肾细胞癌患者血清miR-135b-5p表达变化的价值及功能

摘要:目的检测肾细胞癌(renalcellcarcinoma,RCC)患者血清微小核糖核酸(microRNA,miRNA)-135b-5p的表达水平变化，探究其临床应用价值及其参与RCC发生、发展的作用机制。方法采用 荧光定量逆转录PCR( qRT-PCR)检测2022年1月至 6月于东部战区总医院泌尿外科就诊且经病理学确诊的60例RCC患者及60例健康人对照血清miR-135b-5p的表达水平变化,评估其对于RCC患者的临床辅助筛查价值。体外培养RCC细胞系(ACHNCaki-1)和正常肾小管上皮细胞系(HK-2),qRT-PCR检测细胞及细胞分泌的细胞外囊泡( extracellular vesicles ,EVs)中miR-135b-5p 的表达水平;进一步应用生物信息学分析、EVs与细胞共培养、细胞功能等方法探究EVs miR-135b-5p 参与RCC的初步作用分子机制。结果RCC 患者血清miR-135b-5p水平[ 6.932(5.524, 9.964)]与健康人对照[5.534(4.373, 6.555)]比较显著升高(U= 1 042,P<0.01)。血清miR-135b-5p水平对于RCC筛查的ROC曲线下面积( AUCR0C)为0. 711( 95% CI:O. 619~ 0.802)。ACHN和Caki-1 细胞中miR-135b-5p水平较正常HK-2 细胞中的表达倍数显著明显升高(分别升高了7.821 倍和1.919倍。P值分别为0.000 3和0.000 1);同时,ACHN和Caki-1 EVs中miR-135b-5p 水平较HK-2 EVs中的表达倍数亦显著增高(分别升高了3.783 倍和2.627倍。P值分别为0.0001和0.0004)。生物信息学分析结合文献调研显示,miR-135b-5p可能通过调控潜在靶基因血管生成素样蛋白4( angiopoietin-like protein 4 ,ANGPTL4)的表达而参与血管生成。RCC EVs与人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)共培养结果显示,RCC细胞分泌的富含miR-135b-5p EVs在与HUVEC温育的不同时间点(4h 6h和8 h)均可明显促进内皮细胞成环,差异具有统计学意义(P值分别为0.011 2 ,0.005 7,0.001 7)。Western blot结果显示，mimics 组ANGPTL4蛋白的表达水平为( 0.616+0.003) ,较NC组( 1.00+0.05)显著降低,差异具有统计学意义(t=12.44,P=0.000 2)。进一步分析发现与NC组相比, HUVEC中miR-135b-5p过表达组在连续观察时间内(2h、4h、6h和8 h)的成环数明显增加(P值分别为0.000 1 ,0.0001,0.0032,0.0095)。结论RCC患者血清、细胞系及细胞分泌的EVsmiR-135b-5p表达水平均显著升高，血清miR-135b-5p水平测定对于RCC具有较高的临床辅助筛查价值,RCC细胞分泌EVsmiR-135b-5p可通过调控ANGPTL4的表达,参与血管生成。     

非小细胞肺癌患者血清细胞外囊泡let-7d-3p水平检测的临床价值

摘要:目的检测 非小细胞肺癌( non-small ell lung carcinoma, NSCLC)患者血清细胞外囊泡( extracellular vesicles, EVs)中let-7d-3p水平的变化,评估其作为NSCIC患者辅助筛查液体活检分子标志物的临床应用价值。方法选取 2020年9月至2021年5月于东部战区总医院确诊的NSCLC 患者102 例及同期年龄、性别匹配的体检健康者70例,收集患者组及健康人对照组血清标本并分离EVs,采用实时荧光定量PCR ( quantitative real-time PCR , qRT-PCR)技术检测各组血清EVs中let-7d-3p表达水平变化,ROC曲线分析血清EVslet-7d-3p测定对于NSCLC患者的辅助筛查价值。结果与健康人对照组相比,NSCLC患者血清EVs中let-7d-3p 水平显著降低[ 69.75( 25.64, 154.70) fmol/L vs 26.09( 13.74 ,45.56)fmol/L],差异有统计学意义(U=1 830,P<0.001);同时,NSCLC I期患者[ 26.07(11.15, 45.30) fmol/L]血清EVs let-7d-3p 水平亦显著降低(U=1201 ,P<0.001)。ROC曲线分析结果显示,血清EVslet-7d-3p水平用于筛查NSCLC患者及I期患者的ROC曲线下面积(theareaundertheROC curve ,AUCROC )分别为0.744( 95% CI:0.667 ~ 0.821)和0.736( 95%CI:0.653~0.819);当cut-off 值为45.07 fmol/L时，血清EVs let-7d-3p筛查NSCLC及NSCLC I期患者的敏感性和特异性分别为74.5%和60% ,75.4%和60%。此外, NSCLC患者血清EVs .let-7d-3p水平不受年龄、 性别、吸烟史及病理类型的影响，差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论NSCLC 患者尤其是早期患者血清EVs中let-7d-3p水平与健康人对照相比显著降低,具备作为NSCLC辅助筛查液体活检分子标志物的潜能。     

绝经后妇女雌激素缺乏与胆固醇酯转运蛋白水平改变的关系

目的　探讨雌激素是否影响血清胆固醇酯转运蛋白 (CETP)水平的调节。方法　采用放射免疫分析法测定了 196例包括绝经前 (5 2例 ,年龄 18～ 40y)、绝经后妇女 (87例 ,年龄 61～ 81y)及围绝经期妇女 (5 7例 ,年龄 41～ 60 y)的血清雌二醇(E2 )、促卵泡生成激素 (FSH) ;自制CETP单抗建立的ELISA法测定CETP水平 ,同时测定血脂类指标。结果　绝经后妇女CETP水平明显低于绝经前和围绝经期妇女 (P <0 0 0 0 1) ,E2 水平较绝经前和围绝经期妇女显著下降 (P <0 0 0 0 1) ,而FSH水平显著升高 (P <0 0 0 0 1) ,各组血脂水平亦有显著性差异。CETP与E2 呈正相关 (r =0 .2 4,P <0 0 0 1) ,与FSH呈负相关(r =- 0 .2 7,P <0 0 0 1) ,与年龄呈负相关 (r=- 0 .3 1,P <0 0 0 0 1)。结论　雌激素水平的下降可影响绝经后妇女血清CETP水平     

经皮冠状动脉介入导致ACS患者脂蛋白(a)和氧化脂蛋白(a)水平升高机制研究

目的 研究PCI治疗对ACS患者脂蛋白(a)[Lp(a)]、氧化脂蛋白(a)[ox-Lp(a)]水平的影响和机制.方法 收集75例ACS患者PCI前、后、24 h、2 d、3 d和6个月后各时间点,以及29例未行PCI术的对照组冠状动脉造影前、后血标本;采用ELISA法测定Lp(a)、OX-Lp(a)、Lp(a)免疫复合物[Lp(a)-IC]和自身抗体水平;冠状动脉造影确认病变程度.手术前后各指标的变化采用配对t检验;PCI前、后不同时间点Lp(a)、ox-Lp(a)相对变化值间比较采用方差分析;Lp(a)与ox-Lp(a)、冠状动脉病变程度与Lp(a)、ox-Lp(a)变化值间相关性采用直线相关分析.结果 PCI术后Lp(a)水平[233.10(152.86～328.79)mg/L]高于术前[202.05(106.15～271.42)mg/L],差异有统计学意义(数据经对数转换后分析,t=6.81,P<0.01);PCI术后ox-Lp(a)[19.05(10.98～31.80)mg/L]与术前[10.51(4.98～17.97)mg/L]相比升高,差异有统计学意义(数据经对数转换后分析,t=13.22,P<0.01);PCI术后Lp(a)-IC[2.72(1.60～4.91)AU]与术前[2.11(1.04～3.97)AU]相比升高,差异有统计学意义(数据经对数转换后分析,t=3.34,P<0.01);而PCI术后自身抗体(A=0.81±0.33)与术前(A=0.72±0.28)相比降低,差异有统计学意义(t=5.58,P<0.01).PCI前(r=0.66,P<0.01)、后(r=0.62,P<0.01)ox-Lp(a)水平均与Lp(a)高度相关.PCI导致Lp(a)、ox-Lp(a)水平急速升高,24 h内快速下降,2～3 d内接近术前水平.Lp(a)、ox-Lp(a)变化值均与冠状动脉病变程度呈正相关.对照组造影前后Lp(a)、ox-Lp(a)、Lp(a)-IC和Lp(a)自身抗体水平均无变化.结论 PCI导致ACS患者Lp(a)、ox-Lp(a)水平升高,其增加值与冠状动脉病变程度相关.     

妊娠期糖尿病对母婴并发症的影响

目的:观察妊娠期糖尿病(GDM)的母婴并发症,探讨GDM对围产结局的影响.方法:2008-01～12我院妊娠分娩的GDM60例作为观察组,按照1∶ 2比例选择正常的孕妇120例作为对照组,比较两组间母婴并发症、分娩方式差异.结果:观察组羊水过多、子痫前期、产后出血、早产、剖宫产较与对照组高(P＜0.05);巨大儿、呼吸窘迫综合征、死亡也较对照组多(P＜0.05).结论:GDM对围生期的母儿均有较大影响,应积极普及妊娠期糖尿病的相关知识,开展GDM的早期筛查、诊断及规范化治疗、采用适当的分娩方式.     

腹腔镜手术联合细节护理对腹股沟疝患儿预后的影响

目的探讨腹腔镜手术联合细节护理对腹股沟疝患儿预后的影响。 方法选取2015年12月至2017年6月,延安大学咸阳医院行腹腔镜手术的68例腹股沟疝患儿为研究对象,随机分为研究组及对照组,每组患儿34例。研究组围手术期给予细节护理,对照组给予常规护理。比较2组术后康复情况,包括术后排气时间、排便时间、下床活动时间、住院时间及住院总费用等;记录2组患儿术后并发症发生情况;统计2组患儿家属对临床护理的满意度。 结果研究组术后排气时间、排便时间、下床活动时间、住院时间均较对照组显著缩短,住院总费用较对照组减少,差异均有统计学意义（P<0.05）。术后研究组并发症发生率低于对照组,总满意度显著高于对照组,差异均有统计学意义（P<0.05）。 结论腹腔镜手术联合细节护理可显著改善腹股沟疝患儿预后,减少术后并发症的发生,降低复发风险,提升患儿家属满意度。     

MK mRNA在人乳腺癌组织中的表达

目的　探讨Midkine(MK)mRNA在乳腺癌组织中的表达。方法　采用逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)技术检测 6例乳腺浸润性导管癌组织及相应癌旁正常组织中MK的表达情况。结果　 6例乳腺癌组织均表达MKmRNA(表达率为 10 0 % ) ,而 6例癌旁正常组织除 1例有较弱的MKmRNA表达外 ,其余 5例表达阴性 (表达率 16.7% )。结论　MK基因高频率、高程度地表达于乳腺癌组织中     

人单核细胞株巨细胞病毒编码miR-US25-1-3p过表达后蛋白质组学变化分析

摘要:目的分析人 单核细胞株(THP-1)过表达人巨细胞病毒( HCMV)编码miR-US25-1-3p后蛋白质表达谱变化及价值。方法采用脂质体将 hemv-miR-US25-1-3p模拟物转染THP-1细胞构建hemv-miR-US25-1-3p过表达细胞株，RT-qPCR验证转染 效果;采用串联质谱标签标记联合液相色谱-串联质谱对hemv-miR-US25-1-3p 过表达后THP-1细胞蛋白质组学进行定量分析,生物信息学分析差异表达蛋白质生理病理功能;western blot验证重要差异蛋白表达变化。结果与对照相比， THP-1 细 胞过表达hcmv-miR-US25-1-3p后65种蛋白质呈现差异表达,其中17种上调,48种下调。GO、COG和KEGG注释及功能预测结果显示,差异表达蛋白主要参与炎症反应信号通路、代谢过程、细胞及遗传信息功能,与肿瘤、病毒性心肌炎、非酒精性脂肪 肝、原发性免疫缺陷病、类风湿关节炎、多种病原体感染、阿尔茨海默病、亨廷顿病等多种疾病相关。48种下调蛋白质中,文献调研和生物信息学分析发现，肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRIL)和受激活调节正常T细胞表达和分泌因子(RANTES) 参与抗病毒及炎症反应,上述蛋白质下调表达经western blot 验证。结论HCMV 编码的hcmv-miR-US25-1-3p 能够影响宿主蛋白表达谱,并可能通过抑制TRAIL和RANTES表达,促进病毒潜伏、免于宿主细胞杀伤。