蔬菜中甲萘威残留量的高效液相色谱法调查分析

甲萘威(carbaryl)又名西维因，胺甲萘。具有触杀和转微内吸特征，兼有胃毒作用。是高效、低毒、低残留的广谱性杀虫剂。世界各国对水果、蔬菜等中的农药残留都作了严格的限量要求。如无公害蔬菜中甲萘威残留限量标准为不大于2．0mg/kg。为此，我们对开封市空心菜、苦瓜、上海青、青椒、茄子等十种蔬菜中的甲萘威残留量进行了高效液相色谱分析。     

原发性进行性失语合并假性球麻痹1例报告

原发性进行性失语(PPA)是以进行性语言障碍为惟一或突出症状的痴呆综合征.现报告1例PPA合并假性球麻痹的患者如下. 1 病例 女,74岁,教授.因"言语不清3年,加重伴吞咽障碍2个月"于2012年10月20日入院.3年前患者朋友发现其讲话不连贯、吐字缓慢,经常命名障碍,但能理解语言,可正常工作.2年前患者的言语表达障碍持续加重,仅能讲单个词或字,用比划沟通.多家医院诊断为"额颞叶痴呆".为进一步诊断,于2011年6月4日首次住本院.当时查体:不完全非流利性失语、命名性失语,音调低沉,计算力、定向力正常.     

胰岛干细胞和脐血间充质干细胞体外分离培养的形态学特征观察

背景：干细胞是具有自我更新能力和高度增殖能力和多种分化潜能的较原始细胞，在一定的条件下，干细胞可以分化成机体内的多种功能细胞。胰岛干细胞和脐血间充质干细胞可以治疗相应系统的疾病，但是目前有关这两类干细胞的培养仍有困难。目的：探讨胰岛干细胞和脐血间充质干细胞分离和培养的方法，并观察在培养过程中两类干细胞的形态学变化。设计：完全随机分组设计，重复测量实验。单位：郑州大学医学院生理学教研室于细胞研究中心材料：实验于2004-04／2005-01在郑州大学医学院干细胞中心完成。选用鼠龄1-3d新生SD大鼠10-15只进行胰岛干细胞培养，采集年龄24—35岁的足月妊娠健康产妇（经过产妇知情同意）新鲜脐带血进行脐血问充质细胞的培养。方法：取新生SD大鼠，无菌条件下剖腹取胰，眼科剪反复剪切后V型胶原酶消化分离胰岛。连续转瓶法纯化胰岛。取新鲜采集脐带血，用1．077g／cm^3的淋巴细胞分层液，密度梯度离心法分离脐血单个核细胞。将胰岛细胞和脐血单个核细胞接种于37℃，体积分数0.05 CO2培养箱内培养。于不同时间观察细胞形态的变化并通过流式细胞仪检测细胞表面分子的表达情况。主要观察指标：胰岛干细胞和脐血间充质千细胞的分离培养方法以及在细胞生长过程中的形态学变化。结果：①培养中可见梭形胰岛祖细胞贴壁呈极性生长，并且不断增殖，约12-14d长满瓶底，可连续多次传代。撤去生长因子和血清后有圆形细胞团开始形成。②从脐血中分离出的单个核细胞，培养中先出现大量的造血细胞集落，瑞士染色显示这些细胞大多数为粒系的集落，7d后出现贴壁的扁平状的上皮样细胞和长梭形的成纤维样细胞，同时有大量的破骨样细胞混杂。随着培养时间的延长，细胞数目不断增加。结论：胰岛干细胞和脐血间充质干细胞可以在体外分离和培养，用于进一步相关实验工作。     

心肌梗死后不同时间移植骨髓间充质干细胞对心脏功能修复的作用

目的:观察心肌梗死后不同时间点移植骨髓间充质干细胞对梗死心肌修复的影响,寻找细胞治疗的有效移植时间窗。方法:实验于2006-04/10在郑州大学基础医学院完成。①实验动物:清洁级6周龄雄性SD大鼠81只,1只用于获取骨髓间充质干细胞,剩余80只随机数字表法分为细胞移植组、培养液对照组,再按心肌梗死后1d及1,2,3周进行移植的时间各分为4个亚组,10只/组。②实验方法:获取、培养大鼠骨髓间充质干细胞,培养至第3代接近70%融合时,加入5-溴脱氧尿嘧啶体外标记,调整细胞密度为4×1010L-1备用。两组大鼠均结扎左冠状动脉前降支建立心肌梗死模型。细胞移植组各亚组按对应时间点在心肌梗死中央及四周移植骨髓间充质干细胞悬液50μL/点(2×106个),培养液对照组各亚组于相同部位移植L-DMEM培养液,50μL/点。③实验评估:移植前和移植3周后检测心功能;苏木精-伊红、免疫组织化学染色观察心肌梗死区组织及细胞变化。结果:共79只大鼠进入结果分析。①骨髓间充质干细胞的生长特点:刚分离的细胞为圆形。5d后有集落形成,细胞呈梭形、纺锤形或多角形,胞核较大。传代后细胞体积较原代细胞增大,生长速度加快。②心肌梗死后不同时间移植骨髓间充质干细胞的心功能比较:与移植前比较,移植3周后细胞移植组各亚组左室射血分数、短轴缩短率均有所改善(P<0.05),以心肌梗死后2周细胞移植组最为明显(P<0.01);培养液对照组各亚组左室射血分数、短轴缩短率均下降(P<0.05)。③梗死心肌组织学观察:细胞移植组心肌梗死区及周边可见核蓝色深染的细胞,排列整齐,梗死区瘢痕化减轻。④骨髓间充质干细胞在心肌组织中的分化:细胞移植组梗死心肌内可见大量BrdU标记阳性的骨髓间充质干细胞,胞核呈棕黄色,对心肌特异性肌钙蛋白T呈阳性表达。结论:心肌梗死后早期移植骨髓间充质干细胞能够改善心功能,以2周内进行细胞移植的效果较佳。     

人参皂苷Rb1对Aβ25-35诱导的大鼠神经细胞凋亡抑制作用观察

目的观察人参皂苷Rb1对淀粉样β蛋白25-35（Aβ25-35）诱导的大鼠神经干细胞分化后神经细胞凋亡的抑制作用。方法分离、培养新生大鼠海马神经干细胞,并诱导其分化。采用1、10、20、40μmol/L的Aβ25-35作用于分化后1周的神经细胞24 h,用MTT法检测算细胞存活率。另对分化后1周的神经细胞先加入5、10、20μmol/L的人参皂苷Rb1预处理24 h,再加入20μmol/L的Aβ25-35继续培养24 h,用MTT法检测算细胞存活率,用流式细胞术测算细胞周期和凋亡细胞率。结果 20μmol/L的Aβ25-35可使神经细胞存活率降至60.07%±2.75%,10μmol/L的人参皂苷Rb1可显著提高神经细胞存活率至85.75%±3.27%。不另加处理因素、继续培养48 h的分化后1周的神经细胞凋亡率为5.8%±1.4%,20μmol/L Aβ25-35作用24 h后,神经细胞凋亡率增加,达51.2%±3.2%,加入10μmol/L的人参皂苷Rb1预处理后,20μmol/L Aβ25-35诱导的神经细胞凋亡率下降至27.1%±1.5%（P〈0.05）。结论人参皂苷Rb1对由Aβ25-35引起的神经细胞损伤有明显的保护作用,其机制可能与抑制Aβ25-35诱导的细胞凋亡有关。     

CXCL12对大鼠海马培养细胞GABA和乙酰胆碱分泌的影响及其机制

目的:观察CXCL12对体外培养的海马神经细胞神经递质γ-氨基丁酸(GABA)和乙酰胆碱分泌的影响,并探讨其受体机制。方法:通过免疫荧光组织化学染色方法观察CXCL12和其受体CXCR4在细胞内的定位;ELISA方法分别检测海马神经细胞在体外培养过程中CXCL12的分泌变化、CXCL12对海马神经细胞神经递质分泌的影响、以及用CXCR4阻断剂(AMD3100)阻断CXCR4后神经递质释放的变化。结果:CXCL12主要分布在海马神经细胞的细胞浆内,细胞膜上也有表达,其受体CXCR4主要表达在海马神经细胞的细胞膜上;在海马神经细胞体外培养过程中,随时间延长(1、3、5、7、10 d),CXCL12的分泌逐渐减少;采用50 ng/ml的CXCL12作用于海马神经细胞后,随着培养时间的延长,GABA和乙酰胆碱的分泌出现不同的变化,其中乙酰胆碱的分泌逐渐增加,而GABA的分泌则呈现一过性下降又短暂轻微升高的趋势;通过AMD3100阻断其受体CXCR4,则乙酰胆碱分泌减少,但GABA的分泌增加。结论:CXCL12通过CXCR4受体引起乙酰胆碱分泌增加,GABA分泌减少。这些现象表明CXCL12可以作为一种重要的神经生长因子刺激GABA和乙酰胆碱的分泌。     

Aβ诱导骨髓间充质干细胞对其分化的神经细胞Tau蛋白过度磷酸化的影响

目的研究β-淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化的神经细胞Tau蛋白磷酸化的影响。方法体外分离纯化大鼠骨髓MSCs,将P4 MSCs分为两组:(1)Aβ25-35实验组中加入预诱导培养基(含10μg/L bFGF,10%FBS的DMEM)和20μmol/L Aβ25-35,24h后用含2%DMSO和200μmol/L BHA的DMEM诱导其向神经细胞分化,5h后收取细胞;(2)对照组诱导方法同Aβ实验组,但在诱导过程中未加入Aβ25-35。光镜下观察细胞形态变化,免疫细胞化学法检测神经神经元特异性烯醇化酶(NSE),western blotting检测GSK-3β、Tau[pSer262]和Tau[pSer396]。结果光镜下可见纺锤状的MSCs诱导后出现长突起,呈现神经细胞样形态,但Aβ25-35实验组突起数量和长度均少于对照组;免疫细胞化学法检测两组诱导后的神经元样细胞为NSE阳性;免疫蛋白印记法证明Aβ25-35实验组的GSK-3β、Tau[pSer262]和Tau[pSer396]表达均显著高于对照组。结论 Aβ25-35能够通过GSK-3β途径诱导骨髓间充质...     

人参皂苷Rb1对β-淀粉样蛋白25-35诱导神经干细胞分化过程中Tau蛋白过度磷酸化的影响

背景：前期研究发现,人参皂苷Rb1和β-淀粉样蛋白25-35可调节神经干细胞分化过程中Tau蛋白的磷酸化水平。蛋白磷酸酯酶2A与Tau蛋白过度磷酸化密切相关。 目的：观察β-淀粉样蛋白25-35和人参皂苷Rb1对神经干细胞分化过程中Tau蛋白磷酸化水平和蛋白磷酸酯酶2A活性的影响。 方法：分离、培养新生大鼠海马神经干细胞,诱导第3代神经干细胞分化1周后分组：①空白组：不加其他处理因素继续培养36 h。②β-淀粉样蛋白组：培养24 h后,加入β-淀粉样蛋白25-35继续培养12 h。③预处理组：先加入人参皂苷Rb1预处理24 h,再加入β-淀粉样蛋白25-35继续培养12 h。分别采用免疫荧光细胞化学法和western-blot法检测各组细胞Tau[pS396]、Tau[pS262]表达以及蛋白磷酸酯酶2A活性。 结果与结论：正常神经干细胞分化过程中有Tau[pS396]和Tau[pS262]的表达;β-淀粉样蛋白组细胞的Tau[pS396] 和Tau[pS262]表达上调,蛋白磷酸酯酶2A活性无明显变化;预处理组Tau[pS396]和Tau[pS262]表达下调且蛋白磷酸酯酶2A活性显著增强。提示正常神经干细胞分化过程中Tau蛋白表达一定程度的磷酸化水平,人参皂苷Rb1可通过提高蛋白磷酸酯酶2A活性来减轻β-淀粉样蛋白25-35诱导的神经干细胞分化过程中Tau蛋白过度磷酸化。     

EGF和bFGF诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞分化后对Tau和神经元特异性烯醇化酶表达的影响

目的：观察表皮细胞生长因子（BGF）、碱性成纤维生长因子（bFGF）体外诱导骨髓间充质干细胞（MSCs）分化为神经细胞后,神经元微管相关蛋白Tau和神经元特异性烯醇化酶（NSE）的表达。方法：取P4代MSCs分为EGF、bFGF和EGF＋bFGF及对照组;免疫细胞化学法检测Tau蛋白和NSE表达,ELISA法分析各组细胞Tau蛋白含量。结果：免疫细胞化学检测显示EGF＋bFGF811Tau蛋白和神经元特异性烯醇化酶NSE阳性细胞率最高,bFGF组、EGF组和对照组依序递减;各组Tau蛋白含量结果与Tau蛋白阳性细胞率一致。结论：EGF和bFGF均可促进MSCs向神经细胞分化,并表达Tau蛋白和NSE,二者具有协同作用。     

人脐血来源神经元样细胞的分离与鉴定

目的 探讨人脐血单个核细胞(MNCs)体外培养后的神经元特有分子表达和形态特征。方法 密度梯度离心法分离脐血中单个核细胞,部分接种于培养瓶内,部分细胞接种在6孔培养板内。倒置显微镜下观察培养细胞形态变化。RT-PCR方法检测MNCs培养前后神经细胞标志物nestin、NF-M及MAF2 mRNA的表达,培养14d后行免疫细胞化学鉴定。结果 培养前脐血MNCs胞体小呈圆形,神经干,前体细胞特异性抗体nestin阳性细胞、神经元特异性抗体MAP2和NF-M阳性细胞散在分布,阳性率分别为1．5％、3．4％和2．5％。培养14d后,倒置显微镜下可见一些有多个粗长突起的细胞群,相邻细胞突起连成网状;免疫细胞化学检测MAP2、NF-M染色阳性细胞成片状分布,阳性率分别为27．6％和21．7％。RT-PCR检测脐血单个核细胞nestin、NF-M及MAP2基因表达呈阳性,培养14d后上述基因表达上调。结论 脐血细胞中可能沉寂有神经(干)前体细胞,经体外培养后能分化为具有一定形态的类神经细胞。