微型双功能抗体抗CD3／抗CD20的构建和表达

目的：构建和表达抗CD3／抗CD20微型双功能抗体,并测定微型双功能抗体的生物学活性。方法：采用PCR和overlap PCR方法构建抗CD3／抗CD20微型双功能抗体,并用双脱氧终止法测定DNA序列;采用亲和层析法纯化该产物,并用Western blot和分了排阻层析鉴定纯化产物;采用FACS法和玫瑰花环试验鉴定纯化产物与靶细胞的结合活性。结果：DNA序列测定结果表明：抗CD3／抗CD20微型双功能抗体已构建成功,表达可溶性产物的产量达1mg/ml以上,纯化产物中二聚体的比例达90％,具有与Jurkat(CD3^ 0和Daudi细胞（CD20^ ）结合的活性,且能同时与Jurkat和Daudi细胞结合形成玫瑰花环。结论：利用Diabody形式,首次成功地构建了抗CD3／抗CD20微型双功能抗体,并获得较高表达,表达产物具有与相应2个靶抗原结合的活性。     

抗CD_3/抗CD_(20)双功能抗体介导的特异性靶向杀伤活性的实验研究

目的　研究抗CD3 /抗CD2 0 微型双功能抗体介导的特异性靶向杀伤活性。方法　采用亲和层析法纯化本室构建的抗CD3 /抗CD2 0 微型双功能抗体可溶性表达产物 ,并用Westernblot、分子筛层析、流式细胞仪和玫瑰花环试验鉴定纯化产物 ;采用51Cr释放试验测定其介导的体外靶向杀伤活性 ;采用人B淋巴瘤裸鼠移植瘤腹腔模型测定其介导的体内靶向杀伤活性。结果　纯化的抗CD3 /抗CD2 0 微型双功能抗体具有与Jurkat细胞 (CD3 )和Daudi细胞 (CD2 0 )结合的活性 ,且能同时与Jurkat和Daudi细胞结合形成玫瑰花环 ;在体外能介导激活的T细胞杀伤Daudi细胞 ;在人B淋巴瘤裸鼠移植瘤腹腔模型生物治疗中 ,抗CD3 /抗CD2 0 微型双功能抗体能抑制腹水的形成 ,明显延长荷瘤裸鼠的生存时间。结论　抗CD3 /抗CD2 0 微型双功能抗体在体外和体内均能介导激活的T细胞杀伤表达CD2 0 抗原的肿瘤细胞 ,是一个有望用于B细胞恶性肿瘤临床治疗的双特异性抗体。     

抗P-gp/抗CD3双功能抗体在裸鼠体内介导人T细胞杀伤白血病耐药细胞

目的研究抗P—gp／抗CD3微型双功能抗体介导T细胞对白血病耐药细胞的特异性靶向杀伤活性。方法采用亲和层析法纯化本室构建的抗P—gp／抗CD3微型双功能抗体可溶性表达产物，并用SDS—PAGE，Western blot及活细胞间接免疫荧光法鉴定纯化产物；采用人白血病耐药及敏感裸鼠移植瘤模型测定该微型双功能抗体介导的体内靶向杀伤活性。结果纯化的抗P—gp／抗CD3微型双功能抗体具有与Jurkat(CD3阳性)和K562／A02细胞(P—gp阳性)的结合活性，结合阳性率分别为86．25％，86．26％；在对人白血病裸鼠移植瘤模型的生物治疗中，抗P—gp／抗CD3微型双功能抗体能有效抑制耐药自血病移植瘤的生长，抑瘤率98．57％。结论抗P—gp／抗CD3微型双功能抗体在体外及动物肿瘤模型实验中能介导人T细胞有效杀伤表达P—gp抗原的耐药肿瘤细胞，具有潜在的临床应用前景．     

高校艾滋病综合防治“1234＂健康教育模式探索

目的探索艾滋病综合防治“1234”健康教育模式,对艾滋病干预的有效性和可行性。方法以浙江工商大学1496名大学生为研究对象,分为调查组和对照组;调查组为接受“1234”健康教育的大学生,对照组为刚入学的新生;比较两组艾滋病综合防治相关知识,态度及行为（KAP）情况。结果调查组艾滋病综合防治KAP总分和知识、态度、行为得分为86．4、53．4、15．3、16．3分,均明显高于对照组相应得分66．7、39．9、13．2、13．8分,差异有统计学意义（P〈O．01）。结论艾滋病综合防治“1234”健康教育模式,对艾滋病干预有一定的效果,值得推广。     

冠状动脉钙化及旋磨术研究进展

冠状动脉粥样硬化性心脏病（Coronary artery disease,CAD）是一种高发病率、起病隐匿的疾病。冠状动脉造影作为诊断冠心病的金标准,对于血管管腔的狭窄程度较敏感,却不能反映出动脉粥样硬化斑块的性质。冠状动脉钙化（Coronaly arterycalcium,CAC）和动脉粥样硬化之间仔在着密切关系。病理研究证实钙化现象仅发生于血管粥样硬化的病变处,并且贯穿于整个动脉粥样硬化病理过程。通过检验并量化冠状动脉的钙化病变,能够早期诊断并预防冠心病的发生。     

慢性肾脏病不同分期血二氧化碳结合力的变化及其影响因素分析

目的：调查慢性肾脏病（CKD）患者血二氧化碳结合力（CO2-CP）水平的基础状况。方法：对中山大学附属第三医院肾内科门诊就诊的CKD患者进行为期9个月的前瞻性横断面调查,分析其病例基线特征及各期血CO2水平与代谢性酸中毒的发生率。结果：共有715例CKD病例入选。前4位CKD的病因分别为原发性肾小球疾病、高血压肾病、狼疮肾炎和糖尿病肾病。CKD3期以后,随着CKD分期的进展,血CO2-CP水平逐级显著性降低,代谢性酸中毒的发生率逐级显著性升高。多元回归分析结果显示,血CO2-CP水平和肾小球滤过率呈显著性正相关,血CO2-CP水平和血清钾以及蛋白尿程度呈显著性负相关。结论：对CKD患者血CO2-CP水平单中心横断面调查,将有助于确定CKD患者血CO2-CP水平的变化规律,为进一步综合防治CKD及其并发症奠定基础。     

经下颌骨正中离断外旋入路切除舌根癌以及同期重建舌根的临床研究

目的：探讨对舌根／累及舌根的恶性肿瘤施行经下颌骨正中离断外旋入路切除舌根癌以及同期重建舌根的临床治疗效果。方法：2004年1月至2013年12月收治的37例舌根／累计舌根的恶性肿瘤患者的临床资料．男29例,女8例。舌根原发癌27例,其中鳞癌24例,粘液表皮样癌3例;累及舌根的咽侧、扁桃体鳞癌10例。均经下颌骨正中离断外旋入路。施行单纯舌根切除13例,单侧舌根切除＋咽侧切除10例,单侧舌根＋半舌切除11例,半舌切除＋喉部分切除3例。舌根重建的方法：直接拉拢缝合5例,舌瓣后置6例,全腭瓣3例,带蒂胸大肌皮瓣5例,游离前臂皮瓣12例,游离股前外侧皮瓣6例。11例行双侧颈淋巴清扫术,26例行单侧颈淋巴清扫术。结果：全组肿瘤切除率100％,均未出现残舌坏死,术后吞咽、语言、呼吸和咀嚼功能恢复良好。37例原发灶切缘均呈阴性,21例（56．75％）出现淋巴结转移。除2例行全舌根＋喉部分切除的病例终身带管外,其余35例皆在14～38 d拔出气管套管。术后10～28 d拔出胃管经口进食。中位随访时间36个月,Kaplan－Meier法统计3年和5年生存率分别为72．97％（27／37）和67．56％（25／37）。结论：舌根／累及舌根的恶性肿瘤施行下颌骨正中离断外旋入路切除舌根癌以及同期重建舌根的临床治疗效果良好。该术式可以充分暴露口咽和舌根,提高了手术安全性。是比较理想的术式,最大限度保留舌动脉是能否施行单纯舌根切除的和残舌组织能否成活的关键所在。     

补体C5a受体拮抗剂体外筛选平台的建立

目的　建立稳定的补体C5a受体（C5aR）拮抗剂筛选平台。方法　采集人外周静脉抗凝血,与不同浓度C5a、脂多糖及PMX-53孵育10～30 min。通过流式细胞术检测中性粒细胞表面CD11b的表达,溶菌酶检测试剂盒观察中性粒细胞分泌溶菌酶的能力变化,罗丹明-123检测中性粒细胞呼吸爆发的变化,ELISA检测细胞上清液中白细胞介素（IL）?鄄8的表达变化,Western Blotting检测胞外信号调节激酶（ERK）、蛋白激酶B（AKB或AKT）含量及其磷酸化水平的变化,考察补体C5a刺激及使用阳性药物PMX?鄄53后对各生化指标的影响。结果　C5a刺激人外周血可增强中性粒细胞CD11b的表达,促进溶菌酶释放和IL-8的分泌,激发呼吸爆发,上调ERK、AKT的含量和磷酸化水平,阳性药物PMX-53则能显著抑制C5a的上述生物学效应。结论　成功建立C5aR拮抗剂人全血体外筛选平台,为C5aR拮抗剂筛选及功能研究奠定了基础。     

某高校大学生运动损伤特征分析

运动损伤是指在体育运动过程中发生的损伤.在高校体育教学中运动损伤时有发生,在不同程度上影响了大学生的身心健康和活动能力,给大学生的学习和生活带来不便,也是大学生前往校医院就诊较高的病种之一.近年来关于大学生运动损伤现状调查与预防措施方面有不少研究报告[1-4].为了进一步做好大学生医疗保健工作,降低运动损伤的发生,本文对2011年9月至2013年9月期间在浙江工商大学校医院就诊的658例运动损伤患者进行统计分析,以期找到有效的预防措施.     

中国肾小球滤过率评估方程应用于老年慢性肾脏病患者评价

目的评价现有在中国人群基础上开发的肾小球滤过率(GFR)评估方程对老年慢性肾脏病(CKD)患者的适用性。方法选择103例老年CKD患者,用中国方程、瑞金方程分别预测GFR值,与体表面积标准化99mTc DTPA测的GFR(sGFR)进行比较。结果Bland-Altman分析显示瑞金方程估计的GFR和sGFR的一致性最好,但所有方程估计的GFR和sGFR的一致性限度均超过事先规定的专业界值。线性回归结果显示,瑞金方程估测的GFR与X轴的斜率比其他方程更小。瑞金方程、MDRD1方程和中国5方程估测GFR15%符合率、30%符合率和50%符合率均较高,但所有方程估测GFR30%符合率依然低于70%。在CKD的不同分期中,瑞金方程和MDRD1方程估测GFR15%符合率、30%符合率和50%符合率均较高。结论当血肌酐的测定方法为酶法时,如果直接应用目前在中国人群基础上开发出的GFR评估方程预测老年CKD患者的GFR,可能会产生明显的偏差。