Nesprin基因RNAi慢病毒载体的构建*

背景：Nesprin蛋白缺失将影响细胞骨架组织和动态平衡,引起细胞骨架刚性丧失或导致细胞过早成熟老化,其对间充质干细胞的作用如何？ 目的：构建Nesprin蛋白siRNA慢病毒载体,并转染骨髓间充质干细胞。 方法：针对Nesprin靶基因序列设计并合成4对miRNA oligo,将4种miRNA干扰质粒转入大鼠血管平滑肌细胞,筛选最有效干扰序列;将最佳干扰序列和pDONR221载体进行重组反应,获得含干扰序列的入门载体,再将入门载体和慢病毒表达目的载体pLenti6/V5-DEST进行重组反应,获得含干扰序列的慢病毒表达载体,转染包装细胞293T细胞,包装慢病毒,以293T细胞GFP蛋白水平测定病毒滴度。慢病毒转染大鼠骨髓间充质干细胞。 结果与结论：测序证实合成的4对miRNA oligo正确,RT-PCR和western-blot筛选出最佳干扰miRNA质粒为SR-3,成功构建了Nesprin siRNA的慢病毒载体LV-siNesprin。包装慢病毒,浓缩病毒悬液的活性滴度为106 TU/mL。慢病毒成功了转染骨髓间充质干细胞细胞。     

骨髓间质干细胞移植对心肌再生的影响

目的研究移植骨髓间质干细胞(MSCs)对梗死区心肌和血管再生的影响.方法抽取香猪骨髓,体外分离MSCs,经5-氮胞苷 (5-aza)转化.结扎冠状动脉左前降支(LAD),经LAD和梗死区注射MSCs;对照组注射培养液.3周和6周后,行单光子发射型计算机断层(SPECT)心肌显像检查.结果SPECT显像,对照组心肌有明显的充盈缺损;实验组细胞移植3周后在梗死区内有岛状的灌注显像区,6周后这些区域相互之间以及与正常心肌之间发生融合.心肌灌注显像,实验组评分高于对照组(P<0.01).结论MSC移植可再生心肌组织和血管.经LAD注射结合多点局部注射的方法可使移植细胞均匀分布于整个心梗区,促进再生的心肌组织与宿主心肌组织之间产生融合.     

腹膜透析并发胸膜腔积液的处理近况

1967年,Edwards和Unger首次报道了1例行急性腹膜透析(peritoneal dialysis,PD)的病人并发胸腔积液。以后,有关这一并发症的报道越来越多。急性短暂应用腹膜透析以及持续性非卧床腹膜透析(continuous ambulatory peritoneal dialysis,CAPD)和间断性腹膜透析(intermittent peritoneal dialysis,IPD)均可出现此并发症。发生率约2％～10％。早期,胸腔积液的发生认为是继续行腹膜透析的禁忌证。近年来,随着对此并发症的病因、诊断等的认识,在处理上有新的进展。现综述如下。     

高龄食管、贲门癌患者合并呼吸功能不全的围术期处理

目的 探讨高龄食管、贲门癌患者手术后呼吸功能衰竭的防治。方法 总结112例年龄大于75岁食管癌、贲门癌患者的手术治疗，其中根治性切除97例(86．61％)；姑息性手术10例，4例剖胸探查。结果 术后发生严重呼吸功能衰竭13例，8例呼吸机应用时间超过72小时，最长57天，5例气管切开。院内死亡3例。结论 高龄及肺功能低下并非手术禁忌症，术后肺功能衰竭是最常见的并发症，因此需做好术前评测、术中操作、防止误吸、呼吸机应用和营养支持等方面的围术期处理。     

108例二尖瓣闭式扩张术后再狭窄的外科治疗

目的总结108例二尖瓣闭式扩张术后再狭窄病人的再手术治疗围术期处理经验. 方法108例二尖瓣闭式扩张术后再狭窄病人首次术式经左径扩张94例,右径12例,左右径2例.术前心功能Ⅱ级42例,Ⅲ级52例,IV级14例.再次手术行二尖瓣置换(MVR)67例,MVR+三尖瓣成形(TVP)22例,二尖瓣主动脉瓣双瓣置换(DVR)13例,DVR+TVP 3例,MVR并其它术式3例. 结果术中死亡3例,术后早期死亡6例,占8.3%;术后发生并发症26例,占24.1%.术前心功能Ⅲ～IV级的死亡与并发症的发生率较心功能II级者有明显差异(P＜0.01). 结论二尖瓣闭式扩张术后再狭窄病人需尽早行手术治疗;术前正确评价和改善心肺功能,术中加强心肌保护及术后积极防治并发症是保证治疗成功的关键.     

18F-FDG-SPECT显像技术在肺癌诊断中的意义

目的 :研究18F FDG SPECT显像技术在肺癌诊断中的临床意义。方法 :利用恶性肿瘤组织高糖酵解的特性 ,对 3 6例肺癌患者用18F标记脱氧葡萄糖 ,使18F浓聚于癌组织中 ,再用带符合线路的SPECT探测其摄取率达到诊断目的 ,并与术后病理切片作对照研究。结果 :3 6例患者病灶检出灵敏度10 0 % ,正确率 91 67% ( 3 3 /3 6) ,其中鳞癌正确率 10 0 % ( 17/17) ,腺癌 84 62 % ( 11/13 )。结论 :18F FDG SPECT能有效地显像肺癌病灶 ,瘤体及转移淋巴结的检出率高于CT ,作为一种补充检查有着重要的临床意义。该检查价格便宜 ,成像清晰 ,有良好应用价值。     

高频胸壁振荡在高龄患者心脏外科手术后的应用

目的 探讨高频胸壁振荡(HFCWO)在高龄患者心脏外科手术后应用的耐受性、安全性和临床效果.方法 201例接受心脏外科手术的高龄患者(＞70岁)于拔除气管插管6～8h后行HFCWO联合人工胸部物理治疗(HFCWO组),应用Likert量表对每次治疗的耐受性进行评估,并观察患者初次HFCWO治疗前10 min、治疗中和治疗结束后10 min的循环和呼吸指标(心率、收缩压、中心静脉压、肺动脉平均压、呼吸频率和脉搏血氧饱和度)的变化.以仅行人工胸部物理治疗的165例心脏外科手术高龄患者(＞70岁)作为对照组,比较两组患者的临床资料(术后肺部感染发生率、胸腔积液发生率、肺不张发生率、二次气管插管率、ICU滞留时间、抗生素使用时间和住院时间).结果 HFCWO组共行984次HFCWO治疗,其中813次(82.62％)能够被患者较好耐受,66次(6.71％)不能耐受;未发生与HFCWO相关的不良事件;患者初次HFCWO治疗前10 min、治疗中和治疗结束后10 min的心率、收缩压、中心静脉压、肺动脉平均压、呼吸频率和脉搏血氧饱和度均无显著变化(P＞0.05).HFCWO组术后肺部感染发生率和胸腔积液发生率均显著低于对照组(3.98％ vs 9.09％,P＜0.05;6.47％ vs 12.72％,P＜0.05),术后抗生素使用时间和住院时间也显著短于对照组[(5.07±2.23)d vs (6.98±2.41)d,P＜0.05;(9.58±4.10)d vs (11.79±5.06)d,P＜0.05],而两组术后肺不张发生率、二次气管插管率和ICU滞留时间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 HFCWO在高龄患者心脏外科手术后拔除气管插管后早期应用安全,且能被大多数患者很好耐受.HFCWO联合人工胸部物理治疗对减少术后肺部感染、胸腔积液和抗生素的使用有一定作用.     

术中经食管超声心动图在微创二尖瓣成形手术中的应用

目的:探讨经食管超声心动图(TEE)指导下胸腔镜辅助微创二尖瓣成形手术的疗效.方法:回顾性分析2017年1月至2019年11月在上海交通大学医学院附属仁济医院因二尖瓣关闭不接受TEE指导下胸腔镜辅助微创二尖瓣成形手术的患者82例,其中男性57例,女性25例,年龄22～75岁.采用股动脉、股静脉插管建立外周体外循环、阻闭...     

前列腺素E_1减轻体外循环术后中性粒细胞在肺内聚集的实验研究

目的 :研究前列腺素 E1( PGE1)对体外循环的保护作用。方法 :用健康杂种狗 1 2只 ,分为对照组和实验组 ,建立狗体外循环模型。检测体外循环 ( CPB)后左、右房内丙二醛的含量。结果 :与对照组相比 ,实验组再灌注期中性粒细胞 ( PMN)在肺内聚集程度明显减轻 ,动脉血氧分压显著升高 ( P<0 .0 1 ) ,实验组肺水含量及肺内丙二醛的含量均较对照组显著降低 ( P<0 .0 1 )。结论 :前列腺素 E1可减轻 CPB引致的 PMN在肺内聚集 ,并减轻由此引致的肺组织损伤。     

PGE1对体外循环术后肺高压及右心功能的影响

目的研究体外循环(CPB)前后肺动脉压(PAP)及右心功能的变化,并探讨前列腺素E1(PGE1)对CPB后肺高压及右心功能的影响.方法 12条狗随机分为实验组(PGE1组)和对照组,经体外循环60min后观察PAP及右心功能的变化以及PGE1干预作用.结果 CPB后,PAP较CPB前有明显升高,反映右心功能的指标如心输出量(CO)、射血分数(EF)、心指数(CI)等则有明显降低.与对照组相比,PGE1组CPB后PAP明显降低,而右心功能有明显升高,体循环压力在CPB前后两组间无明显差异.结论 CPB可引起肺高压及右心功能的降低,PGE1可以选择性的作用于肺血管,降低肺动脉压力,促进术后右心功能的恢复.