C35基因诱饵表达载体的构建及活性检测

目的C35是一种新型的乳腺癌肿瘤标志基因,在乳腺癌细胞中存在普遍性高表达,可作为乳腺癌早期诊断的标志分子。为了进一步揭示C35基因在乳腺癌的发生和发展中对癌细胞的调控和信号转导机制,本研究拟构建C35基因的酵母双杂交诱饵表达载体,并进行自激活活性和诱饵蛋白毒性检测。方法采用RT-PCR自乳腺癌T47D细胞中克隆C35表达序列,合成3种C35基因片段,连接入诱饵表达载体pGBKT7,采用选择性培养皿和β-半乳糖苷酶(β-Galactosidase)分析检测重组质粒的自激活活性和细胞毒性。结果3种诱饵表达载体经鉴定全部克隆成功,其中C35全长基因的表达产物对酵母细胞具有生长抑制作用,两种截短体C35 1-153和C35 154-348不具有自激活活性和细胞毒性,无需3-AT抑制。结论C35全长基因的诱饵表达载体可能具有抑制酵母细胞自身蛋白表达系统的作用,两种截短体重组载体可应用于乳腺癌T47D cDNA文库双杂交筛选。     

对凝血试验影响因素的探讨

凝血试验的基本试验主要包括：凝血酶原时间（PT）、凝血酶时间（TT）、活化部分凝血活酶时间（aPTT）、纤维蛋白原（Fbg）及各种凝血因子的抗原与活性等。     

山楂对高血脂大鼠模型血脂水平的影响

目的:探讨山楂对高血脂大鼠血脂及血管的保护作用的影响,为山楂的应用提供依据.方法:实验分为正常对照组、高血脂模型组、辛伐他丁组、山楂低剂量组、山楂中剂量组、山楂高剂量组,给予相应药物30天后,腹主动脉取血及取主动脉血管,分别检测血清总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白及血管过氧歧化酶活性、丙二醛含量.结果:山楂各剂量组均能显著降低血清总胆固醇、甘油三酯含量,升高血管丙二醛活性,降低血管MDA含量.结论:山楂既能有效降低实验性高血脂大鼠模型的血清总胆固醇、甘油三酯水平,又可对血管有保护作用.     

早期蛋白质摄人量对早产儿行为发育影响的研究

目的 探讨早期不同蛋白质摄入量对早产儿行为发育的影响.方法 对早产儿给予不同的营养喂养方式,65例入选对象分为A组(高蛋白质组,平均每日摄入蛋白质≥3g/kg·d),B组(一般蛋白质组,每日摄入蛋白质＜3g/kg·d),并于纠正胎龄37周、40周时及此后7天、14天、28天分别行NBNA评分.结果 随出生日龄增长,两组...     

2015—2016年山东省由赤道几内亚输入的恶性疟原虫抗药性基因多态性分析

目的　了解山东省由赤道几内亚输入的恶性疟原虫抗性基因多态性情况。方法　采集2015—2016年山东省由赤道几内亚务工返乡的输入性恶性疟患者血样,提取疟原虫基因组DNA,对恶性疟原虫抗性基因Pfcrt、Pfmdr1、Pfdhfr、Pfdhps、K13进行套式PCR扩增、DNA测序和序列对比分析。结果　全部样本5种抗性基因目的片段均成功扩增和测序。Pfcrt野生型、突变型、混合型分别占72.8%、18.6%、8.6%,突变型全部为CVIET（下划线表示突变位点,下同）;Pfmdr1野生型、突变型、混合型分别占20.0%、61.4%、18.6%,突变型主要为YF和NF;Pfdhfr野生型、突变型、混合型分别占1.4%、98.6%、0,突变型主要为AIRNI;Pfdhps野生型、突变型、混合型分别占1.4%、94.3%、4.3%,突变型主要为SGKAA;Pfdhfr和Pfdhps完全抗性基因型IRNGE占8.6%;1.4%的样本K13基因发生A578S突变。结论　山东省由赤道几内亚输入的恶性疟原虫Pfcrt、Pfmdr1、Pfdhfr、Pfdhps、K13基因均发生不同程度突变;Pfcrt突变型比例较低,Pfmdr1、Pfdhfr、Pfdhps突变型比例较高;检测到K13基因发生A578S突变。     

中凹卧位联合间歇充气加压泵预防胸腹腔镜食管癌根治术后深静脉血栓的效果

目的：探讨中凹卧位联合间歇充气加压泵预防胸腹腔镜食管癌根治术患者术后深静脉血栓(deep vein th-rombosis, DVT)的效果及影响。方法：行胸腹腔镜食管癌根治术104例患者随机分为常规护理组(对照组)和中凹卧位联合间歇加压充气泵组(观察组),各52例。对照组采用常规护理措施,行腹部手术操作时采取常规体位,整体头高足低20°。观察组行腹部手术操作时采用中凹卧位(头胸部抬高20°,下肢抬高30°)联合间歇充气加压泵,术后连续3 d使用间歇充气加压泵。术后1周比较两组患者的DVT形成情况。通过比较两组患者的凝血功能及Caprini血栓风险评估DVT发生的风险。同时比较两组患者的护理满意度。结果：观察组患者的DVT发生率为1.9%,显著低于对照组(13.5%)(P=0.027)。观察组患者术后即刻,术后第1、3天的D-二聚体水平及Caprini血栓风险评分均低于对照组(均P＜0.05)。观察组的护理满意度显著高于对照组(P＜0.05)。结论：中凹卧位联合间歇充气加压泵可有效预防胸腹腔镜食管癌根治术患者术后DVT的发生,提高了护理满意度,值得推广应用。     

鲁西南地区间日疟原虫Pvmsp-1基因分型及序列同源性研究

目的了解不同时期鲁西南地区间日疟原虫Pvmsp-1基因分型及序列同源性特征。方法收集不同时期采制的鲁西南地区间日疟患者厚、薄血膜标本,用巢式PCR方法扩增间日疟Pvmsp-1基因icb5~icb6片段,对产物进行PvuⅡ酶切鉴定和序列比对分析及系统进化分析。结果 25份间日疟样品巢式PCR产物大小均为470bp,经PvuⅡ酶切均获得350bp和120bp两条片段,为Sal-1型。进化树分析25个样品株处于同一个大分支,且与Sal-1型标准株株同属一个总分枝,而与Belem型标准株遗传距离较远。结论鲁西南地区不同时期流行株间日疟原虫Pvmsp-1基因均为Sal-1型,株间序列同源性较高。     

pEGFP?N1?HBsAg?ROP2多基因重组表达质粒的构建及表达鉴定

目的 构建pEGFP?N1?HBsAg?ROP2重组质粒,并转染HEK293T细胞进行表达鉴定,为弓形虫病核酸疫苗的研制奠定基础。 方法 根据HBsAg基因序列和pcDNA3?p30?ROP2重组质粒酶切位点设计引物,PCR扩增HBsAg基因,经酶切、连接、转化,利用HBsAg基因替换p30基因,构建pcDNA3?HBsAg?ROP2重组质粒;经HindⅢ和KpnⅠ双酶切,将HBsAg?ROP2片段与pEGFP?N1真核表达载体相连,构建pEGFP?N1?HBsAg?ROP2重组表达质粒,转染HEK293T细胞,观察其蛋白表达水平。结果 HBsAg片段PCR产物约700 bp,与理论值相符;构建pcDNA3?HBsAg?ROP2重组质粒,双酶切电泳后得到约5.4 kb和1.9 kb的两条带,与预期结果相符。pEGFP?N1?HBsAg?ROP2双酶切后产生约4.7 kb和1.9 kb的条带,经测序鉴定,与GenBank发表的序列同源性为99.84%。目的基因已成功转染入HEK293T细胞中,且正确表达,蛋白浓度为3.08 mg/ml。结论 成功构建pEGFP? N1?HBsAg?ROP2重组表达质粒,转染HEK293T细胞能正确表达。     

硫化氢对长期过量饮酒小鼠心肌纤维化及miR-221表达的影响

目的研究硫化氢(H2S)对长期过量饮酒小鼠心肌纤维化的作用。方法 44只实验小鼠随机分成4组:对照组、模型组、硫氢化钠(Na HS)组和DL-炔丙基甘氨酸(PAG)组。除对照组外,其他小鼠采用每日自由饮用4%(Vol/Vol)的乙醇水溶液12 w诱导酒精性心肌纤维化模型。另外,Na HS组小鼠予每日腹腔注射Na HS溶液(50μmol/kg)。PAG组小鼠予每日腹腔注射PAG溶液(40 mg/kg)。12 w后,用VG染色观察胶原沉积,免疫组化测定心肌中Ⅰ型胶原蛋白的表达水平,实时荧光定量PCR(RTq PCR)检测mi R-221的表达水平。结果模型组小鼠心肌胶原沉积较对照组明显加重,Ⅰ型胶原蛋白表达明显增多,mi R-221表达也显著上调(P0.05)。Na HS组上述指标变化均得到明显改善。相反,PAG组上述指标变化进一步明显加重。结论 H2S具有改善长期过量饮酒导致的心肌纤维化的作用,其机制可能与下调mi R-221的表达有关。     

减轻体重对伴有糖耐量受损的超重及肥胖者代谢指标的影响

目的探讨减轻体重对于伴有糖耐量受损（IGT）的超重及肥胖者血糖、血脂、血压等代谢状况的影响。方法以降低体重为目标,由专门培训的医护人员对91例超重或肥胖的IGT患者进行生活方式跟踪指导,观察和分析减重对于超重及肥胖的IGT患者血糖、血脂、血压、肝功能、尿酸等代谢状况的影响,并对其效果进行评价。结果经过3个月的管理患者体重明显下降,同时腰围、空腹血糖、餐后血糖、收缩压、舒张压、谷草转氨酶均明显下降,差异有统计学意义（P〈0．05）。超重及肥胖患者体重分别平均下降1．8b及2．3kg,为减重前体重的2．37％及2．72％。2组患者血糖、血压均明显降低,在超重组腰围及谷草转氨酶也显著降低,而肥胖组患者腰围及谷草转氨酶未见到显著下降。结论合理减重对于伴有IGT超重及肥胖者的中心性肥胖、血糖、血压和脂肪肝有明显的改善,有益于逆转他们的多种代谢异常。短期体重控制对于超重患者代谢指标改善效果明显,对于肥胖患者可能需要更长时间和更大幅度的减重,才能见到明显效果。