携带BMP-2基因的慢病毒感染大鼠骨髓间质干细胞定向分化

目的构建含有人骨形态发生蛋白2（human bone morphogenetic protein 2, hBMP2）cDNA的重组慢病毒DNA，在293T细胞中进行慢病毒包装和表达检测。用慢病毒感染大鼠骨髓间质干细胞后，观察其向成骨细胞分化的情况。方法从GenBank中调出hBMP2基因序列，设计带有NheⅠ、AgeⅠ酶切位点引物。从人肝脏组织中抽提总RNA，再反转录成cDNA，扩增出hBMP2 cDNA的全长序列。测序验证后克隆到慢病毒载体pHIV-CS-CDF-CG-PRE上，通过PCR扩增、酶切、测序等方法鉴定重组慢病毒DNA。将该重组慢病毒DNA同辅助质粒一起共感染293T细胞，通过重组而包装成能表达hBMP2基因的有活性的慢病毒。慢病毒感染大鼠骨髓间质干细胞，通过碱性磷酸酶（AP）、钙沉积定量测定、Ⅰ型胶原蛋白表达观察干细胞向成骨细胞转化的情况。结果①扩增出1．2kb左右的hBMP2全长cDNA与GeneBank中的hBMP2阅读框架序列完全一致；②成功构建和克隆了含hBMP2基因的慢病毒重组DNA（pHIV-hBMP2）；③对重组慢病毒DNA进行了成功包装和分析。④大鼠骨髓间质干细胞感染慢病毒后，碱性磷酸酶分泌增加，钙沉积增加，Ⅰ型胶原蛋白表达增加，成功向成骨细胞转化。结论重组慢病毒携带hBMP2基因感染大鼠骨髓间质干细胞可以使其向成骨细胞定向分化，为组织工程研究提供良好的种子细胞。     

磷酸镁骨黏合剂生物学固定强度及组织学的实验研究

目的研究磷酸镁骨黏合剂(MPC)植入家兔骨内的生物学固定强度,并作组织学观察。方法①生物力学部分:双侧股骨髁上钻孔后,分别植入MPC和磷酸钙骨水泥(CPC),术后分别饲养1、2、3、4、6和8 周后取出股骨下段作推出试验。②组织学部分:家兔右股骨髁上钻孔后填入MPC,术后分别饲养24 h、1、2周和 1、2、3个月,分批处死后取出标本,作不脱钙病理切片。结果①生物力学部分:在不同时间,MPC组的生物学固定强度均显著大于CPC组(P<0．05)。②组织学部分:2周时MPC开始吸收,2个月时MPC已完全吸收,骨孔愈合良好。结论 MPC的生物学固定强度比CPC大,且MPC可降解,可用于骨折黏合固定。     

防治慢性腰痛四问

一问：慢性腰痛患者怎样做腰背肌锻炼？ 慢性腰痛的原因很多，如腰椎间盘突出、腰椎管狭窄、腰椎滑脱、急慢性腰扭伤、腰肌劳损等。前三者严重时往往需要手术治疗，而腰肌慢性劳损或急性腰肌损伤后引起的腰痛患者常有躯干肌力的减弱。疼痛与肌力减弱可互为因果，使下腰痛迁延难愈。因此，进行腰背肌训练是治疗及预防慢性腰痛的重要方法之一。对腰椎手术后卧床休息的患者来说，适当进行一些腰背肌锻练，对防止腰背肌萎缩，提高手术疗效也起重要作用。因此，对于腰痛患者，     

MMP-1、13 mRNA和DDR2表达与关节软骨退变的关系

目的探讨关节软骨基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMPs）-1、13mRNA及盘状结构域受体（discoidin domain receptor，DDR2）三者与关节软骨退变的关系。方法对58例关节软骨标本应用反转录-多聚酶链反应法（RT-PCR）测定MMP-1、13mRNA的表达，免疫组化法显色DDR2表达，进行图像分析研究。结果在轻度退变关节软骨中MMP-1、13呈低表达，在中重度退变软骨中MMP-1、13表达显著增高，在重度退变软骨中MMP-1，13有相对的下降，DDR2表达也呈现出与MMP-1、13相同的表达特点。结论MMP-1、13的过表达导致软骨Ⅱ型胶原的降解是软骨退变的重要原因，Ⅱ型胶原降解片段诱导DDR2表达增高进一步介导MMP-1、13的表达形成一个放大效应而加速了关节软骨退变。     

骨髓间充质干细胞透明质酸钠溶液修复大鼠早期退变椎间盘的作用

目的研究无外源性生长因子及细胞支架的作用下，应用体外培养传代的骨髓间充质干细胞（bonemesenchymal stem cells，BMSCs）与透明质酸钠混合溶液修复大鼠早期退变椎间盘的作用。方法取同种基因大鼠的BMSCs，通过贴壁法培养传代，与医用透明质酸钠混合配制。10只SD大鼠，尾椎上取相邻3个椎间盘，由近端至远端设为细胞植入组、椎间盘退变组、正常对照组。分别于细胞植入组、椎间盘退变组建立退变模型。1周后，细胞植入组注射BMSCs与透明质酸钠溶液。3周后，X线片比较椎间盘高度指数（discheightin-dex，DHI），组织病理学方法行病理观测并评分，RT-PCR测定Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖的mRNA表达。结果细胞植入组的DHI值与椎间盘退变组相比无明显改善且远低于对照组。病理切片结果提示植入组髓核纤维环的形态得到保留，髓核纤维环边界清晰，细胞产生增殖分裂，其病理学评分明显高于椎间盘退变组。RT-PCR结果提示细胞植入组Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖的mRNA表达水平较椎间盘退变组明显提高。结论在椎间盘退变早期植入BMSCs与透明质酸溶液可以延缓椎间盘的退变，而不需要外源性细胞因子和三维支架的作用。     

侧块钢板螺钉系统在颈椎后路手术中的应用

目的 探讨侧块钢板螺钉系统在颈椎后路手术中应用的临床经验。方法 对1999年2月－2000年3月间共36例行侧块钢板内固定的患者进行回顾分析。29例（80．6％）获得随访,平均随访时间8个月（4－15个月）。29例患者中颈椎病（3节及3节段以上椎间盘突出）20例,黄韧带骨化症（OYL）1例,后纵韧带骨化症（OPLL）2例,颈椎骨折脱位6例。手术时采取坐位,病变节段行全椎板切除减压,保留关节突。钢板螺钉固定于侧块（即关节突）,同时关节突间植骨融合。结果 29例患者共植入124枚螺钉,平均每位患者4．3枚。颈痛明显改善者为18例（20例术前存在颈痛）占90％。术后3－6月X线随访,27例患者关节突间见骨小梁生成,融合率93％。4例患者路侧块钢板螺钉系统能提供较稳定的固定,有效改善颈痛。钢板螺钉松动与神经根损伤是较严重的并发症。只要严格掌握手术适应证与安装技术,颈椎后路钢板固定是治疗颈椎不稳的一种十分有效的方法。     

合并颅脑外伤昏迷者的骨折愈合及其治疗时机选择

临床发现合并脑外伤昏迷的骨折患者骨痂形成时早量多质硬,这将直接关系到骨折的治疗与愈合。如何治疗该类患者仍存在争议。传统认为先制动患肢,待脑外伤救治完毕后再手术治疗骨折;近来不少作者强调应在48h内完成骨折的手术治疗。通过分析124例重症脑外伤昏迷患者不同时机手术治疗骨折的利弊,认为上述观点不利于该类患者的全身救治,而应在生命体征基本稳定情况下尽早手术治疗骨折。认为重症脑外伤患者合并肢体骨折比较复杂,手术治疗骨折的时机应根据创伤的具体情况来选择。     

CT在评估髌股关节排列中的应用

目的介绍和分析利用ＣＴ评估髌股关节排列的方法和价值。方法在屈膝３０°时用ＣＴ检测３２例５０侧膝髌股关节疼痛者（轴位Ｘ线片上髌股排列基本正常）和１５例２０侧膝无症状者的髌股关节,测量其髁间沟角、和谐角及外侧髌股角,观察病变在ＣＴ上的表现,分析髌股关节疼痛患者的髌股排列状况。结果髌股关节疼痛患者较无症状者具有较明显的髌股排列紊乱,单纯髌骨外置者１１侧膝,单纯髌骨倾斜者８侧膝,髌骨外置合并髌骨倾斜者１０侧膝。结论利用ＣＴ评估髌股关节排列较普通Ｘ线片有显著的优越性,可指导治疗的术式选择     

胫骨扭转畸形与髌骨不稳

目的 通过分析髌股关节退变性关节病患者的径骨扭转畸形与髌骨关节排列紊乱的关系,揭示胫骨扭转畸形诱发ＰＦＤＡ的可能机制。