快速高效质粒转化方法的研制

0引言质粒转化是分子生物学最常规的方法之一．质粒转化方法主要有：高压电穿孔法转化大肠杆菌（电转化法），氯化钙法制备感受态细胞的大肠杆菌转化法．电转化法转化效率高，每微克DNA可以得到10’个～10‘’个转化体．但要求一套特殊的仪器．CaCI。法不需要特殊的仪器，操作较为简便，每微克DNA可以得到5X10’个～2X10’个转化体，可以满足常规的克隆需要，已为实验室广泛采用［’j．但标准的质粒转化方法整个过程需要1．sh，操作繁琐．为此我们对质粒转化方法进行改进，建立了一种快速、高效，可以在5min内完成一次质粒转化的方法．…     

肥大细胞与肺纤维化

肺纤维化(FLD)的发病机制尚不清楚,近来的注意力集中于肥大细胞(MC)在纤维化发生的可能作用上.该项研究评价5组FLD 患者肺组织存在的MC与肺纤维化的可能关系.方法49例FLD 患者,均无个人和家族过敏性疾病史.其中16例结节病(A 组,平均年龄37.4±15.4岁),15例农民肺(B 组,45.8±8.2岁).9例隐原性致纤维化肺泡炎(C 组,52.1±16.4岁),6例阻塞性细支气管炎性机化性肺炎(D 组,61.6±7.4岁),3例组织细胞增多病X(E 组,36.6±21.3岁);均作支气管肺泡灌洗(BAL),并对其经支气管镜活检标本进行光镜检查.以7例肺癌患者(58.8±14.4岁)无病     

成年大鼠嗅神经鞘细胞纯化培养的研究

嗅神经鞘细胞(olfactoryensheathingcells,OECs)是目前用于神经再生研究较为理想的移植细胞,为了建立一种可以有效获得高纯度、高均一性的OECs培养方法,本实验采用2. 5月的大鼠嗅球为实验材料进行OECs培养,同时结合OECs的生物学特点在培养8d后,通过用硝酸纤维素膜吸附p75抗体,再对培养的OECs进行免疫亲和吸附和对成纤维细胞进行补体杀伤来纯化OECs, 在纯化后分别对培养2、4、6、8d的OECs进行p75免疫组化染色和纯度鉴定。实验结果发现,本研究采用的OECs纯化培养方法所获得OECs纯度在4个不同培养时间点都达到98%以上,说明此方法是一种高效率的纯化培养OECs的方法。     

成年大鼠脊髓损伤后血-脊髓屏障通透性变化

为了观察脊髓挤压伤后血-脊髓屏障(BSCB)的通透性变化,本研究选用体重180~200g成年雄性SD大鼠39只,随机分为对照组(n=3)和脊髓损伤组(n=6)。后者又分为伤后0、8、24、72h以及1周、2周等6组,每组6只,再分为A组、B组,每组各3只。脊髓损伤组A组的组织切片行H.E.染色,显微镜下观察脊髓损伤后的形态学变化。对照组和B组动物股静脉注射30g/L伊文思蓝,30min后,以温生理盐水及4%多聚甲醛灌注动物,取出脊髓,行冰冻切片,荧光显微镜下观察。结果观察到,脊髓挤压伤术后72h内,损伤区周围均可见伊文思蓝染色,至1周后损伤区周围未见伊文思蓝染色。本研究结果提示,脊髓损伤72h内可能为有效给药时间窗,1周后给药,药物对脊髓损伤的治疗作用将难以达到治疗目的。     

兔抗人PDGF-A抗体的制备与鉴定

血小板衍生的生长因子(platelet—derived grovdh factor，PDGF)是由A、B链通过二硫键连接而形成的二聚体有研究表明，PDGF—A参与创伤愈合过程中的炎症反应、肉芽组织和瘢痕形成。另外，PDGF—A对雄性小鼠生殖系统的发育也起着决定性的作用，提示其对于生殖系统某些疾病的诊断和治疗可能具有重要意义。为此，我们制备了免抗人PDGF—A的抗体，为进一步研究PDGF—A的功能提供有用的试剂。     

Nogo-A在成年大鼠脊髓和背根节的分布

目的研究Nogo—A在成年正常大鼠脊髓和背根节的分布。方法免疫组织化学方法(ABC法)和免疫荧光双标记法。结果正常成年大鼠的脊髓灰质分布有大量的Nogo—A免疫阳性的寡突胶质细胞、运动神经元和中间神经元，免疫阳性反应产物主要分布于细胞的胞体和部分突起中。Nogo—A广泛分布于穿行于脊髓白质的纤维包裹的髓鞘和轴突上。在脊髓前根、后根和坐骨神经的运动和感觉的有髓和无髓纤维也可观察到Nogo—A的表达。而背根神经节的神经元也大量表达Nogo—A，其强度由弱至强不等，广泛分布于大、中、小各类感觉神经元的胞质及突起中。结论Nogo—A在成年大鼠脊髓，背根神经节和外周神经纤维的广泛存在提示其在正常状态下的神经功能中可能起重要作用。     

Nogo-A在维甲酸诱导SH-SY5Y细胞分化后的表达分布

目的研究Nogo-A在维甲酸(RA)诱导SH-SY5Y细胞分化后的表达及分布。方法采用免疫荧光单标记法和免疫荧光双标记法染色,显微镜观察。结果SH-SY5Y细胞经RA诱导后,细胞生长出较长的突起,具有典型的神经元形态。Nogo-A在未分化的SH-SY5Y细胞中主要分布于胞浆中。经RA诱导后,Nogo-A分布于胞浆及突起中,尤以突起末梢生长锥处免疫阳性强度高。结论Nogo-A在RA诱导SH-SY5Y细胞分化后的轴丘和生长锥处的表达提示其在神经元突起生长过程中可能起到重要作用。     

酪氨信号放大间接免疫荧光组织化学方法

0　引言　免疫组织化学方法是对细胞及细胞内的某种抗原物质进行定性、定位或定量检测的方法 .随着标记技术的不断改进 ,使得免疫组织化学方法检测的敏感性大大增强 ;随着显微镜技术的发展 ,且与计算机技术的不断结合 ,可以对抗原物质作更加精确和全面的定位 .我们应用酪氨信号放大间接免疫荧光组织化学方法 ,并结合激光共聚焦显微镜术对脑动脉 Y1 受体免疫反应物质分布进行了观察 .1　材料和方法1.1　酪氨信号放大间接免疫荧光组织化学方法　 11只 SD大鼠 (2 0 0～ 2 5 0 g) ,戊巴比妥钠 (5 0 mg· kg- 1 ,ip)麻醉 ,经心脏灌注 37℃生理…     

研究Fcγ受体特定功能的受体特异性探针

人的白细胞可表达3种不同的IgG Fc区受体(FeγR)家族。为了采用生物素/链亲合素研究受体特异性吞噬作用,作者制备了用抗FcγR单克隆抗体致敏的红细胞(E),首先使E和单克隆抗体(McAb)生物素化,然后通过链亲合素将二者连接。以同法还制     

大鼠心脏中神经肽Y的Y1受体样免疫反应物质的定位

目的 为在细胞水平精确地确定神经肽Y（NPY）的Y1受体样免疫反应物质（-LI）在大鼠心脏中的分布。方法 用免疫组织化学方法对Y1受体-LI细胞进行了检测。结果 （1）一些心肌细胞含有Y1受体-LI,可见清晰的Y1受体免疫反应性（-Ir)条纹,此类细胞在心脏呈斑点状分布,接近外膜侧和室间隔的内膜侧分布较多,Y1受体-LI主要分布于心肌细胞膜、横小管膜和小泡上;（2）心脏内有Y1受体=LI的心内神经元,此类细胞有较长的突起呈离散分布,与Y1受体-LI心肌细胞或血管相邻,Y1受-LI神经元的外膜和胞质内有较强的Y1受体-LI,尤以其突起明显。结论 NPY对心脏作用的复杂性可能与Y1受体在心脏中多种细胞的广泛分布有关。