颅内胶质瘤的联合基因治疗

文章总结了我科从94年7月至95年4月间采用B7基因和TK基因单独或联合运用治疗颅内胶质瘤12例。12例患者中男女各6例,年龄分布从15-63岁;平均42岁。肿瘤病理类型为:髓母细胞瘤3例、多形胶质母细胞瘤5例、星形细胞瘤Ⅲ级2例、少数胶质细胞瘤1例、血管网织母细胞瘤1例。3例为单纯B7基因体内及体外转基因治疗,3例为TK体内转基因治疗并转基因治疗后5天服更昔路韦,6例为联合转基因治疗,近期观察除4例患者曾有发热、寒颤并恶心、呕吐外,无其它严重并发症。且经对症处理后均能很快改善症状。所有病例均随访至今,除二例髓母细胞瘤患者有远处种植转移外,所有病例均存活良好。因观察随访时间太短,确切疗效还有待于进一步观察。     

￣3H─TdR法检测LAK细胞活性的建立及人肺腺癌细胞株（GLC─82）对LAK细胞的敏感性

用３Ｈ－ＴｄＲ释放法检测了个旧人肺腺癌细胞株（ＧＬＣ─８２），小鼠肥大细胞瘤（Ｐ８１５）及人红白血病细胞株（Ｋ５６２）对自然杀伤细胞（ＮＫ细胞），淋巴因子激活的杀伤细胞（ＬＡＫ细胞）的敏感性。结果表明：用３Ｈ─ＴｄＲ释放法检测ＮＫ、ＬＡＫ细胞活性具有灵敏、准确、重复性好的优点，适用于国内一般实验室开展；ＧＬＣ─８２细胞对ＮＫ细胞不敏感，而对ＬＡＫ细胞敏感，提示人肺腺癌用ＬＡＫ细胞治疗可能有效，ＧＬＣ─８２细胞可作为检测ＬＡＫ细胞活性的靶细胞。     

Jurkat细胞TCR基因重排对 BV CDR3的影响

目的探讨Jurkat细胞TCRBD2-BJ2基因重排对TCRβ链可变区互补决定区3（BV CDR3）可能产生的影响，为深入研究TCR基因重排奠定实验基础。方法RT-PCR扩增TCR BV26个亚家族CDR3区，结合TCR基因扫描（GeneScan）和基因测序技术，监测Jurkat细胞在增殖传代过程中以及在T细胞激活剂和超抗原SEA等刺激诱导后TCR BV CDR3谱系漂移及长度和序列变化。结果表达TCR BV8家族的单克隆细胞株Jurkat，在增殖传代过程中，以及经刺激诱导48或72h后，未监测到有TCR BV8以外的新的BV亚家族出现，BV8 CDR3长度和一级核苷酸序列也未发生变化。结论Jurkat细胞发生的TCR基因重排可能不引起TCR BV CDR3改变，因而对TCR BV CDR3区抗原识别特异性（即抗原特异性漂移）并未产生影响，但并不排除TCR发生改变的可能性。     

大肠杆菌表达的人血管内皮细胞生长因子的复性与纯化研究

以包涵体的形式在大肠杆菌中表达人血管内皮细胞生长因子（VEGF121），采用发酵罐进行工程菌的高密度发酵，得到菌干重46g／L，VEGF121包涵体4．5g／L。包涵体经洗涤、溶解、超滤法复性，得率为81％。复性后的目标蛋白经离子交换色谱及SepharcryS-100凝胶过滤色谱纯化，目标蛋白的纯度达到95％，目标蛋白的总得率31％。采用该工艺制备的VEGF121能刺激人脐静脉血管内皮细胞增殖，具有天然VEGF生物学活性。     

系统性红斑狼疮患者外周血T细胞TCRβ链CDR3谱系漂移和序列鉴定

目的 探讨系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血T细胞TCRβ链CDR3谱系漂移，为SLE的免疫应答机制和个性化治疗研究提供基础。方法 采用免疫扫描谱型分析技术，分析5例正常献血员的CDR3分布特征及5例SLE患者PBMC中T细胞TCRβ链CDR3的优势利用情况，对克隆性增生T细胞的CDR3区进行序列分析。结果 5例正常献血员PBMC TCR BV CDR3谱型均呈高斯分布，5例活动型SLE患者24TCR BV CDR3家族均出现不同的优势表达。对单／寡克隆性增生T细胞B链CDR3区基因进行测序，证实存在不同的CDR3序列。结论 SLE活动期外周血T细胞TCRβ链CDR3谱系出现明显漂移，提示CDR3的选择性表达可能与SLE的免疫发病机理有关。特异应答的T细胞TCRCDR3序列的确定，将为SLE的发病机制研究和个性化治疗提供新的方法与手段。     

肺结核患者外周血αβT细胞CDR3谱系研究

目的探讨活动性肺结核患者外周血T细胞TCRα,β链CDR3谱系漂移,为肺结核患者特异性T细胞免疫应答机制和免疫治疗研究提供基础。方法采用基因扫描谱型分析技术,分析6例正常献血员及6例活动性肺结核患者PBMC中T细胞TCR CDR3谱型分布特征及患者TCRVα和Vβ基因家族的优势取用情况,对克隆性增生T细胞CDR3区进行序列分析。结果6例正常献血员外周血中TCR 32 Vα,24Vβ家族CDR3谱型均呈高斯分布(gaussian distribution),6例活动性肺结核患者出现不同Vα和Vβ家族优势取用,对部分单/寡克隆增生T细胞α,β链CDR3区基因进行测序,证实存在不同的CDR3序列。结论肺结核患者活动期外周血T细胞TCRα,β链CDR3谱系出现明显漂移,提示CDR3的选择性表达与结核患者细胞免疫应答机制有关,优势取用Vα,Vβ家族T细胞TCR CDR3序列的确定,为肺结核患者特异性T细胞免疫治疗研究提供基础。     

抗人白细胞间素Ⅱ高效价多克隆及单克隆抗体的制备

采用不同免疫方案免疫家免及小鼠制备抗人IL-2多克隆及单克隆抗体．其中以沙门氏菌体吸附方法效果最佳，其免疫效价比福氏佐剂方法高数倍、而抗原用量却仅为前者的1／4。选用强化加强免疫及细胞富集措施，并采用大鼠胸腺混合培养上清替代滋养细胞，一次融合获得106个阳性株。经过自然淘汰试检，筛选出18株稳定分泌抗人IL-2单克隆抗体的杂交瘤，其中未亚克隆化的原始孔细胞在体外连续传代2个月以上，仅三株出现抗体转阴现象。     

中医治疗大肠癌的思路与方法探讨

大肠癌大致分为湿热蕴结、瘀毒内阻、脾肾亏虚、肝肾阴虚4个证型,临床治疗宜在以上辨证的基础上,结合有明确抗癌作用的药物,可望能提高疗效。并注意"六腑以通为用"的特点,复其通降之职。中晚期大肠癌往往虚实夹杂,但抓住脾虚瘀毒互结的病理特点予以健脾化湿、活血解毒,可望能提高患者生活质量及延长生存期,并可结合灌肠、介入等局部给药的方式,更好地发挥中医药的优势。     

过敏性紫癜患儿血可溶性细胞间黏附分子-1与IgE、嗜酸 细胞计数的关系

目的 探讨过敏性紫癜患儿急性期与缓解期血浆可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)、血清IgE水平及嗜酸细胞计数(EOC)变化的相互关系.方法 将符合过敏性紫癜诊断标准的患儿68例分为肾损害型(n=30)和非肾损害型(n=38)两组,选取健康儿童30例为对照组.检测疾病急性期和缓解期患者与对照组儿童血sICAM-1(μg/L)、IgE(IU/ml)及末梢血中EOC三项指标,并对所检测值进行统计学分析.结果 HSP组急性期的sICAM-1、IgE及EOC检测值较对照组明显增高(均P＜0.01),IgE水平在肾损害型较非肾损害型增高(P＜0.01),而sICAM-1和EOC两组差异无统计学意义(P＞0.05);HSP组缓解期sICAM-1和IgE值均高于对照组(P＜0.01).急性期肾损害型患儿的sICAM-1值分别与IgE和EOC值改变呈正相关(r=0.706 5,r=0.609 0,P＜0.001);非肾损害型患儿sICAM-1值分别与IgE和EOC值改变呈正相关(r=0.625,P＜0.001,r=0.596 3,P＜0.01).结论 sICAM-1、IgE水平及EOC在伴或不伴肾损害过敏性紫癜患儿急性期与缓解期变化具有明显相关性,表明这些因子可能参与了本病的病理过程.     

苯并(a)芘对神经元的细胞活性和脂质过氧化的影响

目的研究苯并（a）芘[B（a）P]对神经元活力和SOD、MDA水平的影响。方法选用新生1—3d的SD大鼠分离大脑皮质进行神经元培养，在细胞培养第5天左右，选取生长良好的同批次神经细胞，以B（a）P同时加或不加S9分别对神经元染毒，使B（a）P终浓度分别为0μmol／L（对照组）、10μmol／L、20μmol／L、40／μmol／L。继续培养40h，应用CeIlCamting Kit8检测染毒后各组神经元的细胞活力，黄瞟呤氧化酶法和硫代巴比妥酸法测定神经元SOD、MDA水平。结果随着B（a）P浓度的增加，神经细胞活力下降，不加S9中、高剂量组与对照组比较有统计学差异，加S9后各剂量组与对照组比较均有统计学差异，表现出较明显的剂量-反应关系。染毒后的神经细胞内SOD和MDA测定表明，不加S9中、高剂量组与对照组比较有显著性差异，加S9后随着B（a）P浓度的增加，神经细胞SOD活性下降，MDA含量升高，各剂量组与对照组比较有统计学差异。结论B（a）P可对神经元产生细胞毒性效应，脂质过氧化可能是细胞活力降低的原因之一。