人乳腺癌耐药细胞株中GCS表达及其与P-gp的关系

目的 探讨葡萄糖神经酰胺合成酶(GCS)在人乳腺癌细胞多药耐药中的作用及其与p-糖蛋白(P-gp)的关系.方法 采用MTT法检测阿霉素对人乳腺癌耐药细胞株MCF-7/Adr和敏感株MCF-7的抑制率和半数抑制浓度(IC50);用浓度为5、10和20μmol/L的GCS抑制剂(PDMP)预处理MCF-7/ADR 24 h和48 h后检测IC50;用流式细胞检测术检测MCF-7及PDMP预处理MCF-7/ADR 前后GCS蛋白、P-gp的表达和细胞中ADM的荧光强度,结果MCF-7/Adr对MCF-7的耐药倍数为22.69倍,PDMP作用后阿霉素对MCF-7/Adr的抑制率升高.IC50下降(P<0.05);MCF-7/Adr 中 GCS和P-gp的表达均高于MCF-7;PDMP使MCF-7/Adr中GCS表达下降(P<0.05),对P-gp表达无明显影响(P>0.05).PDMP可使阿霉崇在MCF-7内潴留增多,结论GICS可能参与肿瘤耐约的发生过程,并在MCF-7/Adr多药耐药中起重要作用;PDMP能影响P-gp功能,GCS与 P-gp有一定关系.     

MT2-MMP在子宫颈癌变过程中的表达及其与瘤内血管生成的关系

目的探讨MT2-MMP在子宫颈癌变过程中表达水平的变化及其与瘤内血管生成的关系。方法采用组织芯片技术和免疫组织化学方法,分别检测子宫颈上皮内瘤变（CIN）和子宫颈鳞状细胞癌组织中膜型基质金属蛋白酶MT2-MMP的表达和瘤内微血管分布。结果 MT2-MMP在正常子宫颈组织中以不表达或低表达为主,而在子宫颈癌变过程中其表达水平显著上调。子宫颈鳞癌Ⅲ级及CINⅡ～Ⅲ级的患者,其MT2-MMP的表达水平显著高于CINⅠ级的患者（子宫颈鳞癌Ⅲ级vs CINⅠ级,P=0.0009;CINⅡ～Ⅲ级vs CINⅠ级,P=0.0323）,子宫颈鳞癌Ⅰ～Ⅱ级的患者,其MT2-MMP的表达水平亦高于CINⅠ级的患者（P=0.0807）;同时,子宫颈癌变过程中,MT2-MMP的表达水平和瘤内微血管密度呈显著正相关（r=0.3176,P=0.0015）。结论 MT2-MMP参与子宫颈鳞癌的发生与发展,并参与促进瘤内微血管的形成,其作为子宫颈鳞癌诊断和治疗潜在分子靶标的临床应用价值,值得进一步研究。     

乳腺癌p16蛋白、mRNA表达、基因突变及临床病理意义探讨

乳腺癌ｐ１６蛋白、ｍＲＮＡ表达、基因突变及临床病理意义探讨袁晓璞陈同钰鲁常青谈敏施达仁徐枫研究发现ｐ１６（ＭＴＳ１）基因的变异与人类多种恶性肿瘤有关［１，２］。我们试图观察原发性乳腺癌的ｐ１６蛋白，ｍＲＮＡ表达和基因突变，并与增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ...     

HSP70和nm23-H1在食管鳞癌中的表达及其意义

近年来研究表明 ,在某些肿瘤中ＨＳＰ70的激活和ｎｍ2 3基因失活与肿瘤的发生和转移关系密切 ,本研究结合临床病理学观察结果 ,回顾性分析ＨＳＰ70和ｎｍ2 3 Ｈ1在食管鳞癌中的表达与肿瘤生物学行为的关系以及对淋巴结转移的影响。资料和方法一、材料和方法 :标本取自 1999年至 2 0 0 0年我院食管癌手术病人的存档石蜡标本 ,食管鳞癌 4 0例 ,男 2 2例 ,女 18例 ,年龄 4 3～ 72岁 ,平均年龄5 5 8岁 ;食管鳞癌切缘标本 10例 ,作为对照组。全部病例均经病理诊断明确 ,所有患者术前未经放疗和化疗。标本用 10 %福尔马林固定 ,石蜡包埋 ,连续切…     

鼻腔孤立性纤维性肿瘤一例

患者女 ,4 8岁。左鼻渐进性鼻塞半年余 ,无涕血、发热、头痛。查体 :外鼻无畸形 ,左侧鼻腔可见半透明息肉状物 ,表面光滑 ,无分泌物 ,嗅觉正常 ,在内镜下摘除左鼻腔新生物 ,术中见肿瘤基底位于中鼻甲 ,组织脆弱。病理检查 :灰白色破碎组织 6 .0cm× 2 5cm× 2 .0cm ,质嫩 ,切面灰白色 ,镜下观察 :肿瘤由细胞稀疏区和细胞密集区组成 ,组织形态多样 ,肿瘤细胞呈短梭形 ,卵圆形、浆少 ,核无明显异型 ,未见核分裂像 ,瘤细胞以杂乱无章式排列为主(图 1) ,可见富于血管区域 ,形成血管外皮瘤样结构 ,波浪状神经瘤样区 ,瘤细胞之间可见大量粗细不等…     

P53癌基因蛋白测定与乳腺癌预后关系的探讨

采用免疫组化方法研究87例乳腺癌病人P53蛋白表达和临床病理参数、预后及ER、PR的关系．结果提示，P53表达与淋巴结转移、核分裂、病理分化、复发转移及PCNA表达呈正相关；与生存期、ER及PR表达呈负相关（P＜0．01）；与年龄、肿瘤大小、组织学类型无关（P＞0．05）．P53阳性预后差，ER阳性预后比阴性好。     

乳腺癌中抗凋亡基因bcl-2蛋白产物的表达及意义

bcl—2通过抑制细胞凋亡过程，从而导致肿瘤发生。为了检测bcl—2在乳腺癌中的表达情况及与临床病理的关系，应用枸椽酸—ABC——微波免疫组化技术．对87例福尔马林固定，石蜡包埋乳腺癌组织进行bcl—2癌基因蛋白表达的测定。结果显示：bcl—2蛋白在乳腺癌原发灶中的阳性表达率63．22％，其表达与ER、PR状况关系密切（均P＜0．001）；随着肿瘤病理学级别的升高，bcl—2蛋白表达率下降。bcl—2蛋白表达在区域淋巴结无转移组比淋巴结有转移组高（P＜0．001），bcl—2阳性表达率在术后生存期≥5年组比＜5年组高，且较少发生原位复发及脏器转移，差异具有显著性意义（P＜0．001）。提示；bcl—2蛋白参与乳腺癌的发生，并与好的预后因素相联系。     

bcl-2在胃肠道间质瘤中的表达

目的 研究胃肠道间质瘤(GIST)中bcl-2的表达及其意义。方法 应用免疫组化Envision二步法检测bcl-2、CD 117、CD 34等在肿瘤中的表达。结果 51例GIST中,CD 117和CD 34阳性表达率分别为100％和76.5％;bcl-2阳性45例,阳性率为88.2％,其中良性、潜在恶性及恶性GIST中,bcl-2阳性表达率分别为100％、91.7％、82.8％,bcl-2阳性表达率与GIST良恶性无显著性差异(P>0.05)。结论bcl-2蛋白可作为诊断GIST的辅助性标记物之一,但不能作为判断GIST良恶性的指标。     

B7家族PD-L1和B7-H4的研究进展

“协同刺激信号”的提出很好地解释了免疫系统对自身和外源性抗原的不同调节机制.B7家族作为唯一能从抗原提呈细胞传递信号给T细胞的共刺激分子,其与相应配体结合在调节免疫反应、炎症及癌症中都起着重要作用.对于B7家族成员在免疫反应中的调节机制仍然不甚清楚,本文综述了程序性死亡配体1(PD-L1)、B7-H4的生物学功能及其与疾病的关系.     

实时荧光定量聚合酶链反应检测B7-H4基因表达的方法学构建

目的 建立实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测协同刺激分子B7-H4基因表达的方法.方法 采用自行设计的检测协同刺激分子B7-H4及内参照基因GAPDH的引物及TaqMan探针,经优化反应体系及反应条件后,检测B7-H4及GAPDH的基因表达.将B7-H4和内参照基因GAPDH的PCR扩增产物经测序鉴定正确并纯化后分别与pMD19-T载体连接,克隆构建含B7-H4及GAPDH基因片段的重组质粒,作为实时荧光定量PCR检测B7-H4及GAPDH基因表达的标准品.将重组质粒标准品进行定量及梯度稀释,建立标准曲线.结果 PCR扩增产物分别经测序证实为B7-H4及GAPDH基因的特异性片段.该法检测B7-H4基因表达的灵敏度为527 copies/ml,线性范围为5.27×102～5.27×107 copies/ml,标准曲线方程为:Y=-3.1395X+41.805,直线回归相关系数r=0.995,批间变异系数范围为2.39%～3.59%,扩增效率108.2%.该法检测GAPDH基因表达的灵敏度为386 copies/ml,线性范围为3.86×102～3.86×107copies/ml,标准曲线方程为:Y=-3.2436X+41.083,直线回归相关系数r=0.999,批间变异系数范围为2.26%～3.86%,扩增效率103.4%.结论　成功构建实时荧光定量PCR检测协同刺激分子B7-H4基因表达的方法,该方法 特异性好、灵敏度高、重复性好.

Abstract：

Objective To establish a real-time polymerase chain reaction (PCR) method to detect costimulatory molecule B7-H4 gene expression. Methods The mRNA levels of costimulatory molecule B7-H4 and the reference gene GAPDH were detected by using real-time PCR using TaqMan technology. The primers and TaqMan probes of B7-H4 and GAPDH were designed. The B7-H4 and internal reference gene GAPDH fragments in pure form from classical PCR amplification were cloned into pMD19-T vector, and recombinant plasmids were used as the standard substances of B7-H4 and GAPDH quantitative detection.Standard curves were established using a serial dilution of quantified plasmids to measure B7-H4 and GAPDH. The reaction systems were optimized, and the sensitivity, specificity and reproducibility were evaluated. Results The amplification products were confirmed as the specific fragments of B7-H4 and GAPDH by DNA sequencing instrument. For B7-H4, the sensitivity was 527 copies/ml. The linear range was from 5.27 × 102 to 5.27 × 107 copies/ml, the standard curve equation was Y = - 3. 1395X +41. 805, the correlation coeffecient was 0. 995, the interassay coefficient of variations was 2. 39% -3.59%, and the amplification efficiency was 108.2%; For GAPDH, the sensitivity was 386 copies/ml. The linear range was from 3. 86 × 102 to 3.86 × 107 copies/ml, the standard curve equation was Y = - 3. 2436X +41. 083, the correlation coeffecient was 0. 999, the interassay coefficient of variations was 2. 26% -3. 86%, and the amplification efficiency was 103.4%. Conclusion The real-time PCR system for quantifying costimulatory molecule B7-H4 mRNA levels has been established successfully with high specificity, sensitivity and good repeatability.