C1q肿瘤坏死因子相关蛋白6破坏大鼠脑缺血再灌注损伤后血脑屏障的机制研究

目的 探讨C1q肿瘤坏死因子相关蛋白6（C1q and tumor necrosis factor related protein 6，C1QTNF6） 对大鼠大脑中动脉缺血再灌注（middle cerebral artery occlusion reperfusion，MCAO/R）后血脑屏障及内皮细胞闭合蛋白（occludin）和闭锁小带蛋白-1（zonula occludens 1，ZO-1）表达的影响。      

脑缺血再灌注后皮质区和纹状体区细胞周期蛋白D1和周期蛋白依赖性蛋白激酶4基国表达对神经细胞凋亡的影响

背景脑缺血再灌注后细胞周期蛋白的表达以其在凋亡机制中的作用为主,部分细胞凋亡是由于细胞增殖周期的异常调控所致. 目的研究脑缺血再灌注后细胞周期蛋白 D1( cyclin D1)和周期蛋白依赖性蛋白激酶 4( cyclin dependent kinase,CDK4)基因表达及其与神经细胞凋亡的关系. 设计随机对照的实验研究. 地点和材料本实验在青岛大学医学院脑血管病研究所和山东省脑血管病防治重点实验室完成.成年健康雌性 SD大鼠 36只,体质量 230～ 270 g,清洁级,由中国科学院上海实验动物中心提供.将动物随机分为假手术组 4只和实验组 32只,实验组再进一步分为缺血 1.5 h再灌注 2, 6, 12 h, 1, 2, 3, 7和 14 d亚组,每组 4只. 方法全部实验均由本文作者完成.具体方法应用线栓法经左侧颈外-内动脉插线建立 SD大鼠大脑中动脉阻塞再灌注模型,原位末端标记法检测脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的变化,原位杂交技术检测 cyclin D1 mRNA和 CDK4 mRNA的表达. 结果脑缺血再灌注 2 h脑组织即开始出现凋亡神经细胞,并于 1 d和 2 d分别在皮质区和纹状体区达高峰(分别为 72.80± 4.66和 96.75 ± 4.37).神经细胞 cyclin D1 mRNA和 CDK4 mRNA的表达分别于再灌注 2 h和 6 h开始逐渐增强,并于 12 h和 1 d分别在皮质区和纹状体区达高峰(皮质区分别为 94.50± 2.75和 85.75± 3.73,纹状体区分别为 88.25± 5.06和 89.80± 2.93),至再灌注 14 d降至假手术组水平. cyclin D1 mRNA和 CDK4 mRNA的表达与凋亡细胞的区域基本相同. 结论脑缺血再灌注后皮层区较纹状体区对缺血更为敏感, cyclin D1 mRNA和 CDK4 mRNA表达可能是诱导细胞凋亡的重要因素之一.     

胡黄连苷Ⅱ对脑缺血损伤后神经细胞凋亡和超微结构的影响

目的探讨胡黄连苷Ⅱ对脑缺血损伤后神经细胞凋亡和超微结构的影响。方法成年健康♂Wistar大鼠60只,应用线栓法建立大鼠脑缺血模型,经腹腔注射胡黄连苷Ⅱ(20 mg·kg-1)干预治疗,改良神经功能评分(m NSS)评价动物神经行为功能,氯化三苯基四氮唑染色观察脑梗死体积,HE染色和透射电镜观察脑组织病理和超微结构,原位末端标记法检测细胞凋亡,免疫组织化学和Western blot检测p-ERK1/2表达水平。结果大鼠脑缺血损伤后表现出神经功能障碍和脑梗死病灶,皮质区神经元和血脑屏障结构损伤较重,皮质区凋亡细胞数量和p-ERK1/2蛋白表达较对照组明显增多(P<0.05)。治疗组大鼠mN SS评分和脑梗死体积较模型组明显降低(P<0.05),皮质区神经元和血脑屏障损伤减轻,凋亡细胞与p-ERK1/2表达水平较模型组明显降低(P<0.05)。结论胡黄连苷Ⅱ可能抑制神经细胞凋亡,改善缺血区脑组织的形态结构,促进大鼠神经行为功能恢复。     

大鼠骨髓基质细胞体外培养转化为神经元细胞的实验研究

目的探讨体外原代培养骨髓基质细胞（BMSC）向神经元细胞转化情况.方法取成年Wistar大鼠BMSC,无血清和有血清培养基进行细胞克隆,获取骨髓间质干细胞（MSCs）,应用碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）和表皮生长因子（EGF）进行细胞扩增及诱导分化.结果分离纯化后的BMSC经原代培养形成细胞克隆团,经传代后其数量明显增多,其分化细胞形态多样,包括神经元细胞、星形胶质细胞和少突胶质细胞,仍具有神经细胞所特有的性质.结论BMSC具有较强的自我更新能力和多分化潜能,在合适的环境条件下,可诱导分化出神经元细胞和神经胶质细胞,是较为理想的种子细胞.     

脑缺血再灌流损伤神经细胞凋亡与Bcl-2和caspase-3的关系

目的 探讨大鼠局灶性脑缺血再灌流后神经细胞凋亡及其与Bcl-2和caspase-3基因表达的关系。方法应用原位末端标记(TUNEL)和原位杂交技术分别观察脑缺血再灌流不同时间点神经细胞凋亡的变化与Bcl-2mRNA和caspase-3 mRNA的表达。结果(1)脑缺血再灌流后凋亡神经细胞主要分布于缺血周围区，随着再灌流时间的延长凋亡细胞数逐渐增加，至24h达高峰，2d开始下降，14d时仍高于假手术组。(2)脑缺血再灌注2h后，神经细胞Bel-2 mRNA开始表达，并随着再灌流时间的延长而增强，12～24h达高峰，2d后逐渐下降，至14d略高于假手术组。(3)脑缺血再灌流后，神经细胞caspase-3 mRNA的表达与Bcl-2m RNA的表达规律相似，但于再灌流24h达高峰。结论脑缺血再灌流后，缺血周围区神经细胞的凋亡是-个动态的渐进过程，Bel-2基因表达可能抑制细胞凋亡，caspase-3基因在介导脑缺血损伤神经元凋亡过程中起关键作用。     

海带对实验性高脂血症大鼠血脂水平的调节作用机制

目的:探讨海带对高脂血症大鼠血脂的调节作用机制。方法:健康雌性Wistar大鼠40只,应用高脂饲料喂养方法建立高脂血症动物模型,海带粉饲料喂养干预治疗2周。生化法检测大鼠血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平及脂蛋白酯酶(LPL)和肝脂酶(HL)活性。酶联免疫吸附法测定羟甲基戊二酰辅酶A(HMG-CoA)水平和羟甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMG-CR)活性。结果:经海带干预治疗后,动物血清TG、TC和LDL水平较模型对照组显著降低(P<0.05),而HDL水平显著升高(P<0.05)。海带治疗组动物血清和肝组织中LPL和HL水平均显著高于模型对照组(P<0.05),而显著低于阳性对照组(P<0.05)。海带治疗组动物肝组织HMG-CoA的含量显著高于模型对照组、而HMG-CR的活性显著低于模型对照组(P<0.05),且HMG-CR活性显著高于阳性对照组(P<0.05)。结论:海带可能通过增强LPL、HL和HMG-CR的活性,影响TG、TC、LDL和HDL等组分的代谢,发挥调节血脂水平的作用。     

吲哚新碱抑制S180肉瘤细胞小鼠移植瘤生长的研究

目的研究吲哚新碱(new indole alkali,NIA)对S180肉瘤细胞小鼠皮下移植瘤的抑制作用及其机制。方法建立S180肉瘤细胞小鼠皮下移植瘤动物模型,随机分为空白对照组(溶剂灌胃组)、阳性对照组(CTX,50mg.kg-1.d-1)及NIA低剂量组、中剂量组、高剂量组。观察小鼠体质量变化并计算抑瘤率;观察肿瘤组织病理学变化;用免疫组化法检测移植瘤组织中Bax及Survivin蛋白表达,并用TUNEL法检测细胞凋亡。结果与空白对照组比较,CTX组及NIA低、中、高剂量组肿瘤生长均比较缓慢,瘤质量差异有统计学意义(P均<0.05),抑瘤率分别为53.48%、19.67%、23.45%、37.06%;与CTX组比较,NIA低、中、高剂量组瘤质量较大,差异均有统计学意义(P均<0.05)。病理组织学检查,NIA组标本可见细胞凋亡形态变化。与空白对照组比较,CTX组及NIA高、中剂量组Bax蛋白表达及凋亡指数增高,CTX组及NIA高剂量组Survivin蛋白表达下调,差异均有统计学意义(P均<0.05)。与CTX组比较,NIA高、中、低剂量组Bax蛋白表达及凋亡指数降低(P均<0.05),NIA低、中剂量组...     

脑的不对称性影响大鼠局灶性脑缺血的结局

为评价左右侧大脑中动脉闭塞(MCAO)对右利大鼠神经行为功能和脑梗死体积的影响,本研究应用四足动物觅食实验筛选右利爪雄性SD大鼠24只,随机分为经左、右侧插线组各12只,8%水合氯醛腹腔注射(300mg/kg)麻醉,线栓法经左、右侧颈外-内动脉插入头端涂有多聚赖氨酸的4-0尼龙线,建立大鼠MCAO缺血2h模型,再灌注72h后评价动物的神经行为功能,测量脑梗死体积。结果表明,所有动物在脑缺血2h神经功能缺损评分最高,再灌注1、24、48和72h经左侧MCAO大鼠显著高于经右侧MCAO大鼠(P<0.05),后者功能明显优于前者,脑梗死体积经左侧插线的大鼠显著大于经右侧插线的大鼠(P<0.05)。研究结果提示,大鼠主侧半球大脑中动脉缺血后,神经功能缺损和脑梗死体积较对侧严重,脑的不对称性影响大鼠局灶性脑缺血的最终结局。     

大鼠脑缺血/再灌注损伤时X连锁凋亡抑制蛋白和Smac表达及神经调节素的干预作用

目的观察神经调节素-1β(NRG-1β)对缺血/再灌注后脑组织X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)和次级线粒体源性caspase激活剂(Smac)表达的影响,探讨NRG-1β对脑缺血/再灌注损伤的保护作用。方法成年健康♂Wister大鼠110只,随机分为3组:假手术组(n=10),对照组(n=50)和治疗组(n=50)。治疗组动物单剂量给予NRG-1β干预治疗。应用原位末端标记技术(TUNEL)检测细胞凋亡,免疫荧光双标法和免疫印迹法检测脑组织XIAP和Smac蛋白的表达。结果缺血/再灌注能诱导脑组织细胞凋亡,随着缺血时间的延长,凋亡细胞数明显增加,NRG-1β处理能明显减少脑组织皮质区和纹状体区凋亡细胞数(P<0.05)。缺血/再灌注可诱导XIAP和Smac蛋白的表达,NRG-1β处理能上调XIAP和下调Smac的表达,协调神经细胞中XIAP/Smac的比例(P<0.05)。结论脑缺血后给予NRG-1β处理,可能通过协调XIAP/Smac蛋白的表达水平,调节细胞凋亡的发展过程,避免神经元发生不可逆损伤,从而对缺血/再灌注损伤有积极的保护作用。     

胡黄连苷Ⅱ对大鼠脑缺血性损害和基质金属蛋白酶-9表达的影响及治疗的最佳时间窗与剂量的选取

目的探讨胡黄连苷Ⅱ对大鼠脑缺血性损伤和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响,以及最佳治疗时间窗与剂量的选取。方法将174只Wistar大鼠随机分为脑缺血组、正常对照组和治疗组,按正交试验设计治疗组大鼠再分为缺血1.0 h、1.5 h、2.0 h、2.5 h,以及分别用胡黄连苷Ⅱ5 mg/kg、10 mg/kg、20mg/kg和40 mg/kg亚组。用双侧颈总动脉结扎法制作脑缺血大鼠模型,治疗组大鼠按相应时间点和剂量经腹腔注射胡黄连苷Ⅱ。用HE染色观察脑变性细胞指数(DCI)及形态;电镜观察脑组织超微结构。免疫组化染色和Western blot法检测脑组织MMP-9蛋白水平,逆转录(RT)-PCR检测MMP-9 mRNA水平。结果脑缺血组大鼠脑组织损害和MMP-9表达水平明显高于正常对照组(均P0.05)。与脑缺血组比较,治疗组的脑组织损害及DCI和MMP-9表达水平明显减轻和降低(均P0.05)。治疗组各亚组间两两比较,缺血1 h亚组与2 h、2.5 h亚组间脑DCI的差异有统计学意义(均P0.05);缺血2 h与2.5 h亚组间的脑MMP-9阳性细胞指数,缺血1 h与1.5 h、2 h亚组,1.5 h与2.5 h亚组,2 h与2.5 h亚组间的脑MMP-9蛋白水平的差异均有统计学意义(均P0.05);以及剂量5 mg/kg与20 mg/kg亚组间的脑MMP-9 mRNA水平的差异有统计学意义(均P0.05)。各剂量亚组间的脑DCI、MMP-9阳性细胞指数和蛋白水平的差异均无统计学意义(均P0.05)。结论胡黄连苷Ⅱ能抑制大鼠脑缺血后MMP-9的表达,并有显著的脑保护作用。按治疗时间窗最大化和用药剂量最小化的原则,其最佳的治疗时间窗为脑缺血后2 h内,剂量为(10~20)mg/kg。