次声对大鼠大脑皮层神经元型NOS和诱导型NOS mRNA表达的影响

探讨次声作用于大鼠后,大脑皮层神经元型一氧化氮合酶（ｎＮＯＳ）和诱导型一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）表达的变化。方法雄性ＳＤ大鼠放入次声舱,经８Ｈｚ,１２０ｄＢ作用２ｈ,每日１次,分别于１,７和１４ｄ处死动物,取大脑皮层提取总ＲＮＡ,进行ＲＴ－ＰＣＲ,以未经次声作用的作照,检测ｎＮＯＳ和ｉＮＯＳｍＲＮＡ表达的变化。结果次声连续作用,７,１４ｄ后,ｎＮＯＳｍＲＮＡ表明显降低次声作用１ｄ后,ｉＮＯＳ开始表达     

大鼠大脑皮层cDNA文库的构建

0　引言　 c DNA文库的构建和分析是分子生物学的基本方法之一 ,广泛应用于目的 c DNA的筛选 .为了筛选神经系统特异表达的基因 ,我们构建了大鼠大脑皮层的 c DNA文库 .1　材料和方法1 .1　材料　总 RNA分离 kit,m RNA分离 kit,c DNA合成kit,L ambda DNA包装 kit,L ambda gtll载体、质粒 p GEM- 7zf(+) ,DNA L adder购自 Prom ega公司 .[α- 32 P]d CTP(1 .1 1×1 0 5 GBq·m mol- 1 ,370 MBq·m L- 1 )购自北京亚辉生物工程公司 .1 .2　方法1 .2 .1　 c DNA第 1链和第 2链的合成和分析　取成年雄性SD大鼠 (2 0 0 g)大脑…     

人PDGF-A基因的克隆、表达及表达产物的纯化

目的 克隆血小板衍生的生长因子A链（PDGF-A）的基因，并在大肠杆菌中表达。方法 利用RT-PCR法，从人肝癌细胞系（HHCC）的总RNA中，扩增PDGF-A的全长cDNA，再用PCR法扩增PDGF-A成熟蛋白的全长编码序列，编码序列经测序验证后，克隆入表达载体pGEX-4T-1中，构建PDGF-A的原核表达载体，在大肠杆菌中诱导表达目的蛋白，并进行谷胱甘肽（GST）亲和层析纯化。结果 以RT-PCR扩增的PDGF-A基因的全长为1255bp，以PCR扩增得到其成熟蛋白的编码序列为531bp，构建了PDGF-A基因的原核高效表达载体pGEX-PDGF-A。表达产物主要位于包涵体内，对包涵体蛋白进行变性和复性处理后，利用亲和层析法获得纯化的目的蛋白，结论 成功地扩增到PDGF-A成熟蛋白的编码序列，并在大肠杆菌高效表达，为进一步对PDGF-A功能的研究提供了有利的工具。     

人脑肿瘤中猴病毒40大T抗原的表达及与P53、PRb特异性复合物的形成

采用免疫共沉淀结合银染色及Ｗｅｓｔｅｒｎ 印迹法检测６５ 例人脑肿瘤及８ 名正常人脑组织中猴病毒４０（ＳＶ４０）大Ｔ抗原（Ｔａｇ）的表达,并对１８例和１５例Ｔａｇ 阳性瘤组织分别检测Ｔａｇ－Ｐ５３和Ｔａｇ－ＰＲｂ 复合物的形成。ＳＶ４０ Ｔａｇ 在室管膜瘤、脉络丛乳头状瘤、垂体腺瘤、星形细胞瘤、脑膜瘤、多形性胶质母细胞瘤及髓母细胞瘤中均有表达,而８ 名正常人脑组织均无Ｔａｇ 表达;所检测Ｔａｇ 阳性瘤组织分别发现Ｔａｇ 并可与Ｐ５３、ＰＲｂ 形成特异性复合物。结果提示ＳＶ４０ 与人脑肿瘤的发生有关,Ｔａｇ－Ｐ５３ 及Ｔａｇ－ＰＲｂ 复合物的形成导致Ｐ５３ 和ＰＲｂ 失活,可能是ＳＶ４０ 致人脑肿瘤发生的一个重要机制。     

蛋白激酶A参与介导大鼠受损背根节神经元的自发放电

目的在背根节(DRG)慢性压迫模型上,采用单纤维记录神经元自发放电和生化检测受损组织中蛋白激酶A(protein kinase,PKA)活性的方法,研究PKA在DRG压迫损伤后感觉神经元中自发放电的作用.结果压迫损伤侧DRG组织中的PKA磷酸化PepTag肽百分数为25.51±2.62%,较未受压迫侧和正常组DRG组织明显增加(P＜0.05).PKA催化亚单位抑制剂H-89(10μM)可以明显抑制受损DRG神经元的自发放电,抑制百分数为76.91±13.79%.结论受损DRG组织中PKA活性上调,高活性的PKA参与介导受损DRG神经元的自发放电.