泌性表达质粒pPIC9中,筛选得到正确序列的重组质粒pPIC9-HPA,用该质粒转化毕赤酵母菌GS115,PCR方法筛选阳性克隆,摇瓶培养、0.5%甲醇诱导重组HPA分泌性表达,测定培养上清中的淀粉酶活力;重组HPA用冷乙醇-糖原亲和沉淀、疏水层析纯化并以SDS-PAGE电泳和Westernblot方法鉴定。结果:成功构建了重组HPA真核酵母表达载体,重组质粒酶切和核酸测序结果与预期一致,显示HPA基因正确插入质粒pPIC9中;以pPIC9-HPA转化毕赤酵母菌GS115,实现了重组HPA在毕赤酵母菌分泌性表达;重组HPA经纯化后鉴定具天然HPA相同的免疫原性,其对可溶性淀粉酶的水解产物和酶动力学分析与天然HPA相近。结论:成功实现了HPA在毕赤酵母真核表达系统中的分泌性表达,重组HPA与天然HPA具有相似的催化和酶动力学性质。本实验为下一步作为临床HPA测定标准品的研制准备了实验基础。     

血清NAG测定在肝病诊断中的应用

N-乙酰-β-D 氨基葡萄糖苷酶(NAG)是一种细胞内溶菌体酶,在血清中只有少量存在.一些研究表明,在糖尿病、某些恶性肿瘤、某些肝脏病变及孕期时,血清NAG 活性增高.我们测定了91名分别患有急性病毒性肝炎、慢性活动性肝炎、慢性迁移性肝炎、肝硬化、阻塞性黄疸和肝癌患者的血清NAG、ALT、AST、ALP 和γ-GT 5种酶活性,并