卡托普利干预自发性高血压大鼠血清代谢组学研究

目的通过代谢组学方法研究卡托普利干预自发性高血压大鼠血清内源性代谢物的变化,进一步探索卡托普利的作用机制。方法采用快速高分离液相-四级杆飞行时间串联质谱联用技术采集大鼠血清内源性代谢物信息,经偏最小二乘法判别分析,识别显著差异的变量,鉴定潜在生物标志物。结果正常组、模型组、卡托普利组的血清内源性代谢物、代谢模式发生了明显变化。经数据库查询共确定了4个生物标记物及其代谢途径,与血管内皮功能密切相关。结论代谢组学从机体整体代谢角度揭示了卡托普利保护血管内皮功能的可能作用机制,在阐释药物复杂的作用机制方面显示出了独特的潜力。     

栀子—刺五加含药血清对大鼠海马神经元发生的影响

目的观察栀子—刺五加含药血清对体外高浓度皮质酮作用下大鼠海马神经元发生的影响。方法 35只雄性Wistar大鼠按随机数字表分为栀子组(0.23g/d)、刺五加组(0.38g/d)、栀子—刺五加组(栀子0.23g/d,刺五加0.38g/d)、氟西汀组(0.51mg/d)、空白组,每组7只。连续灌胃10天后取含药血清和空白大鼠血清。体外建立高浓度皮质酮抑制大鼠海马神经元发生模型。采用MTT法测定神经元存活率,5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记海马神经元增殖,神经元特异性烯醇化酶(NSE)标记海马神经元生长。结果与空白组及栀子组比较,栀子—刺五加组、刺五加组、氟西汀组海马神经元存活率明显提高(P0.05),海马神经元中BrdU及NSE阳性细胞数明显增加(P0.05)。结论栀子—刺五加含药血清和刺五加含药血清有利于海马神经元在高皮质激素环境下的存活、增殖、生长,具有促进海马神经元发生的作用。     

青蒿琥酯防治肾脏疾病的作用及机制研究进展

目的:探讨青蒿琥酯对肾脏疾病的防治作用及作用机制。方法:复习近年来国内外相关的文献资料并进行综述。结果:青蒿琥酯被证明能抑制肾小球系膜细胞的有丝分裂,对肾小球系膜细胞的凋亡有显著的诱导作用,有抗肾间质纤维化、免疫抑制作用及减轻肾组织的炎症反应等药理作用。结论:青蒿琥酯通过不同的途径发挥肾脏保护作用,具有较好的应用前景。     

鸟氨酸脱羧酶和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶双反义腺病毒对大肠癌细胞生长的抑制作用

目的：研究鸟氨酸脱羧酶（ODC）和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶（AdoMetDC）双反义腺病毒（Ad—ODC—AdoMetDCas）对大肠癌细胞生长的抑制作用，并初步探讨其参与细胞周期调节的分子机制。方法：将Ad—ODC—AdoMetDCas感染大肠癌细胞株HT-29，通过MTS法观察其对HT-29细胞增殖的影响，流式细胞术检测其对细胞周期的影响，采用Western blot检测Ad—ODC—AdoMetDCas对细胞中ODC、AdoMetDC及细胞周期调节蛋白（Cyclin D1 and CDK4）的表达的影响，利用EBRT—PCR检测Ad—ODC—AdoMetDCas对细胞周期蛋白Cyclin D1的mRNA水平的影响。结果：Ad—ODC—AdoMetDCas可抑制HT-29细胞中ODC和AdoMetDC蛋白的表达，并可明显抑制细胞的增殖，引起细胞周期GI期阻滞，抑制G，期主要的细胞周期蛋白Cyclin D1的转录和翻译。结论：Ad—ODC—AdoMetDCas可有效下调ODC和AdoMetDC的表达，并通过抑制Cyclin D1的表达使其细胞周期停滞于G1期，从而抑制大肠癌细胞HT-29的增殖，为进一步研究大肠癌的基因治疗打下基     

人鸟氨酸脱羧酶和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶双反义腺病毒载体的构建

目的：构建人鸟氨酸脱羧酶(ODC)第三外显子和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(SAMDC)翻译起始位点双反义RNA腺病毒载体。方法：应用RT-PCR方法扩增出SAMDC mRNA翻译起始位点区205 bp的基因片断。插入PMD-18T载体中．经XbaI、XhoI酶切回收，反向插入穿梭质粒pAdTrack-CMV-ODCr，形成重组质粒pAdTrack-ODC-SAMDCr。经PmeI酶切线性化后，转入Adeasy-1细菌与pAdeasy-1质粒发生同源重组。挑选阳性重组质粒pAdeasy-ODC-SAMDCr，经PacI酶切后，转染293细胞，包装出腺病毒颗粒．经荧光显微镜和PCR方法对重组腺病毒进行鉴定。结果：利用RT-PCR方法成功地从大肠癌细胞扩增出205bp的cDNA片断，经测序证实为SAMDC翻译起始位点序列。测序证实，重组质粒pAdTrack-ODC-SAMDCr两个基因插入方向和序列均正确．转入Adeasy-1细菌获得多个阳性重组克隆。pAdeasy-ODC-SAMDCr转染293细胞进行包装扩增．可见明显病毒空斑形成，荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白在293细胞中表达．PCR法证实含有目的基因。结论：成功构建并扩增出ODC和SAMDC双反义RNA腺病毒载体．为以后肿瘤的基因治疗和预防研究提供了必要工具。     

高血压病肝阳上亢证尿液代谢组学气相色谱-质谱联用研究

目的:分析尿液代谢物变化,寻找高血压病肝阳上亢证的特征代谢物,揭示高血压病肝阳上亢的证候本质。方法:根据临床高血压病肝阳上亢证的诊断标准,选择典型病例9例,健康志愿者11例,取其尿液经衍生化,以GC-MS采集高血压病肝阳上亢证患者和健康志愿者的尿液代谢物谱,数据经匹配、对齐、共有特征选择,利用Simca-P软件进行主成分分析(PCA,principal component analysis)和偏最小二乘判别分析(PLS-DA,partial least squares discriminant analysis),寻找可能的生物代谢物,并做出相关代谢途径的可能解释。结果:PCA及PLS-DA方法处理高血压病肝阳上亢证患者和健康志愿者的尿液代谢物谱数据显示,两组GC-MS谱数据可以明显分开,与健康志愿者作比较,患者机体相关代谢发生显著变化,体内硬脂酸、肌醇、D-果糖、邻苯二甲酸代谢明显异于健康志愿者。结论:GC-MS结合模式识别的代谢组学方法具有研究复杂条件下机体病理生理变化的优势,为理解高血压病肝阳上亢证的证候本质和诊断该类病证提供了科学依据。     

基于偏最小二乘回归分析的钩藤总碱和莱菔子总碱组分配伍优化研究

目的 以钩藤总碱和莱菔子总碱有效组分的降血压效应为研究对象,探索中药组分配伍及优化设计的研究方法。方法 按照“正交设计-药效测定-偏最小二乘回归建模”的程序,以收缩压为指标,采用正交设计优化钩藤总碱和莱菔子总碱的配比,对其数据进行极差分析、方差分析、多元回归分析和偏最小二乘回归分析。结果 根据多元回归分析和偏最小二乘回归分析,考虑经济成本,钩藤总碱和莱菔子总碱的最佳配比为钩藤总碱25 μg/g配伍莱菔子总碱30 μg/g。结论 钩藤总碱和莱菔子总碱的组分配伍能够有效降低血压。采用正交设计结合偏最小二乘回归分析的方法,能够消除各因素的交互作用,非常适用于中药的组分配伍及优化设计。     

基于1H-NMR代谢组学分析研究平肝方药对高血压大鼠大脑额叶皮质区的影响

目的：采用核磁共振氢谱（1H-NMR）结合模式识别方法研究高血压模型及平肝方药干预后大鼠大脑额叶皮质区组织代谢组学变化,探讨高血压病和大脑损伤间有价值信息,为平肝方药的作用机制研究提供科学依据。方法：随机将大鼠分为4 组：正常对照组、高血压模型组、卡托普利组和平肝方药组,连续给药14 天后取各组大鼠额叶组织。采用1H-NMR 方法结合模式识别技术检测分析四组大鼠额叶区组织,分别寻找其特征性代谢产物。结果：主成分分析及偏最小二乘判别分析结果显示,卡托普利组和平肝方药组明显异于高血压模型组,且平肝方药组与卡托普利组大鼠样本分类趋势明显,提示平肝方药能显著改善大鼠机体的整体代谢;4 种代谢产物鉴定为葡萄糖、半乳糖、多巴胺和琥珀酸。结论：高血压损伤额叶组织可能主要表现在能量代谢和神经损伤方面,而平肝方药在有效降压同时,通过影响其代谢产物来缓解疾病引起的物质代谢异常。     

高血压病肝阳上亢证患者血清样品的核磁共振谱代谢组学研究

目的采用1HNMR结合主成分分析（PCA）方法研究高血压病肝阳上亢证患者和健康志愿者的血液成分谱差异,寻找可能的生物标记物,揭示高血压病肝阳上亢的证候本质。方法根据临床高血压病肝阳上亢证的诊断标准,选择典型病例,以1HNMR分析高血压病肝阳上亢证患者和健康志愿者的血液成分,使用PCA方法进行模式识别,寻找标记物并做出相关代谢途径的可能解释。结果PCA方法处理高血压病肝阳上亢证患者和健康志愿者的血清1HNMR谱数据显示,两组1HNMR谱数据可以在得分图实现分类,与健康志愿者作比较,患者机体相关代谢发生显著变化,体内部分氨基酸代谢和葡萄糖代谢明显异于健康志愿者。结论1HNMR结合PCA模式识别的代谢组学方法具有研究复杂条件下机体病理生理变化的优势,为理解高血压病肝阳上亢证的证侯本质和诊断该类病证提供了科学依据。