急性髓系白血病核仁磷酸蛋白基因及其突变检测方法的建立

本研究建立PCR技术检测白血病细胞核仁磷酸蛋白（nucleophosmin，NPM）基因及突变的方法。以白血病细胞系和白血病临床标本为研究对象，首先采用RT—PCR检测NPM mRNA表达水平，其次应用PCR方法检测NPM第12外显子，并对扩增产物进行测序分析，最后以插入NPMA型突变cDNA的质粒作为阳性模板，建立PCR检测NPM突变的方法并进行方法学评价，并采用此方法直接检测白血病细胞中是否存在NPM基因突变。结果表明：白血病细胞系NPM mRNA表达水平较正常单个核细胞对照组高，23例急性髓系白血病标本均不同程度地高表达NPM mRNA；采用PCR扩增联合测序分析发现，髓系白血病细胞系（THP1和K562）NPM基因组第12外显子无突变，但K562细胞NPM基因3’非编码区存在1个T碱基缺失；建立直接针对NPMA型突变cDNA的PCR方法，能特异扩增NPMA型突变基因；该方法重复性好，批内、批间变异系数分别为1．6％和3．1％，灵敏度为100PgcDNA；采用此方法从23例白血病临床标本中检出2例NPM突变阳性。结论：建立了检测NPM mRNA水平和A型突变的实验方法，发现白血病细胞高表达NPM mRNA水平，部分白血病患者NPM基因发生A型突变。     

NPM1基因突变调控THP-1细胞体外增殖和侵袭及其机制

目的探讨NPM1基因突变对THP．1细胞体外增殖和侵袭的影响及其机制。方法将THP．1细胞分为THP-1．mA组、空载体转染组和未处理组,THP-1．mA组使用携带人NPMl-mA的重组质粒pEGFPCI．NPMl．mA转染THP-1细胞,建立稳定表达NPM1．mA的白血病细胞系（THP-1-mA）;空载体转染组使用空载体质粒pEGFPCI转染THP-1细胞;未处理组不进行质粒转染。采用反转录PCR、免疫细胞化学检测3组细胞NPMl．mA基因和蛋白的表达;使用细胞生长曲线观察细胞体外增殖能力;流式细胞术检测细胞周期分布;细胞体外侵袭实验观察细胞体外侵袭能力;实时荧光定量PCR检测血管生成素1（Ang-1）、Ang．2mRNA的表达。结果成功构建了稳定表达NPMl．mA的白血病细胞株。与空载体转染组和未处理组比较,稳定表达NPMl。mA蛋白的THP-1．mA细胞体外增殖能力明显增强,G1期细胞比例减少,S期细胞比例增加（均P〈0．01）。与空载体转染组和未处理组比较,细胞体外侵袭实验显示THP．1-mA组细胞体外侵袭能力增强,实时荧光定量PCR显示THP．1．mA组细胞Ang．1mRNA表达增高（均P〈0．01）。结论NPMl突变基因的表达能够促进THP-1细胞体外增殖和侵袭,而Ang-1可能在其中发挥重要作用。     

父母和教师使用《听觉整合问卷》 评估听障儿童的一致性研究

目的 考查父母和教师使用《听觉整合问卷》(meaningful auditory integration scale,MAIS)评估听障儿童听觉发展情况的一致性.方法 请81名听障儿童的父母和康复教师分别利用MAIS中的父母问卷和教师问卷对儿童进行评估,对父母问卷和教师问卷的得分进行统计分析.结果 ①整体上,父母问卷的得分高于教师问卷的得分,差异极显著(t=4.970,P=0.000);②在信心分、警觉分和意义分3个维度上,父母问卷的得分也显著高于教师问卷得分(t1=2.115,p1=0.037;t2=5.340,P2=0.000;t3＝3.553,p3=0.001).结论 父母和教师在使用MAIS评估听障儿童的听觉发展情况时存在不一致,有待于扩大样本量或追踪进行进一步研究.     

透视引导下穿刺构建兔椎间盘退变模型的影像和病理变化

背景：国内外构建的椎间盘退变动物模型大部分是在手术直视下进行的,手术切开操作对动物的损伤较大。目的：透视引导下穿刺构建兔椎间盘退变模型,观察椎间盘退变过程中影像学及病理学的变化规律。方法：透视引导下穿刺新西兰大白兔L2/3、L3/4、L4/5椎间盘,不同时间点进行X射线及MRI扫描与病理学检测,测量椎间盘的T2WI信号强度。结果与结论：椎间盘穿刺后,随着时间的推移,椎间盘逐渐退变,椎间隙逐渐变窄,椎间盘T2WI信号逐渐减低,椎体边缘骨质增生,髓核、纤维环变性、坏死,最终纤维环完全撕裂。表明透视引导下穿刺后椎间盘逐渐发生退变,病理改变与人类椎间盘退变的病理改变相似,且建模方法具有操作简单,创伤小,成功率高等优点。     

疑似霍乱弧菌鉴定及分子分型检测

目的 对北京市某医院肠道门诊2株疑似霍乱弧菌进行鉴定,检测其主要毒力基因,并分析其基因型别特征.方法 利用细菌生化鉴定条(API 20 E)进行生化鉴定,玻片凝集法确定其血清型别,应用PCR及测序技术分析其16 S rRNA基因;PCR检测其8个主要毒力基因,脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析其基因型别.结果 经鉴定,该2株疑似霍乱菌株均为非O 1非139群霍乱弧菌,经16 S rRNA分析与美国国家生物技术信息中心数据库中霍乱弧菌相似性达100%,均包含毒力基因hylA、ompW和toxR,PFGE结果显示2株菌具有完全不同的带型.结论 2株疑似霍乱弧菌为非O 1非139群霍乱弧菌,其致病因素与(hylA)、(ompW)、(toxR)毒力基因有关,并且2株菌遗传关系较远.     

滑囊软骨瘤病的CT和MRI影像学分析

目的 探讨滑囊软骨瘤病的CT和MRI表现特点.方法 回顾性分析手术病理证实的29例滑囊软骨瘤病的临床影像学资料,29例均有X线平片检查,其中8例行CT检查,9例行MRI检查.结果 病变累及三角肌滑囊2例,肩周多个滑囊3例,髂腰肌囊4例,髌上囊20例;X线平片和CT表现为滑囊内多发大小不等的斑片状、类圆形钙化或骨化结节影,MRI清晰地显示含有不同钙盐成分的软骨瘤结节、滑膜增厚和滑囊积液.结论 X线平片是诊断滑囊软骨瘤病的首选方法,但CT或MRI可直接显示滑囊本身变化.     

中医辨证论治慢性支气管炎临床观察

目的：观察中医辨证治疗慢性支气管炎的临床效果。方法：选取86例慢性支气管炎患者作为研究对象,随机分为实验组和对照组各43例,对照组患者采用传统西药治疗,实验组在西药治疗基础上给予中医辨证治疗。结果：中医辨证治疗慢性支气管炎患者可有效提高患者肺功能水平,且其治疗效果明显高于西医治疗,比较差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论：采用中医辨证治疗慢性支气管炎临床疗效显著,可有效弥补西医治疗的缺陷,从而改善患者体质,加快患者治疗与康复速度,值得临床推广应用。     

Beclin1过表达对黑素瘤SK-MEL-2细胞生物学行为的影响

【摘要】 目的 探讨自噬标志基因Beclin1过表达对黑素瘤SK-MEL-2细胞生物学行为的影响。方法 Western印迹技术检测黑素瘤细胞A375、SK-MEL-2中Beclin1的蛋白表达水平，选取低表达 Beclin1蛋白的SK-MEL-2细胞株作为研究对象，将细胞分为空白组、阴性对照组、实验组，空白组不作处理，阴性对照组转染pcDNA.3.1/myc-His（-）A，实验组转染pcDNA3.1-Beclin1质粒。培养一定时间后，采用CCK8法分析Beclin1对细胞增殖的影响；Transwell实验和细胞划痕实验观察Beclin1过表达对SK-MEL-2细胞侵袭和迁移能力的影响。采用重复测量方差分析和完全随机设计方差分析检验各组间的指标差异，组间比较采用LSD-t检验。结果 SK-MEL-2细胞Beclin1蛋白相对表达水平（0.037 ± 0.010）显著低于A375细胞（0.670 ± 0.150），F = 46.62，P＜0.05。实验组Beclin1蛋白相对表达水平（0.32 ± 0.04）显著高于阴性对照组（0.06 ± 0.02）和空白组（0.07 ± 0.02），均P＜0.05。CCK8实验结果显示，不同组间、不同时间细胞增殖率差异均有统计学意义（F组间 = 1 077.36，F时间 = 4 903.04，均P＜0.05），组别和时间之间有交互作用（F交互 = 205.20，P＜0.05）。Transwell实验显示，24 h后实验组高倍（× 200）视野下穿过小室的细胞数（18.67 ± 1.19）明显低于阴性对照组（87.89 ± 6.05）和空白组（86.78 ± 5.93），均P＜0.05；划痕实验中24、48 h时实验组细胞迁移距离均显著低于空白组和阴性对照组（P＜0.05）。结论 Beclin1过表达可显著抑制SK-MEL-2细胞的增殖、侵袭和迁移。     

药品管理法在处置室中的新应用

2012年初我院全面开展三甲复审的准备工作,对全体职工进行了药事管理与法规的理论学习。根据药品管理法,对医院所有处置室进行了规范,收到了良好的效果。1药品存放的环境要求医疗机构需要在急诊室、病区护士站等场所临     

体外护增对脐血细胞重建千血功能的影响

目的：探讨体外扩增对人脐血造血细胞重建造血功能的影响。方法：采用祖细胞集落测定、造血细胞体外液体扩增培养和脾结节形成法等技术,研究体外扩增的人脐血细胞和新鲜脐血细胞输注对致死性照射小鼠体内造血重建能力的影响。结果：与新鲜脐血细胞移植相比较,扩增的人脐血细胞同样能够处长小鼠生存时间,更快地加速外周血常规恢复,同时脾脏有多系细胞组成的造血结节（CFU-S）,移植后第30天骨髓中培养出粒单系祖细胞（CFU-GM）和焊增性红系祖细胞（CFU-E）,且CFU-S、CFU-GM和CFU-E计数在两实验组间差异无显著性意义。结论：人脐血扩增的造血细胞同新鲜细胞一样能够在致死性照射小鼠体内重建造血,体外扩增培养并未影响其早期的造血重建能力。