温补肾阳药对激素依赖性肾阳虚动物肝线粒体蛋白质组影响的研究

目的 利用双向凝胶内差异显示电泳技术,分析温补肾阳药对激素依赖性肾阳虚动物肝线粒体蛋白质组影响.方法 正常大鼠、肾阳虚大鼠及温补肾阳药治疗大鼠肝线粒体蛋白质样品分别用荧光染料Cy2,Cy3,Cy5标记,经双向电泳后用不同波长光激发扫描后得到不同样品的蛋白质组图谱,经DeCyder软件分析,以肾阳虚动物与正常动物肝线粒体蛋白质相差1.2倍以上的蛋白作为差异蛋白,共获得16个差异蛋白质,经质谱测定和与蛋白质文库比对,其中11个蛋白质得到鉴定.结果 肾阳虚动物由于肾上腺皮质功能受损,引起热休克蛋白60和70含量增加,可能起到调整处于应激状态的细胞存活、保护细胞免受损伤的作用;肾阳虚动物糖代谢和脂代谢功能降低,而蛋白质代谢和核酸代谢功能增强,表现为二氢硫辛酰胺脱氢酶和脂酰辅酶A脱氢酶活性降低,而肌氨酸脱氢酶、氨甲酰磷酸合成酶和亚硫酸氧化酶活性增加;肾阳虚动物由于三羧酸循环和脂肪酸β-氧化功能障碍,引起ATP合酶、醛脱氢酶和NADH脱氢酶活性代偿性增加,试图通过增加ATP的产量以缓解能量代谢的不足;但肾阳虚动物由于鸟氨酸氨基转移酶活性降低,导致储存能量的肌酸合成降低,使产生的ATP大部分通过热能形式消耗掉,从而导致肾阳虚的临床虚寒症状.应用温补肾阳药治疗后使热休克蛋白60更趋增加,可能加强对细胞的保护作用;温补肾阳药增加二氢硫辛酰胺脱氢酶的活性,可通过改善糖代谢和促进三羧酸循环功能使机体的能量代谢增强;温补肾阳药还可以通过增加ATP合酶和醛脱氢酶的含量,使ATP的产量增加,缓解能量代谢功能障碍.结论 温补肾阳药可以通过调整线粒体内多种与能量代谢相关蛋白质表达而起到治疗肾阳虚的作用.     

温补肾阳药对肾上腺切除的肾阳虚大鼠肝线粒体蛋白质组的影响

目的 应用凝胶内差异显示电泳技术和质谱技术研究温补肾阳药对肾上腺切除的肾阳虚大鼠肝线粒体蛋白质组的影响。方法：通过切除两侧肾上腺造成肾阳虚模型大鼠和温补肾阳药治疗大鼠肝线粒体蛋白质经荧光染料Cy3、Cy5标记，与等量Cy2标记的内标混合后在同一胶中进行电泳分离，经不同光激发后扫描得到不同样品的蛋白质组图谱。利用DeCyder软件进行差异蛋白质组分析，筛选出18个差异蛋白质进行质谱鉴定，其中15个蛋白质得到鉴定。结果：经温补肾阳药治疗后，肾阳虚动物氨甲酰磷酸合成酶、过氧化氢酶、二氢硫辛酸脱氢酶、热休克蛋白60、亚硫酸氧化酶、ATP合成酶、醛脱氢酶、丙酮酸脱氢酶、3-巯基丙酮酸转硫酶、腺苷酸激酶同工酶5、谷胱甘肽过氧化物酶表达均增高。结论：温补肾阳药可能通过加快糖、脂类、蛋白质和核酸分解代谢，加快ATP合成以及清除自由基和过氧化物，维持线粒体膜稳定性，从而起到治疗肾阳虚的作用。     

不同中医证型乳腺增生组织蛋白质组的研究

目的:应用凝胶内差异显示电泳技术和质谱技术研究不同中医证型乳腺增生组织蛋白质组。方法:提取不同证型乳腺增生组织总蛋白,分别用Cy3或Cy5标记,每对Cy3和Cy5标记样品都与1个Cy2标记的内标等量混合,上样于同一胶中进行电泳分离,经不同光激发下扫描得到不同样品的蛋白质组图谱。所获得的图谱经DeCyder 6.5软件进行分析,筛选表达量有显著差异的蛋白质进行质谱鉴定。结果:12个蛋白质在不同乳腺增生组织中有显著差异。其中,α-B crystallin,Cyclophilin A,Cypa在冲任失调型中表达量最高,肝郁气滞型次之,在痰瘀互结型中表达量最低。转甲状腺素蛋白变体,Pkci底物类似物、血红蛋白、脱氧血红蛋白和血红蛋白α链在肝郁气滞型中表达量最高,冲任失调型次之,在痰瘀互结型中表达量最低。而Cu,Zn-超氧(化)物歧化酶和转甲状腺素蛋白在肝郁气滞型、痰瘀互结型和冲任失调3型乳腺增生组织中表达依次降低。结论:这12个蛋白质可能与乳腺增生病不同证型相关,可以作为乳腺增生病临床中医辨证论治的候选客观指标。     

人参皂甙抑制肿瘤坏死因子α介导的内皮细胞炎症反应

目的 探讨人参皂甙Rb1能否抑制人脐静脉内皮细胞中肿瘤坏死因子α引起的细胞炎症反应的发生.方法 将细胞分成四组:对照组(不经任何药物处理)、肿瘤坏死因子α组、人参皂甙Rb1组和肿瘤坏死因子α加人参皂甙Rb1组,分别培养16 h.提取各组细胞mRNA,用实时荧光定量PCR和流式细胞仪测定血管细胞黏附分子1的表达水平;用标记上Calcein-AM的人单核细胞检测人脐静脉内皮细胞单分子层的黏附性;用超氧化物阴离子荧光探针DHE在流式细胞仪上测定超氧阴离子产物,并用荧光探针JC-1检测线粒体膜电位变化.结果 人参皂甙Rb1预处理能有效阻止肿瘤坏死因子α诱导的血管细胞黏附分子1 mRNA增高,并减弱由其导致的单核细胞对人脐静脉内皮细胞的黏附性增加.人参皂甙Rb1还能减少肿瘤坏死因子α诱导的超氧阴离子产物增加,并抑制由其引起的线粒体膜电位衰减.结论 人参皂甙Rb1对炎症及心血管疾病有潜在的治疗作用.     

人参总皂苷增强成骨分化的间充质干细胞促造血作用研究

目的观察人参总皂苷(TSPG)诱导间充质干细胞向成骨细胞分化的作用,探讨TSPG增强成骨分化的间充质干细胞促造血的可能机制。方法贴壁法培养人源骨髓间充质干细胞(h MSCs),成骨细胞分化和免疫表型进行鉴定。不同剂量的TSPG联合成骨细胞条件诱导液培养h MSCs,MTT法检测细胞增殖活性,对-硝基苯磷酸盐(p NPP)法检测培养上清碱性磷酸酶含量,茜素红染色法观察钙结节数量,Western blot法检测成骨细胞分化转录因子-核心结合蛋白因子2(RUNX2)蛋白表达水平,Elisa法检测培养上清造血相关因子含量,造血祖细胞集落生成实验检测培养上清造血支持能力。结果 MTT和p NPP结果均显示随着TSPG剂量增加,吸光值逐渐增加,呈剂量依赖性。钙结节数量和RUNX2蛋白表达水平明显高于对照组。造血相关生长因子和造血祖细胞集落数明显高于对照组。结论TSPG通过上调RUNX2蛋白表达诱导h MSCs向成骨细胞分化,同时增强成骨分化的MSCs支持造血。     

浅析楼丽华治疗肉芽肿性乳腺炎经验

通过收集门诊病例、典型个案分析及随诊时楼丽华教授对加减药味的讲解,总结楼教授治疗肉芽肿性乳腺炎的治则及用药。运用温通法配合细针穿刺抽脓治疗肉芽肿性乳腺炎有效率高,对乳房外观的损毁程度低,可以为肉芽肿性乳腺炎的临床辨证论治提供参考。     

温补肾阳药对激素依赖性肾阳虚动物肝线粒体蛋白质组影响的研究

 目的利用双向凝胶内差异显示电泳技术,分析温补肾阳药对激素依赖性肾阳虚动物肝线粒体蛋白质组影响。方法正常大鼠、肾阳虚大鼠及温补肾阳药治疗大鼠肝线粒体蛋白质样品分别用荧光染料Cy2,Cy3,Cy5标记,经双向电泳后用不同波长光激发扫描后得到不同样品的蛋白质组图谱,经DeCyder软件分析,以肾阳虚动物与正常动物肝线粒体蛋白质相差1.2倍以上的蛋白作为差异蛋白,共获得16个差异蛋白质,经质谱测定和与蛋白质文库比对,其中11个蛋白质得到鉴定。结果肾阳虚动物由于肾上腺皮质功能受损,引起热休克蛋白60和70含量增加,可能起到调整处于应激状态的细胞存活、保护细胞免受损伤的作用;肾阳虚动物糖代谢和脂代谢功能降低,而蛋白质代谢和核酸代谢功能增强,表现为二氢硫辛酰胺脱氢酶和脂酰辅酶A脱氢酶活性降低,而肌氨酸脱氢酶、氨甲酰磷酸合成酶和亚硫酸氧化酶活性增加;肾阳虚动物由于三羧酸循环和脂肪酸β-氧化功能障碍,引起ATP合酶、醛脱氢酶和NADH脱氢酶活性代偿性增加,试图通过增加ATP的产量以缓解能量代谢的不足;但肾阳虚动物由于鸟氨酸氨基转移酶活性降低,导致储存能量的肌酸合成降低,使产生的ATP大部分通过热能形式消耗掉,从而导致肾阳虚的临床虚寒症状。应用温补肾阳药治疗后使热休克蛋白60更趋增加,可能加强对细胞的保护作用;温补肾阳药增加二氢硫辛酰胺脱氢酶的活性,可通过改善糖代谢和促进三羧酸循环功能使机体的能量代谢增强;温补肾阳药还可以通过增加ATP合酶和醛脱氢酶的含量,使ATP的产量增加,缓解能量代谢功能障碍。结论温补肾阳药可以通过调整线粒体内多种与能量代谢相关蛋白质表达而起到治疗肾阳虚的作用。     

Curcumin Upregulates LDL Receptor Expression via Sterol Regulatory Element Pathway in HepG2 Cells

Objective： Plasma low-density lipoprotein-cholesterol （LDL-C） is mainly taken up and cleared by hepatocellular LDL receptor （LDL-R）. LDL-R gene expression is regulated by the sterol regulatory element binding proteins （SREBPs）. Previous studies have shown that curcumin reduces plasma LDL-C and has hypolipidemic and anti-atherosclerotic effects. Herein, the authors investigated the effect of curcumin on LDL-R expression and its molecular mechanism in HepG2 cells.     

甲状腺切除的肾阳虚大鼠肝线粒体蛋白质组的研究

目的:应用差异蛋白质组学技术研究肾阳虚大鼠肝线粒体蛋白质组.方法:正常大鼠和甲状腺切除的肾阳虚模型大鼠的肝线粒体蛋白质经荧光染料Cy3、Cy5标记,与等量Cv2标记的内标混合后在同一胶中进行电泳分离,经不同光激发后扫描得到不同样品的蛋白质组图谱.经DeCvder6.5软件进行差异蛋白质组分析,并对差异蛋白质进行质谱鉴定.结果:在肾阳虚大鼠肝线粒体中,氨甲酰磷酸合成酶Ⅰ、乳铁传递蛋白、热休克蛋白60、过氧化氢酶、甲基丙二酸半醛脱氢酶、类钙激活中性蛋白酶、电子传递黄素蛋白、酯酶同工酶ESl、谷胱甘肽过氧化物、ATP合成酶和ATP酶质子通道蛋白表达量均增加,而二氢硫辛酰胺支链酰基转移酶、脂酰辅酶A脱氢酶、鸟氨酸转氨酶和鸟苷酸结合调节蛋白表达量降低.结论:肾阳虚大鼠可能因糖类和脂类物质分解代谢受抑以及细胞内信号转导异常而出现虚寒症状.     

肾上腺切除的肾阳虚大鼠肝线粒体蛋白质组的研究

肾在中医脏腑学说中占有重要地位,其功能广泛、作用特殊,有主宰生命之概念,故历代医学家称"肾为先天之本"、"生命之根".肾阳虚证是指由于肾阳虚衰、温煦失职、气化失权所表现的一类虚寒证候.