白细胞介素7受体α干预小鼠异基因骨髓移植后急性移植物抗宿主病的初步研究

 【摘要】　目的　建立小鼠异基因骨髓移植后急性移植物抗宿主病（aGVHD）模型,探讨外源性白细胞介素7（IL-7）受体α（IL-7Rα）干预小鼠aGVHD的疗效及可能机制。方法　以BALB／C（H-2d）雌性小鼠为受鼠,将受鼠分为单纯照射组、照射移植组、IL-7Rα干预组3组,每组10只,均接受9 Gy 60Co进行全身照射,取C57BL／6（H-2b）供鼠骨髓细胞1×107个和脾细胞2×107个经尾静脉输注给受鼠,观察受鼠的体征、造血功能恢复及生存时间的变化,并进行病理学、嵌合体及细胞因子水平的检测。结果　单纯照射组小鼠照射后逐渐死亡;照射移植组和IL-7Rα干预组小鼠移植后出现了典型的aGVHD症状,IL-7Rα干预组体征较照射移植组轻,生存时间较长,IL-7Rα干预组外周血白细胞计数+14、+21、+28天造血功能恢复情况与照射移植组比较[（4.53±0.21）×109／L、（3.63±0.06）×109／L、（4.31±0.04）×109／L与（1.81±0.05）×109／L、（1.32±0.04）×109／L、（1.76±0.04）×109／L],差异有统计学意义（t值分别为0.237、0.108、0.359,均P＜0.05）;肝、脾、皮肤组织的病理学结果显示,IL-7Rα干预组较照射移植组轻;嵌合体植入成功;移植后+7天血浆IL-7水平显著增高,随时间变化IL-7Rα干预组+14、 +21天 IL-7浓度与照射移植组比较[（194.32±1.02）、（131.63±1.54）pg／ml 与（330.24±8.08）、（184.09±2.05）pg／ml],差异有统计学意义（t值分别为1.590、1.285,均P＜0.05）。结论　建立了稳定的aGVHD小鼠模型;在aGVHD发生早期血浆IL-7水平显著增高;外源性IL-7Rα可降低血浆IL-7水平,从而减轻异基因骨髓移植后aGVHD的发生。     

地西他滨联合柔红霉素对HL-60细胞增殖及PTEN基因表达的影响

人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(Phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten gene, PTEN)是近年发现的定位于染色体10q 23.3的一个重要抑癌基因,其编码的蛋白具有脂质磷酸酶和蛋白磷酸酶活性,发挥双重肿瘤抑制功能[1].地西他滨(DAC)是目前研究较多的甲基化抑制剂,可逆转CpG岛甲基化,使多种因甲基化而失活的抑癌基因重新表达,抑制肿瘤细胞生长而达到治疗肿瘤的目的[2].我们以急性髓系白血病(AML)细胞系HL-60为研究对象,用不同浓度柔红霉素(DNR)、DAC及两药联合作用HL-60细胞,观察药物对白血病细胞增殖的抑制作用以及对PTEN mRNA表达的影响,旨在为临床应用提供理论依据.     

同型半胱氨酸对高糖培养的人血管内皮细胞ICAM-1表达的影响

目的探讨同型半胱氨酸（HCY）对高糖培养的血管内皮细胞产生活性氧和细胞间黏附分子-1（IcAM-1）mRNA表达的影响。方法体外培养人血管内皮细胞（ECV-304）,实验性模拟糖尿病的高HCY状态,随机分为4纽：正常对照组、高糖（HG）组、同型半胱氨酸（HCY）组和高糖加同型半胱氨酸（HG＋HcY）组。分别在培养12h、24h、48h进行相关的实验和检测。应用比色法检测培养细胞上清液中超氧化物歧化酶（s0D）活力和丙二醛（MDA）水平。用RT-PCR法测定（ICAM-1）mRNA表达的影响。结果与正常对照组相比,HG组和HCY组SOD活力明显降低（P〈O．01）,而MDA含量明显升高（P〈0．01）,ICAM-1mRNA表达上调且这种改变在HG组和HCY组更明显（P〈O．01）,并随时间延长有明显增加的趋势。结论HCY可能通过氧化应激机制上调ICAM-1的表达,从而损伤内皮细胞,加重糖尿病血管病变的发生、发展。     

多发性骨髓瘤患者骨髓单个核细胞与U266细胞中ICSBP/IRF8基因表达沉默的初步研究

本研究旨在探讨多发性骨髓瘤(MM)细胞株U266和MM患者骨髓单个核细胞(MM-BMMNC)中干扰素调节因子8(ICSBP/IRF8)的表达,及DNA甲基化与ICSBP/IRF8表达沉默的关系。选取U266细胞株及10例MM患者MM-BMMNC,同时提取10例正常人骨髓单个核细胞(N-BMMNC)为对照。用荧光定量PCR测定ICSBP/IRF8的表达(利用2-ΔΔCT进行计算);利用甲基化特异性PCR检测ICSBP/IRF8启动子序列甲基化程度(以目的基因ICSBP/IRF8与内参照β-actin表达量的比值作为结果)。结果发现,与N-BMMNC相比,ICSBP/IRF8在U266细胞和MM-BMMNC中表达低下,且ICSBP/IRF8启动序列CpG岛甲基化程度明显增高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:MM-BMMNC和U226细胞中ICSBP/IRF8基因表达沉默,ICSBP/IRF8启动序列CpG岛甲基化程度较正常显著增高,说明DNA甲基化可能造成了ICSBP/IRF8表达沉默。结果初步提示ICSBP/IRF8与MM的发生和发展机制可能有密切联系。     

体外培养子宫腺肌病在位内膜腺上皮细胞中HPA和metastin的表达及米非司酮对其表达的影响和意义

子宫腺肌病即子宫内膜侵入肌层达1个高倍视野以上,病理诊断子宫内膜基底层下≥3mm处出现子宫内膜腺体和间质。其病因和发病机制不清,可能与机械因素、内分泌因素、细胞凋亡、免疫因素等有关。随着研究的进展,多数学者认为子宫腺肌病的发生与子宫内膜的腺体和基质具有侵袭性有关。     

白细胞介素-7受体α联合细菌鞭毛蛋白对异基因骨髓移植小鼠急性移植物抗宿主病作用的初步探讨

目的 分析白细胞介素（IL）-7受体α（IL-7Rα）、细菌鞭毛蛋白单用及联合作用于小鼠异基因骨髓移植后急性移植物抗宿主病（aGVHD）模型的疗效,探讨其可能机制.方法 以BALB/C（H-2d）雌性小鼠为受鼠,均接受9 Gy 60Co全身照射,取C57BL/6（H-2b）供鼠骨髓细胞1×107个和脾细胞2×107个经尾静脉输注给受鼠.将受鼠分为单纯照射移植组（A组）、IL-7Rα干预组（B组）、细菌鞭毛蛋白干预组（C组）、IL-7Rα联合细菌鞭毛蛋白干预组（D组）,每组6只,观察受鼠的症状、体征、生存时间及造血功能恢复情况.结果 A组小鼠生存期为（22.5±2.30）d,30d生存率为50.0％（3/6）, 、且出现明显的倦怠、食欲缺乏、脱毛、弓背等aGVHD表现;B组小鼠生存期为（25.83±3.49）d,30 d生存率为33.3％（2/6）,aGVHD表现较A组轻;C组小鼠生存期为（26.33±3.52）d,30 d生存率为33.3％（2/6）,亦出现aGVHD表现,程度同B组;D组小鼠生存期为（30.17±2.86）d,30 d生存率为66.7％（4/6）,aGVHD表现较前3组轻.4组小鼠外周血白细胞计数均于移植后第7天降至最低,后逐渐恢复,A组较3组干预组恢复慢,B、C两组移植后第14、21、28、30天外周血恢复比较,差异均无统计学意义（均P＞ 0.05）;D组小鼠外周血较B、C组恢复快,差异均有统计学意义（均P＜ 0.05）.4组小鼠移植后第2周CD3＋T细胞比例均明显下降,第3周开始逐渐上升,与A组比较,B、C、D3组小鼠CD3＋T细胞比例上升明显,B、C两组移植后第2、3、4周比较,差异均无统计学意义（均P＞ 0.05）;D组小鼠较B、C组小鼠T细胞亚群CD3＋T细胞恢复快（均P＜0.05）.结论 通过全身照射能成功建立aGVHD小鼠模型;外源性IL-7Rα、细菌鞭毛蛋白均可减轻aGVHD的发生,两者单用无明显差异,二者联合干预aGVHD小鼠模型与单一干预比较,aGVHD发生更轻,造血恢复会更快.     

染料木黄酮抑制多柔比星诱导的多药耐药膀胱肿瘤T24细胞增殖的实验研究

 【摘要】　目的　建立膀胱肿瘤T24细胞多药耐药（MDR）模型并鉴定其耐药特性,观察染料木黄酮对多柔比星（ADM）诱导的多药耐药T24（T24／ADM）细胞增殖的影响。方法　体外培养膀胱肿瘤T24细胞,采用ADM浓度梯度诱导,培养出具有稳定MDR表型的T24／ADM耐药细胞株,光镜观察新建细胞株的形态学特点,MTT法检测多种药物对耐药细胞株的增殖活性以及染料木黄酮对T24／ADM细胞增殖的有效作用浓度。结果　用ADM诱导6个月后的T24／ADM细胞形态无明显改变;T24／ADM细胞对多种化疗药物的耐受能力均明显提高,与亲本细胞株T24相比,耐药细胞株T24／ADM对ADM的耐药指数达15.79,对5-氟尿嘧啶、顺铂、环磷酰胺的耐药指数依次为4.68、3.81、5.53。用染料木黄酮作用于T24／ADM细胞后,对T24／ADM细胞的半数抑制浓度为40 μg／ml,质量浓度为20～100 μg／ml的染料木黄酮具有抑制T24／ADM细胞增殖的作用。结论　建立的T24／ADM细胞具有多药耐药性,达到实验要求。质量浓度为20～100 μg／ml的染料木黄酮可部分抑制人类膀胱肿瘤T24／ADM细胞的增殖。     

中枢前列腺素E_2在慢性心力衰竭交感兴奋中的作用

目的:观察中枢前列腺素E_2(PGE_2)在慢性心力衰竭(心衰)交感神经兴奋中的作用,并探讨其机制。方法:雄性SD大鼠冠脉结扎制备心衰模型,侧脑室渗透压泵持续给药,假手术组和心衰组给予人工脑脊液(0.25μL/h),心衰给药组给予塞来考昔(CLB;20 mg/h)。4周后,检测各组大鼠脑脊液内PGE_2浓度、交感神经兴奋性和心功能指标,同时测定下丘脑室旁核(PVN)内促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)神经元激活指标和神经递质的变化。结果:与假手术组相比,心衰组大鼠脑脊液内PGE_2含量增加,肾交感神经放电活动增强,外周血去甲肾上腺素升高,左心室舒张末期压力、肺/体质量比和右心室/体质量比均增加,左室内压最大上升和下降速率均下降,PVN内CRH阳性神经元数目增多,外周血促肾上腺皮质激素浓度升高(P0.05);心衰大鼠侧脑室给予CLB后,脑脊液内PGE_2明显下降,PVN内CRH神经元激活减少,交感神经兴奋性减弱,心功能得到改善(P0.05)。与假手术组相比,心衰大鼠PVN内谷氨酸含量较高,γ-氨基丁酸含量和谷氨酸脱羧酶67阳性神经元数目较低(P0.05);侧脑室给予CLB后,以上各指标均被逆转(P0.05)。结论:慢性心衰时,中枢内升高的PGE_2可以激活下丘脑室旁核CRH神经元从而增强交感神经活动,而该作用可能是通过改变下丘脑室旁核神经递质系统来实现的。     

不同侵袭潜能卵巢癌细胞系蛋白质谱的比较

目的探讨与卵巢癌侵袭潜能相关的蛋白质。方法将卵巢癌细胞系SKOV-3在裸鼠体内多次传代,体外培养建系,结合体外黏附、侵袭、移动实验,筛选不同侵袭潜能的细胞亚系,用表面增强激光解吸电离-飞行时间-质谱技术检测其蛋白质谱。结果SKOV-3F3细胞亚系较其母系SKOV-3侵袭潜能更高。有6个差异蛋白质峰(质荷比M/Z分别为6249、14675、15425、15717、17123和17660)仅在SKOV-3中表达,3个差异蛋白质峰(M/Z分别为4355、4823和5763)仅在SKOV-3F3中表达,2个差异蛋白质峰(M/Z分别为1842和3145)可在SKOV-3的3代亚系中捕获。此外,5个差异蛋白质峰(M/Z分别为1242、5465、6899、6568和14027)和1组蛋白质谱峰簇在SKOV-3和其3代亚系中均可表达,但强度不同。结论体内传代结合体外实验可筛选出不同侵袭潜能的卵巢癌细胞,它们之间的差异蛋白与侵袭潜能密切相关。     

体外培养的不同亚型上皮性卵巢癌细胞系差异蛋白的分析

目的分析体外培养的不同亚型上皮性卵巢癌细胞系蛋白质表达差异,筛选卵巢癌的肿瘤标志物.方法提取体外培养的不同亚型上皮性卵巢癌细胞系（OVCAR-3、SKOV-3、3AO和TOV-112D）与原代培养的正常卵巢生发上皮细胞（OGE）的总蛋白,采用表面增强激光解吸离子化（SELDI）蛋白质芯片技术的H4和SAX2两种蛋白芯片检测其蛋白质谱,最后利用蛋白芯片阅读机（PBS-Ⅱ型）读取数据,获得的数据采用Ciphergen Proteinchip 3.0.2版本的软件分析.结果4种亚型的上皮性卵巢癌细胞系与正常卵巢生发上皮细胞比较,有16个蛋白发生明显改变,其中7个蛋白表达降低,9个蛋白表达升高.此外,不同亚型的上皮性卵巢癌细胞之间也有很多差异蛋白,尤其是OVCAR-3、SKOV-3和3AO三者与TOV-112D之间有18个蛋白仅在前3种癌细胞中表达,16个蛋白仅在后者表达.结论不同亚型上皮性卵巢癌细胞与正常卵巢生发上皮细胞的蛋白质谱相比较有共同的差异蛋白,同时不同亚型的上皮性卵巢癌细胞之间的蛋白质谱表达也有差别.