成肌细胞──体细胞基因治疗的理想靶细胞

成肌细胞一方面可以相互融合形成新的肌纤维；另一方面也可以与宿主肌纤维融合；且在肌纤维中可长期存活。这种细胞还具有分泌性。故它在体细胞基因治疗中扮演两个重要角色：一是用于遗传性肌病如杜兴肌营养不良症的基因治疗；二是作为传递系统治疗其他血浆蛋白缺乏症如血友病和帕金森病等。     

巴戟天寡糖对转化生长因子β信号传导的影响

目的：细胞移植技术的探索，为急性心肌梗死患者坏死区的心肌细胞重建及衰竭心脏的功能恢复，可能是-种极具前途的临床治疗手段。我们前期的研究初步证实巴戟天寡糖（Morinda officinalis How oligosaccha rides，MOO）具有明显促进成肌细胞的增殖和分化的作用保护心脏作用的研究。方法：采用离体纯化培养乳鼠双侧后肢骨骼肌成肌细胞的方法，以5-氮杂2’-脱氧胞苷（5-Aza—dc）为阳性药对照组、并设立MOO中剂量＋5-Aza—dc联合用药组，应用免疫组化、蛋白免疫痕迹技术进-步观察了MOO促成肌细胞向心肌样细胞分化时对TGF-β2受体及信号传导的影响。结果：（1）与空白对照组相比，各组TGF-β2表达水平均上调，差异显著（P〈0．05）；与阳性对照组相比，MOO各剂量组TGF—β2表达水平随剂量增加而增强，联合用药组TGF-β2表达水平显著高于阳性对照组（P〈0．05）。（2）与空白对照组相比，各用药组Smad4表达水平均显著上调（P〈0．05），各用药组间Smad4表达水平无明显差异。（3）与空白对照组相比，MOO小剂量组及联合用药组Smad2／3表达轻微上调、MOO中、大剂量组及阳性组均下调Smad2／3的表达。（4）与空白对照组相比，各组Smad7的表达差异显著（P〈0．05），其中MOO小剂量组、阳性组和联合组均抑制Smad7表达，MOO中、大剂量组逐渐增强Smad7的表达。结论：（1）MOO可促进TGF-β2的表达，并随着剂量的增加表达增强。     

人γ干扰素基因转染成肌细胞在治疗骨骼肌损伤中的应用

目的:构建转人γ干扰素(human interferonγ,hIFNγ)基因的成肌细胞,探讨hIFNγ对小鼠急性钝挫伤骨骼肌修复过程的影响。方法:①应用基因重组技术,将hIFNγ基因克隆到pEGFP-C2真核表达载体中,以酶切和测序方法鉴定重组质粒pEGFP-C2-hIFNγ的正确性;②经脂质体介导转染C2C12成肌细胞,用RT-PCR和Western Blot法检测转基因细胞的hIFNγ表达。③64只7~12周雄性C3H小鼠,制作右侧腓肠肌钝挫伤动物模型,随机分成4组,即A组(注射hIFNγ),B组(注射转hIFNγ的C2C12细胞),C组(注射空白成肌细胞),D组(未干预)。挫伤后第10天,A、B、C组的小鼠,于腓肠肌损伤局部注射不同药物,D组不进行干预以作为自然愈合对照。分别于伤后7、14、28、42天,从各组中随机抽取4只小鼠进行右侧腓肠肌损伤部位取材,以荧光定量PCR和免疫荧光化学染色检测不同时间点波形蛋白(Vimentin)及Ⅱb型肌球蛋白重链(MHC-Ⅱb)的表达。结果:①酶切和测序结果均证实成功构建了hIFNγ真核表达质粒pEGFP-C2-hIFNγ,RT-PCR和Western Blot检测到转染细胞中hIFNγ基因的表达;②干预后各时间点,A、B组小鼠损伤骨骼肌Vimentin表达较C组和D组降低;伤后42天,B组损伤骨骼肌Vimentin表达低于A组,其余时间点A、B两组间无显著差异;③各组MHC-Ⅱb表达无明显差异。结论:①成功制备了含hIFNγ基因的真核表达质粒,转染后获得了高效表达hIFNγ的鼠C2C12成肌细胞;②采用转染hIFNγ的C2C12成肌细胞局部注射,可以抑制骨骼肌纤维化标志产物波形蛋白的表达,与注射外源性IFNγ的作用近似。③局部注射转hIFNγ基因的成肌细胞或外源性IFNγ,未发现对骨骼肌再生标志产物MHC-Ⅱb表达有明显影响。     

益气生骨注射液促进体外成肌细胞增殖作用的研究

目的：研究益气生骨注射液对体外培养的成肌细胞的增殖作用。方法：将成肌细胞进行体外培养，实验组加入不同浓度的益气生骨注射液，对照组分别加入不同浓度的黄芪注射液和复方当归注射液，空白组不加任何药物。筛选出各药物对细胞增殖的最适生长浓度，并观察其对细胞的增殖作用。结果：益气生骨注射液对成肌细胞的增殖作用最强，与空白组比较，差异有统计学意义（P〈0．05），与对照组比较，差异无统计学意义。结论：益气生骨注射液有促进成肌细胞增殖的作用。     

益气生骨注射液促进体外成肌细胞增殖作用的研究

目的:研究益气生骨注射液对体外培养的成肌细胞的增殖作用.方法:将成肌细胞进行体外培养,实验组加入不同浓度的益气生骨注射液,对照组分别加入不同浓度的黄芪注射液和复方当归注射液,空白组不加任何药物.筛选出各药物对细胞增殖的最适生长浓度,并观察其对细胞的增殖作用.结果:益气生骨注射液对成肌细胞的增殖作用最强,与空白组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论:益气生骨注射液有促进成肌细胞增殖的作用.     

自体成肌细胞修复周围神经缺损

目的:观察自体成肌细胞在神经再生室中的作用,探讨其作为组织工程的种子细胞修复周围神经缺损的可行性。方法:实验于2002-08/2003-08在北京军事医学科学院基础医学研究所九室完成。①成年Wistar大鼠30只,采用随机数字法分成成肌细胞组、细胞外基质凝胶组和生理盐水组,每组10只。②切除大鼠右坐骨神经6mm,断端分别套入硅胶管,使神经两断端在硅胶管内相距13mm。③成肌细胞组:快速分离骨骼肌成肌细胞,差速贴壁法纯化、增殖,按1×109L-1细胞浓度与细胞外基质凝胶混合,植入神经再生室内;细胞外基质凝胶组:神经再生室内植入细胞外基质凝胶;生理盐水组:神经再生室内植入生理盐水。④术后4,8,12周进行大鼠坐骨神经功能指数测定;术后12周进行大体观察、电生理检测、腓肠肌湿重、神经组织学及超微结构观察。结果:30只大鼠全部进入结果分析。①结蛋白免疫组织化学:阳性细胞平均达98.01%。②大体观察:术后12周,成肌细胞组和细胞外基质凝胶组均可见再生神经,外形似正常神经,直径较正常的神经干细,成肌细胞组略粗于细胞外基质凝胶组。生理盐水组导管内无再生神经通过间隙。③坐骨神经功能指数:术后8,12周,成肌细胞组显著高于细胞外基质凝胶组(8周:-71.788±3.569,-76.986±2.266;12周:-61.847±2.914,-69.527±1.765;P均<0.01)。④电生理检查:术后12周,成肌细胞组的运动神经传导速度及波幅明显高于细胞外基质凝胶组,成肌细胞组、细胞外基质凝胶组腓肠肌肌电图呈部分失神经电位表现,生理盐水组则为完全失神经电位。⑤腓肠肌湿重恢复率:成肌细胞组明显好于细胞外基质凝胶组和生理盐水组。⑥组织学检查:术后12周,成肌细胞组、细胞外基质凝胶组的再生神经纤维排列整齐、密集,神经导管交界处无瘢痕,成肌细胞组的再生神经纤维多且直径较粗大,排列更为规则。⑦透射电镜观察:成肌细胞组和细胞外基质凝胶组均见再生的有髓神经纤维。⑧再生神经纤维图像分析:术后12周,在有髓神经纤维密度、神经纤维有效面积、有髓神经纤维数量、直径及髓鞘厚度等指标上成肌细胞组均优于细胞外基质凝胶组。结论:自体成肌细胞能够促进周围神经再生,可以作为种子细胞应用于外周神经组织工程。     

成肌细胞及其在骨骼肌研究中的应用

目的:总结成肌细胞在骨骼肌收缩功能和细胞基因治疗研究中的应用。资料来源:应用计算机检索Medline及Science Direct(Elsevier),EBSCOhost,Kluwer Online等数据库2000-01/2006-10相关骨骼肌成肌细胞及其应用研究方面的文献,检索词“myoblast,contract,mitochondria,gene treatment”,限定文献语言种类为English。同时计算机检索中国期刊全文数据库2002-01/2006-10相关骨骼肌成肌细胞及其应用研究方面的文献,检索词“成肌细胞,骨骼肌收缩,基因治疗”,限定文献语言种类为中文。资料选择:对资料进行初审,选取包括成肌细胞特性、收缩研究及应用等方面的文献,开始查找全文。纳入标准:有关成肌细胞的生物学特性、在骨骼肌收缩中的应用、在基因治疗中应用方面的文献。排除标准:重复研究、个案报告、综述、Meta分析的文献。资料提炼:共检索到125篇关于成肌细胞研究的文献,最终纳入35篇符合标准的文献。资料综合:成肌细胞是肌组织的前体细胞,易培养、可塑性强,具有骨骼肌的许多重要生物特性,且细胞能够融合进在体骨骼肌组织中,因此在骨骼肌收缩运动引起的细胞离子浓度、线粒体功能和肌型变化等的研究以及细胞移植治疗骨骼肌肌病和修复心肌组织的研究上都有着广泛的应用。本文综述近年来成肌细胞的生物学特性和骨骼肌收缩功能及基因治疗应用等方面所取得的相关进展。结论:成肌细胞可以为骨骼肌在收缩功能上的研究提供一个很好的研究平台,其在基因治疗研究中的应用也为肌组织工程的研究奠定了基础。     

血管内皮生长因子和血管生成素—1抑制心脏成肌细胞凋亡研究

目的：探讨血管内皮生长因子（VEGF165)和血管生成素－1（angiopoietin-1)抑制心肌细胞凋亡的作用机制。方法：将编码人VEGF165或angiopoietin-1的复制缺陷型腺病毒载体（Ad-VEGF165或Ad-Ang1)转染大鼠心脏成肌细胞（H9C2），24h后以H2O2诱导细胞凋亡，分析VEGF165和angiopoietin-1的抗凋亡作用。腺病毒转染24h后检测细胞中三磷酸肌醇激酶（phosphatidylinositol-3 kinase)活性和bcl-2表达水平。结果：VEGF165和angiopoietin-1可不同程度抑制H9C2细胞凋亡。VEGF165和Ang1作用下细胞内三磷酸肌醇激酶活性和bcl-2表达水平增高。结论：VEGF165和／或Ang1可抑制心脏成肌细胞凋亡，这种保护作用与其激活细胞内三磷酸肌醇激醇途径和促进抗凋亡分子bcl-2的表达相关，血管生长因子VEGF165和angiopoietin-1的心脏成肌细胞保护作用为其功能学研究和临床应用开辟了新的方向。     

低氧诱导成肌纤维细胞形成在低氧性肺血管重塑中的作用

目的:探讨低氧性肺动脉高压(HPH)无肌性肺动脉肌化的细胞来源。方法:雄性Wistar大鼠40只,分为对照组和低氧3、7、14、21d组,每组8只,低氧组复制HPH大鼠模型。测定各组平均肺动脉压(mPAP),右心室肥大指数(RVHI),肺小动脉病理及其形态计量学;细胞培养实验观察人胚肺成纤维细胞表型转化,透射电镜观察微血管的超微结构改变。结果:(1)低氧7d起大鼠mPAP、管壁面积/管总面积、管腔面积/管总面积分别为(18.41±0.37)mmHg、(52.2±0.8)%、(47.8±0.8)%与对照组(14.02±0.41)mmHg、(64.5±1.3)%、(35.5±1.3)%比较差异有显著性(P<0.05),低氧14d起稳定于高水平;低氧14d RVHI为(25.0±1.8)%,与对照组(23.6±0.5)%比较差异也有显著性(P<0.05)。(2)细胞培养显示低氧72h部分人胚肺成纤维细胞表达α-平滑肌肌动力蛋白。(3)透射电镜观察21d组增厚的重塑血管壁,位于内外弹性膜之间的细胞为成肌纤维细胞表型,外层具有与它紧密联系的成纤维细胞。结论:成纤维细胞转化为成肌纤维细胞是低氧性肺血管重塑的重要原因之一。