温热化疗对胃癌细胞的杀伤作用

目的：评价温热化疗对人胃癌细胞的体外杀伤作用。方法：6株人胃癌细胞（AGS，MKN45，SGC7901，NCI-N87，SNU—1和SNU-16）和临床病例来源胃癌细胞，处理分常温对照、温热、常温化疗和温热化疗4组；MTT评价细胞增殖和细胞毒作用；光镜动态观察细胞基本形态变化；透射电镜和荧光染色定性观察细胞死亡形式；流式细胞术定量分析凋亡和坏死比例。结果：根据MTT和光镜观察，温热和化疗对抑制胃癌细胞增殖具协同作用；联合温热处理能够增强胃癌细胞对CDDP的敏感性，温热化疗抑制胃癌细胞增殖和杀伤胃癌细胞的药物浓度远低于常温化疗；透射电镜和荧光染色显示温热化疗杀伤AGS和SNU—1细胞包括诱导凋亡和坏死两种形式，流式定量分析显示诱导凋亡是主要形式。结论：温热和化疗抑制胃癌细胞增殖具协同作用，温热增强胃癌细胞对化疗的敏感性；温热化疗杀伤胃癌细胞包括诱导凋亡和坏死两种形式，其中凋亡是主要形式。     

线粒体途径在温热化疗诱导胃癌细胞AGS凋亡中的作用

目的 探讨线粒体途径在温热化疗诱导胃癌细胞AGS凋亡中的作用.方法 应用人胃癌细胞株AGS,根据不同实验处理分为常温对照(NT)、单纯温热(HT)、常温化疗(NTCT)和温热化疗(HTCT)四组.Western blotting法检测AGS细胞中Bax、Bcl-2蛋白及其线粒体胞质蛋白中细胞色素C的表达,实时PCR检测其Bax、Bcl-2的mRNA表达;分别测定各组AGS细胞Caspase 3和Caspase 9的酶活性变化.结果 与NT、HT、NTCT组比较,HTCT组AGS细胞Bcl-2蛋白表达下调而Bax蛋白表达上调,Bax/Bcl-2显著上升;线粒体胞质蛋白中细胞色素C表达增加;Caspase 9和Caspase 3的酶活性显著增高.结论 HTCT可引起AGS细胞Bcl-2、Bax基因和蛋白表达水平发生改变,促使其细胞色素C由线粒体释放进入细胞质,从而诱导细胞凋亡.     

STK15和ki67基因在胃癌组织中的表达研究

目的研究丝氨酸/苏氨酸激酶15(STK15)基因在胃癌组织中的表达,及其与临床病理指标以及ki67表达的关系。方法采用免疫组化检测STK15和ki67在89例胃癌组织中的表达。结果STK15在胃癌组织中的表达阳性率为34.83%(31/89),显著高于邻近的非癌组织的4.49%(12/89)(P<0.01);STK15基因过表达与分化型胃癌及其侵润深度密切相关(P<0.05),而与ki67的表达无相关性。结论STK15基因可能在胃癌发生、发展中起相应作用,其过表达程度可作为胃癌的某些生物学行为新的判定指标。     

单孔胸腔镜联合食管镜超微创治疗食管巨大肿物的疗效与安全性：附2例报告

目的  探讨超微创外科手术在治疗食管巨大肿物上的有效性与安全性, 以期为食管超微创治疗提供新思路、新方法。方法  回顾性分析我院胸外科收治的2例食管巨大肿物患者, 采取单孔胸腔镜配合食管镜双镜联合超微创手术的治疗方式, 统计2例患者的手术时间、术中出血量、术后胸管留置时间、引流量、住院时间、病理结果及严重术后并发症发生率。结果  2例患者在双镜联合超微创手术下, 均成功切除食管巨大肿物。手术时间平均约230 min, 术中出血量平均约20 mL。术后胸管留置时间均为3 d, 引流量平均约395 mL, 术后平均住院时间为7 d。均未出现术中转开胸、食管瘘、肺部感染等严重术后并发症。术后病理检查均提示食管平滑肌瘤, 均治愈出院。结论  单孔胸腔镜联合食管镜超微创手术为食管巨大平滑肌瘤的外科治疗, 提供了新的方向和技术支持, 其疗效与安全性较单一使用单孔/多孔胸腔镜或联合食管镜具有更明显的优势。     

抑制polo-like kinase-1基因表达对5-氟脲嘧啶及顺铂体外诱导胃癌细胞凋亡的影响

目的观察抑制polo-like kinase-1(Plk-1)基因对5-氟脲嘧啶(5-Fu)及顺铂(CDDP)体外诱导胃癌细胞株-MKN45凋亡的影响。方法小片断干扰RNA(siRNA)阻断MKN45细胞Plk-1 基因的表达;定量PCR及Western blot检测Plk-1表达的变化;MTT法检测MKN45细胞增殖速率;流式细胞仪检测MKN45细胞凋亡率。结果经靶向Plk-1的siRNA作用24 h、48 h及72 h后,Plk-1 mRNA水平分别下降了51．91％、89．45％、91．03％,蛋白水平在48 h及72 h分别降低了38．43％和 60．66％;联合应用5-Fu、CDDP与靶向Plk-1 siRNA组的MKN45细胞增殖速率较单用5-Fu、CDDP或靶向Plk-1 siRNA组明显减慢(P<0．05);在48 h及72 h细胞凋亡率明显上升(P<0．05)。结论 Plk-1基因表达抑制在体外可增强5-Fu及CDDP对MKN45细胞的凋亡诱导作用;联合应用靶向Plk-1 的siRNA有可能提高5-Fu及CDDP对胃癌细胞杀伤作用。     

小片断干扰RNA抑制保罗样激酶1基因的表达诱导胃癌细胞凋亡

目的 观察抑制保罗样激酶基因（polo like kinasel，plkl）表达对胃癌细胞——MKN45凋亡的诱导，探讨plk1基因对胃癌细胞增殖及生存力的作用。方法 化学合成小片断干扰RNA（siRNA）阻断MKN45细胞plkl基因的表达；实时定量PCR及Western blot检测干扰前后plk1 mRNA及蛋白质表达的变化；免疫荧光及激光共聚焦显微镜观察MKN45细胞微管改变，流式细胞仪检测MKN45细胞周期及凋亡的变化；Western blot检测pro-caspase3水平的变化。结果 经靶向plk1的siRNA作用后，plk1 siRNA mRNA及蛋白质表达明显下降；MKN45细胞纺锤体结构变得模糊，失去完整性；较多MKN45细胞呈现G2期细胞DNA含量（P〈0．05）；MKN45细胞在48、72h凋亡率较对照组明显上升（P〈0．05）；伴随pro-caspase3水平在72h出现下降。结论 抑制plk1基因表达可导致MKN45细胞凋亡，凋亡机制可能通过caspase3途径；plk1基因对胃癌细胞增殖及存活起着至关重要的作用。     

肿瘤转移相关基因Ezrin在胃癌中的表达及意义

目的 探讨细胞骨架蛋白Ezrin在胃癌中的表达及其意义。方法 采用免疫组织化学方法（免疫组化法）检测组织芯片上90例胃癌组织及12例正常胃组织标本中Ezrin的表达，结合胃癌的临床病理特点进行分析。同时应用Western印记检测胃癌细胞株的Ezrin的表达，体外侵袭试验验证其侵袭能力。结果 90例胃癌组织中Ezrin的阳性表达率为93．3％，而12例正常组织Ezrin表达均阴性，两者比较P〈0.05，差异有统计学意义。同时，Ezrin阳性率与胃癌患者有无区域淋巴结转移相关（P〈0．05）。胃癌MKN-45细胞株中Ezrin的表达（171．72）明显高于其他4个细胞株（47.44～132．51）；同时，MKN-45细胞的侵袭能力（220．21）也强于其他4株胃癌细胞（89．23～210．35）。结论 胃癌组织中的Ezrin阳性表达显著高于正常胃组织，并与胃癌的转移相关。     

丝氨酸/苏氨酸激酶15基因沉默诱导胃癌细胞凋亡

目的 观察丝氨酸／苏氨酸激酶15基因（STK15）沉默后对胃癌细胞MKN45凋亡的诱导作用，阐述STK15基因对胃癌细胞生存的关键作用。方法 化学合成小片断干扰RNA（siRNA）抑制MKN45细胞STK15基因的表达；实时定量PCR及Western印迹检测STK15mRNA及蛋白质表达的变化；流式细胞仪检测MKN45周期分布及凋亡的变化；Hoechest染色观察凋亡形态变化，Western印迹检测pro-caspase3水平的变化。结果 经靶向STK15的siRNA作用48h后，STK15siRNAmRNA及蛋白质表达明显下降；较多MKN45细胞呈现岛期细胞DNA含量（P〈0．05）；细胞凋亡率较对照组明显上升（P〈0．05）；伴随pro—caspase3水平下降。结论 抑制STK15基因表达通过caspase3途径导致MKN45细胞凋亡，STK15基因对胃癌细胞增殖及存活起着关键作用。     

急性胰腺炎时骨髓和循环内皮祖细胞的变化研究

目的 探讨急性胰腺炎时骨髓及循环内皮祖细胞(EPCs)的数量变化及机制.方法 将BALB/c小鼠随机分为对照组和腹腔注射雨蛙素组,腹腔注射后12 h、24 h、48 h,用流式细胞仪测定骨髓和循环中EPCs数量,分别采用ELISA法和Western blot检测循环中VEGF、TNF-α、ET-1含量及胰腺VEGF表达,TUNEL法原位检测胰腺血管内皮细胞凋亡.结果 腹腔内雨蛙素注射后骨髓和循环中EPCs的数量显著增加(P<0.05)并伴有血浆高水平的VEGF、TNF-α、ET-1(P<0.05),骨髓和循环中EPCs数量与血浆VEGF水平呈线性相关(r分别为0.77和0.67);雨蛙素注射后12 h胰腺VEGF表达明显增加;雨蛙素注射后24 h胰腺血管内皮细胞凋亡明显增加.结论 急性胰腺炎可导致胰腺局部血管内皮损伤,并可动员骨髓内EPCs进入循环.