绿色荧光蛋白在环磷酰胺处理小鼠胸腺中表达的研究

目的:探讨绿色荧光蛋白(GFP)在环磷酰胺(CY)处理小鼠胸腺中的表达。方法:将质粒pEGFP-c3和梭华SofastTM基因转染试剂按一定比例配制成转染液,经腹腔注入3组小鼠(每组15只)进行转染。转染24h后分别注射0.5、1、2mg/只的CY,并设对照组(15只)。18h后称小鼠体质量,然后处死动物,无菌取胸腺并称重,用PBS洗出细胞,制成单细胞悬液,于荧光显微镜下观察GFP的表达情况。结果:GFP可在小鼠胸腺中表达,且GFP 细胞数与CY的剂量相关。高剂量的CY处理可导致胸腺明显萎缩、胸腺细胞总数及GFP 细胞数的减少。结论:转染质粒pEGFP-c3并经CY处理的小鼠及正常对照组小鼠的胸腺中均可表达GFP,但CY处理的小鼠胸腺中GFP的表达情况明显低于对照组小鼠。     

质粒DNA经胃肠道吸收整合宿主基因组的可能性评价

给小鼠灌胃裸pcDNA3s质粒DNA,于3周后提取小鼠肺、肾、脾、肠系膜淋巴结、胸腺、生殖器官、肌肉及肝脏组织中的总DNA,琼脂糖凝胶分离游离质粒DNA与基因组DNA,以组织基因组DNA为模板,PCR法检测质粒DNA的整合率.对照模板中加入不同拷贝数的pcDNA3s质粒,确定PCR反应的敏感性.结果表明,各组织基因组DNA经PCR扩增均呈阴性,低于PCR反应的最低检出率.pcDNA3s质粒可能整合入宿主基因组的拷贝数是基因自发突变率的1/3000,尚未发现外源质粒DNA经胃肠道途径整合入宿主基因组的证据.     

营养基因组学研究与应用

营养基因组学是高通量基因组技术在日粮营养素与基因组互作及其与健康关系研究中的应用.随着人类和模式动物基因组的阐明以及近年有关技术的进展,同时进行生物样品中DNA,mRNA和表达的蛋白质分析,确定基因的多样性已成为可能.它将加速认识营养如何影响代谢途径和机体稳态控制,发现与营养有关疾病早期调节失控与基因型的关系.应用营养基因组学建立评价营养素利用效率的标识和方法,可为公众健康提供有效的科学依据.利用营养基因组学技术能够提高产品质量与生产效率,促进食品工业发展和开拓新的市场.     

饲粮完整蛋白质比例对肉雏鸡整体、组织蛋白质周转代谢的影响

试验用４～１５日龄艾维茵母系公鸡分为３组，饲喂按理想氨基酸模式配制成含不同蛋清蛋白与游离氨基酸比例的饲粮（蛋清蛋白氨基酸占８８．６％、４４．３％、０％），研究饲粮完整蛋白质比例对肉雏鸡整体、组织蛋白质周转代谢的影响。结果表明：饲喂游离氨基酸饲粮的第３组鸡整体、胸肌蛋白质生长率（ＦＧＲ）显著（Ｐ＜０．０５）低于第１、２组；其中，蛋白质合成率（ＦＳＲ）以第２组最高，２、３组极显著高于（Ｐ＜０．０１）第１组；降解率（ＦＤＲ）第１组显著（Ｐ＜０．０５～０．０１）低于第２和第３组。整体和胸肌ＦＧＲ的提高，主要是由于蛋白质降解率的相对降低。肝脏蛋白质ＦＧＲ３组间差异不显著（Ｐ＞０．０５），依次为３组＞１组＞２组。血浆寡肽量与整体和组织蛋白质ＦＳＲ、ＦＤＲ、ＦＧＲ间存在显著（Ｐ＜０．０５）的相关关系。结果表明，饲粮完整蛋白质比例影响肉仔鸡血液循环中的某些寡肽和整体与组织的蛋白质周转代谢。     

乳杆菌肽聚糖对结肠癌细胞的抑制作用及其免疫机制研究

目的:研究乳杆菌肽聚糖(PG)的抑瘤作用及其机制。方法:利用荷瘤、细胞培养和DNA凝胶电泳等技术,研究PG对CT26结肠癌细胞的抑制作用及其对免疫细胞杀伤活性和细胞因子的影响。结果:腹腔注射PG可显著抑制结肠癌细胞的生长,抑瘤率高达54.2%,并诱导其凋亡;PG可诱导IL-1、TNF-α、IFN-γ和NO的产生,而对IL-2无显著影响;PG亦可使CTL、NK、PMФ的杀伤活性显著提高。结论:乳杆菌PG通过提高机体的免疫功能抑制结肠癌肿瘤的生长。PG激活NK细胞、PMФ产生IFN-γ、TNF-α和NO可能部分介导了它的抗肿瘤作用。     

高脂日粮改变小鼠股骨基因表达谱的聚类分析

目的研究饲喂高脂日粮对小鼠股骨基因表达谱的影响。方法 4w龄C57BL/6雄性小鼠,体重13～14g,饲养正常日粮4d后,根据体重随机分为对照组(基础日粮)和高脂日粮组(19.5%猪油),每组8只小鼠,饲养12w后处死,迅速分离股骨,每组4份50mg股骨,提取RNA后等量合并,应用Affymetrix MOE430A小鼠基因表达芯片获得股骨基因表达谱变化的信息,通过DAVID在线分析工具进行聚类分析。结果长期饲喂高脂日粮导致C57BL/6小鼠股骨基因显著表达差异主要涉及如下功能:阳离子通道、信号转导和转入调控、骨矿化、磷代谢调控和胶原合成。结论长期摄入高脂日粮导致小鼠骨组织众多骨代谢相关基因表达改变,造成骨形成减少。     

马鹿茸血疏水性肽的分离及组分3的免疫活性

采用大孔吸附树脂和凝胶色谱等方法,从马鹿茸血蛋白酶解产物中分离纯化获得免疫活性肽.通过体外试验研究其免疫活性.结果表明:大孔吸附树脂可依据氨基酸的疏水性对肽段进行分离,经梯度洗脱后,其中用75%乙醇洗脱所得的组分促脾淋巴细胞增殖活性最高.纯化所得的产物中组分3具有较高的DPPH自由基清除能力,可刺激白介素-1的分泌、促进巨噬细胞的吞噬活性.     

携带pEGFPC3的减毒鼠伤寒沙门氏菌在雏鸡体内的表达

构建了重组减毒鼠伤寒沙门氏菌SL8786/pEGFP-C3,检测了PEGFP-C3在雏鸡体内荧光表达.将重组减毒鼠伤寒沙门菌SL8786/pEGFP-C3分别灌胃饲服3日龄雏鸡,结果表明,在体外稳定试验中,重组菌经LB固体及液体培养基连续传20代后,单个菌落和菌液均呈淡绿色.流式细胞仪结果证实,减毒鼠伤寒沙门菌可以将pEGFP-C3转入脾脏细胞,并在其中表达.在体内稳定试验中,经雏鸡连续传代12次,从肝脏、脾脏中分离的细菌经LB固体培养仍为绿色,证明构建的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌是稳定的.用免疫剂量的重组细菌接种雏鸡后,观察1个月未见有异常现象,同时剖检后也未见脏器有眼观病变.免疫一定时间后,在雏鸡肝脏、脾脏、肾脏、胸腺、十二指肠、肌肉等组织有荧光表达.表达PEGFP-C3的重组鼠伤寒沙门氏菌在鸡体产生荧光表达,为减毒沙门氏菌作为活载体的基因工程疫苗研制提供一个优良模型.