融合蛋白TNFR1/DED介导舌癌细胞凋亡的实验研究

目的 :构建含FADD及TNFR1基因功能结构域的融合基因TFL ,稳定转染入舌癌细胞后 ,通过体内、外实验初步观察融合蛋白TNFR1/DED在重组人肿瘤坏死因子 α(rhTNF α)作用下介导舌癌细胞凋亡的效应。方法 :反转录及重组PCR构建融合基因TFL ;鉴定融合蛋白TNFR1/DED在建系舌癌细胞T TFL中的表达 ,通过MTT法、形态学观察、DAN片段及体内抑瘤实验 ,观察融合蛋白TNFR1/DED介导舌癌细胞凋亡的效应。结果 :获得了人FADD及TNFR1基因并构建成功融合基因TFL ,转染入Tca 8113细胞后 ,能表达融合蛋白TNFR1/DED活性 ,体外实验观察到rhTNF α可有效地杀伤舌癌细胞 ,体内可明显抑制移植瘤的生长 ,且荷瘤动物内脏器官无病理性改变。结论 :融合蛋白TNFR1/DED可有效地介导舌癌细胞凋亡 ,为舌癌基因治疗研究提供实验基础。     

减毒沙门菌介导基因对舌癌生长抑制作用的动物实验

本实验利用减毒沙门菌的肿瘤靶向性，以其为载体，携带抑癌基因Tip30和人IFN-γ基因，通过口服方式对舌癌进行基因治疗动物实验，以期在临床上为舌癌的基因治疗提供动物实验依据。     

sIL-1R基因重组质粒在山羊颞下颌关节内的表达

目的:观察脂质体携带的可溶性白介素-1受体(sIL-1RI)基因重组质粒注入山羊颞下颌关节(TMJ)上腔后,在TMJ髁突软骨及滑膜组织中的表达,以及在全身其他重要器官组织中的表达,为施行基因治疗TMJ骨关节病(OA)奠定基础。方法:将脂质体携带的sIL-1RI基因重组质粒分别注入6只山羊TMJ的关节上腔。注射后第2、4周,分别处死3只动物。抽取TMJ关节滑液,用ELISA法检测关节滑液中的蛋白表达量。采用q检验,对实验数据进行方差分析和均数间的两两比较。切取完整关节标本以及肝脏、心脏、肾脏和脑组织,免疫组化法检测重组质粒在这些脏器组织中的表达情况。结果:重组质粒pcDNA3/sIL-1RI在山羊TMJ的滑膜细胞、软骨细胞及软骨下组织均有表达。ELISA方法检测结果显示,实验组表达量明显高于对照组(P<0.05)。在山羊肝脏、心脏、肾脏和脑等全身重要组织器官中未见表达。结论:脂质体携带的重组质粒pcDNA3/sIL-1RI,可在山羊TMJ有效地表达,关节外组织未见表达,因此是安全、可行的。     

~(60)Co照射及低温保存对转基因细胞影响的分析

目的　观察经放射前后的转基因细胞Tca8113/TNF α的TNF α的分泌情况 ,为转基因细胞经致死剂量的放射线灭活作为“瘤苗”应用于临床前TNF α基因的有效表达提供依据。方法　利用基因转染技术 ,用逆转录病毒载体将肿瘤坏死因子基因 (TNF α基因 )转导入人舌癌Tca8113细胞 ,并获得表达 ;在此基础上 ,通过ELISA法分析转基因细胞Tca8113/TNF α在60 Co放射组及未放射组的TNF α分泌量的变化以及经液氮储存 4 8h、一周复苏后的TNF α分泌量的变化。结果　 (1) 60 Co放射组转基因细胞Tca8113/TNF α的TNF α的分泌量 (x±s) (pg/ml/ 10 6细胞 /2 4h)平均高达 (110± 5 6 2 ) ,而未转基因的Tca8113细胞的上清液中未检测到TNF α ,统计学上有明显的差异性 (P <0 0 1) ;(2 )经频率为 4 39 5cGy/min ,总剂量为 10 0 0 0cGy的60 Co放射后TNF α分泌量降低 ,但在 4～ 6d时有一分泌高峰 ;(3)转基因细胞Tca8113/TNF α经60 Co放射后在经 4 8h及一周的液氮内储存后TNF α能够分泌 ,其分泌量的变化趋势同储存前。 4 8h组和一周组之间无明显的统计学差异性。结论　转基因细胞Tca8113/TNF α作为“瘤苗”应用时 ,目的基因的表达可初步评价为有效     

热休克蛋白47重组质粒对糖尿病大鼠皮肤创口愈合影响的实验研究

目的：初步研究热休克蛋白47（HSP47）重组质粒pTraeer—CMV—HSP47局部注射对糖尿病大鼠皮肤创口愈合的影响，探讨以HSP47质粒为摹础的基因治疗促进糖尿病皮肤创口愈合的可行性和有效性．方法：制备四氧嘧啶诱导的糖尿病大鼠皮肤创口愈合模型，创缘皮下局部注射HSP47重组质粒，观察其对皮肤创口愈合的影响，并用免疫组织化学、荧光定量RT—PCR、Western blotting检测创口愈合过程中HSP47和collagen Ⅰ的表达变化。结果：在糖尿病大鼠皮肤刨缘连续两次注射质粒后第3、6、9天．免疫组织化学、荧光定量RT-PCR和Western blotting检测证实，HSP47重组质粒组比对照组能显著增加创口中的HSP47和collagenⅠ的表达。结论：在糖尿病大鼠皮肤创口周围注射质粒pTracer—CMV—HSP47，能明显增强HSP47和coilagenⅠ的表达，有助于改善创口愈合，HSP47可能是促进糖尿病皮肤创口愈合的潜在治疗靶点。     

PI3K-Akt-mTOR通路在慢阻肺发病机制中的研究进展

慢性阻塞性肺疾病(简称慢阻肺)为人体呼吸机制病症内的一种气道炎症性病症,具备一定的常见性,其发病率和病死率均较高,是一个重要的全球性公共卫生问题。通过相关探究发现,磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白(P13K-Akt-mTOR)信号通路,参与细胞的多个环节,如增殖、凋亡、自噬,是经典的细胞组织内的信号通路。影响各个不同系统疾病的预后及转归。国内外的专家学者经过大量研究对PI3K-Akt-mTOR信号传导通路在肿瘤细胞增殖、自噬、凋亡过程的研究中已取得一定的程度的进展,但在PI3K-Akt-mTOR信号传导通路与慢性阻塞性肺疾病的相互关系的研究领域中仍存涉足较少。本文就近年来PI3K-Akt-mTOR通路与慢阻肺关系的研究进展做一综述。     

遗传性神经系统离子通道病基因治疗的研究进展

目的遗传性神经系统离子通道病现有的治疗方法往往难以控制病情或者患者耐受度较低,因此探索新的治疗方法势在必行。基因治疗在多项研究中显示可能应用于神经系统疾病,并可能成为未来遗传性神经系统离子通道病的有效治疗手段。同时,光遗传学、化学遗传学方法、基因编辑技术的不断进步也为遗传性神经系统离子通道病的基因治疗提供了良好的发展基础。我们将就遗传性神经系统离子通道病基因治疗的方法机制、转导载体、启动子及给药途径作一综述。     

帕金森病基因治疗的研究进展

帕金森病除了药物治疗和手术治疗外,基因治疗作为一种新的治疗策略备受学术界关注。病毒载体和非病毒载体是常用的基因转导体,目前人们对于目的基因的研究仍着重于以下基因:影响多巴胺代谢的相关基因、神经营养因子相关基因以及神经递质平衡调节的相关基因,多基因联合治疗成为重点。近年来,国内外相继开展了众多帕金森病基因治疗的实验和临床研究,取得了一定的成就,更多的临床实验有待进一步开展。     

白细胞介素6基因转染的白血病细胞克隆株的建立及其生物学特性的观察

作者将人白细胞介素６（ＩＬ－６）基因转染至ＦＢＬ－３红白血病细胞，建立了高分泌ＩＬ６的ＦＢＬ－３细胞克隆株，并观察了其生物学特性。采用磷酸钙ＤＮＡ共沉淀法将ＩＬ－６表达载体ＢＣＭＧＮｅｏ－ＩＬ－６转移至ＦＢＬ－３细胞中，通过Ｇ４ｌ８抗性筛选、有限稀释法和上清中ＩＬ－６活性的测定，从多株阳性克隆中筛选到一株高分泌ＩＬ－６（２２５．６Ｕ／ｍｌ）的克隆株。体外观察表明，ＩＬ－６基因转染的ＦＢＬ－３细胞体外生长能力、集落形成能力均减弱，且其生长抑制程度与分泌ＩＬ－６水平呈正相关。给小鼠皮下接种后肿瘤结节形成率降低，生长速度减慢，荷瘤小鼠存活期延长。以上结果表明，ＩＬ－６基因转染的ＦＢＬ－３细胞致瘤性下降，这为将该细胞制备成新型瘤苗治疗白血病打下了基础。     

慢性髓系白血病基因治疗研究的进展

慢性髓系白血病基因治疗研究的进展郝秀娟综述唐佩弦，杜德林审校慢性髓系白血病（ＣＭＬ）是骨髓恶性增生性疾病，占白血病的２０％，年发病率约１／１０万￣［１］，虽然慢性期经化疗可以控制，但常于起病后１～４年内，７０％患者发生急变，预后差。自然病程３年，放化...