液相色谱法分离纯化单克隆抗体的进展

本文介绍了近年来国内外液相色谱法(包括常压液相色谱法和高效液相色谱法)在单克隆抗体分离纯化中的应用。由于单克隆抗体分子的特殊性,其分离纯化的方法也多种多样,各种不同分离原理的液相色谱法:离子交换色谱,凝胶过滤色谱,疏水性相互作用色谱,亲和色谱,羟基磷灰石吸附色谱,以及新近发明的亲硫吸附色谱和混合态色谱都在单克隆抗体分离纯化中有着程度不同的应用。这些液相色谱方法可适用于分离纯化腹水或杂交瘤细胞培养上清液中的小鼠、大鼠和人源的不同类型及亚类的单克隆抗体。本文还就各种不同方法的应用范围,及纯化结果的纯度、活性回收率、纯化周期、每批可纯化样品量、纯化成本等方面作了比较和讨论。     

牙龈卟啉菌381胞外膜泡中胰酶样蛋白酶的理化性质测定

对牙龈卟啉菌（Ｐｇ）３８１胞外膜泡中提取的胰酶样蛋白酶（ＴＬＰ）的理化性质进行了检测，结果表明：ＴＬＰ属于半胱氨酸类蛋白酶，分子量在天然状态时是４７６００ｕ，在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ中为２８３００ｕ，表明它是由一个２８３００ｕ的亚基和一个或几个小于１００００ｕ的亚基组成；在ｐＨ７．５时，它的酶活性最高。     

牙龈卟啉菌（Pg）的胰酶样蛋白酶（TLP）检测

对Ｐｇ的ＥＣＶ和ＯＭＰＣ的ＴＬＰ检测结果显示：ＥＣＶ中的酶（ＴＬＰ）和蛋白含量均高于ＯＭＰＣ，ＥＣＶ中的ＴＬＰ活性在细菌生长早期随细菌的快速增长而升高，与细菌的生长基本同步，说明：（１）ＴＬＰ的酶合成是发生在细菌生长早期；（２）ＥＣＶ的形成是生长期细菌的一个特征，而不是老化的细菌或者非生长期细菌的代谢产物。     

次声作用后大鼠下丘脑HSP70的表达

研究大鼠经次声作用后下丘脑中ＨＳＰ７０的表达。方法ＳＤ大鼠先经８Ｈｚ,１２０ｄＢ次声作用２ｈ,然后分为８组,每组３只。分别于次声作用后０．５,１,２,３,４,５,６和７ｈ后取下丘脑,通过Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ技术检测ＳＨＰ７０的表达。结论ＨＳＰ７０参与了次声应激后机体的反应机制。     

重组肌腱蛋白-R不同功能片段的表达、纯化和生物学功能

目的 将肌腱蛋白-R不同功能片段在原核中表达、纯化、并研究其初步的生物学功能。方法 将编码肌腱蛋白-R不同功能片段的表达质粒pGEX-EGFL,pGEX-EGFS,pGEX-FN1-2,pGEX-FN6-8,pGEX-FG及空载pGEX-KG转化入E.Coli JM109中,用IPTG诱导表达,以谷胱甘肽琼脂糖为填充料进行亲合层析,纯化所表达的融合蛋白。以纯化的融合蛋白作为培养液成分,GST为对照,观察纯化的肌建蛋白-R各功能片段对体外培养脊髓细胞活性及突丰收生长的影响。结果 肌腱蛋白R的5个片段在大肠杆菌中都有表达,通过谷胱甘肽琼脂糖亲合层析,都得到了初步纯化。通过对培养细胞进行MTT染色,NSE染色后图像分析,结果表明,EGFL,FN1-2促进神经元的存活,EGFL,EGFS和FN6-8对突起的生长有明显的促进作用。结论 肌腱蛋白-R的不同功能片段可以通过大肠杆菌表达,经纯化获得蛋白,肌腱蛋白-R不同的片段对体外培养的脊髓细胞有不同的作用。     

SV40大T抗原在人脑肿瘤中与p53形成特异性复合物

目的 探讨SV40早期区域基因编码产物大T抗原（Tag) 表达及与抑癌蛋白p53的相互作用在人脑肿瘤发生发展中的意义。方法 采用免疫共沉淀及Western印迹法检测43例人脑肿瘤组织及5例正常人脑组织中Tag的表达，并对18例Tag阳性瘤组织检测Tag-p53复合物的存在。结果 Tag在5例室管膜瘤及2例脉络丛乳头状瘤中全部表达，垂体腺瘤（5／6）、星形胶质细胞瘤（7／10）、脑膜瘤（4／6）、多形性胶质母细胞瘤（3／5）及髓母细胞瘤（2／5）均有Tag的表达，3例少枝胶质细胞瘤、1例松果体瘤及5例正常人脑组织无Tag表达；检测18例Tag阳性瘤组织均发现Tag与p53形成特异性复合物。结论 在人脑肿瘤组织中Tag广泛表达，Tag可与p53形成特异性复合物，Tag-p53特异性复合物的形成导致p53失活，可能是SV40致人脑肿瘤发生的一个重要机理。     

兔抗人PDGF-A抗体的制备与鉴定

血小板衍生的生长因子(platelet—derived grovdh factor，PDGF)是由A、B链通过二硫键连接而形成的二聚体有研究表明，PDGF—A参与创伤愈合过程中的炎症反应、肉芽组织和瘢痕形成。另外，PDGF—A对雄性小鼠生殖系统的发育也起着决定性的作用，提示其对于生殖系统某些疾病的诊断和治疗可能具有重要意义。为此，我们制备了免抗人PDGF—A的抗体，为进一步研究PDGF—A的功能提供有用的试剂。     

人血清视黄醇结合蛋白的分离纯化

血清视黄醇结合蛋白(Retinol Binding Protein,RBP)是将肝脏中的Vit A 转运到外周组织的载体。目前我国尚不能检测血清RBP,也未见有对血清RBP的分离与纯化的报道。我们以色谱法分离和纯化了人血清RBP。 1 材料和方法 新鲜人全血2000ml来自健康献血者,分离出血清,血清对缓冲液A(20mmol/L磷酸缓冲液,pH7.4)透析过夜,然后离心(10000g,20min),     

无电极缓冲液的水平薄层SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳

无电极缓冲液的水平薄层ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳邵军，陈镔复，刘智广（中心实验室）关键词蛋白质，ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳，缓冲液，凝胶条中图法分类号Ｑ５１电泳已成为当代测定生物大分子特性和纯度的主要工具之一。它的高分辨率既能用于分析又能用于制备，设...     

急性肺损伤小鼠核转录因子-kB表达意义

研究ＮＦ－ｋＢ在肺多糖诱发的急性肺损伤中的动态表达，证实ＮＦ－ｋＢ参予炎症反应中的信号转导过程，方法纯种雄性昆明小鼠３６只随机分６组，正常对照及不才病组，致病组腹腔注射脂多糖形成急性肺损伤模，采用Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ法检测正常鼠及致病发鼠肺组织中ＮＦ－ｋＢ的总蛋白含量，进行统计学处理。