肝细胞生长因子下调Smurf2拮抗肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化

目的 通过观察肝细胞生长因子( HGF)对正常大鼠肾上皮细胞(NRK-52E)转化生长因子β1( TGF-β1)诱导的Smad泛素化调节因子2(Smurf2)表达的影响,探讨HGF拮抗肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化(EMT)的分子机制.方法 以NRK-52E细胞为研究对象,给予TGF-β1(5μg/L)处理0～24 h;或部分细胞经HGF(20 μg/L)预处理30 min后,再予TGF-β1(5μg/L)处理1h或48 h;另外部分细胞予以Smurf2质粒表达载体或Smurf2 siRNA 转染24 h后,再予HGF处理24 h.应用Western印迹及间接免疫荧光染色方法检测Smurf2、SnoN、E钙黏蛋白(E-cadherin)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和纤连蛋白(FN)的表达.结果 与对照组相比,TGF-β1处理后迅速上调NRK-52E细胞中Smurf2蛋白表达(P＜0.01);同时显著诱导FN和α-SMA蛋白表达,并下调E-cadherin表达.而予HGF预处理细胞后,可快速抑制TGF-β1诱导的Smurf2表达上调(P＜0.01);并逆转TGF-β1介导的SnoN(P＜0.01)、E-cadherin(P＜0.05)、α-SMA(P＜0.01)和FN(P＜0.01)表达变化.此外,在NRK-52E细胞中过表达Smurf2蛋白可部分抑制HGF诱导的SnoN蛋白上调;而抑制Smurf2表达则可进一步促进HGF诱导的SnoN蛋白表达.结论 在肾小管上皮细胞中,HGF可能通过下调Smurf2表达抑制SnoN蛋白发生泛素-蛋白酶体依赖性降解,进而拮抗TGF-β1介导EMT形成.     

解耦联蛋白2对糖尿病小鼠心肌细胞凋亡相关蛋白表达的影响

目的:研究解耦联蛋白2(uncoupling protein2,UCP2)与糖尿病(diabetes mellitus,DM)小鼠心肌细胞凋亡的关系。方法:用雄性UCP2敲除小鼠(UCP2-/-)及C57BL/6小鼠建立糖尿病模型,各组分别饲养7天及28天。采用Hochest荧光染色观察糖尿病小鼠心肌细胞形态学的变化,Westernblot方法检测凋亡蛋白caspase3的表达。结果:①DM28天组Hochest染色细胞出现核固缩状和颗粒状荧光等典型的凋亡学特征。DM28天组较DM7天组染色质明显浓缩,荧光强度明显增加。UCP2-/-+DM7天组较DM7天组染色质浓缩减轻,颗粒状荧光减少;UCP2-/-+DM28天组较DM28天组染色质浓缩明显减轻,颗粒状荧光明显减少。②Western blot结果显示:UCP-/-+DM7天组cleaved-caspase3蛋白表达较DM7天组稍下降,无统计学意义(P>0.05);UCP2-/-+DM28天组cleaved-caspase3蛋白表达较DM28天组明显减少,(P<0.05)。结论:UCP2与糖尿病心肌细胞凋亡存在密切关系。     

尿酸上调赖氨酸氧化酶增加肾小管上皮细胞纤维连接蛋白合成

目的:通过观察尿酸对肾小管上皮细胞赖氨酸氧化酶表达的影响,探讨尿酸在肾小管损伤中的作用及其可能的机制. 方法:以正常大鼠肾小管上皮细胞株NRK-52E细胞为研究对象,以不同浓度的尿酸作用于该细胞,采用免疫蛋白印迹和间接免疫荧光的方法检测赖氨酸氧化酶(LOX)的表达水平,以及细胞外基质蛋白纤维连接蛋白(fibronectin,FN)表达的变化.观察用小干扰RNA下调LOX对尿酸诱导FN表达的影响. 结果:尿酸能够显著上调NRK-52E细胞LOX前体及成熟蛋白的合成,并呈现明显的剂量依赖关系;同时,FN的表达亦显著增加.LOX siRNA能够显著抑制尿酸诱导NRK-52E细胞表达成熟LOX的作用;同时LOX siRNA能够降低高尿酸导致的FN表达的增加. 结论:尿酸能够通过上调赖氨酸氧化酶增加FN的表达.     

同侧小体积肾及肾上腺肿瘤一期手术16例体会

目的 总结同侧小体积肾及肾上腺肿瘤患者一期行后腹腔镜肾部分及肾上腺部分切除术的临床经验.方法 回顾性分析2010年9月至2021年11月南京医科大学第一附属医院收治的16例同侧小体积肾及肾上腺肿瘤一期后腹腔镜手术患者的临床资料.结果 所有患者均在后腹腔镜下完成肾部分及肾上腺部分切除手术,其中机器人辅助手术3例,无中转开...     

慢性肾功能衰竭患者血清肌钙蛋白T／I的变化及其临床意义

大量研究表明，血清心脏肌钙蛋白T／I(cTnT／I)在心肌损害时升高，且cTnT／I可作为鉴别微小心肌损害的一个特异的生化指标。慢性肾功能衰竭患者几乎100％合并心血管疾病，研究发现慢性肾衰患者的cTnT／I升高。本文综述了cTnT／I的分布、结构、功能、表达特点、代谢特点、检测方法及其在慢性肾功能衰竭患者中的异常变化、发生机制以及对诊断和预后评估的价值。     

尿毒症毒素与心血管病变

尿毒症患者中的心血管病变是一个重要的临床问题，并且是首要的死亡原因，占尿毒症患者所有死因中的45％。与同年龄、同性别的正常人相比，尿毒症患者发生心血管病变的危险性高20倍。现在已经广泛地认识到在尿毒症患者中存在一些特异性和非特异性的心脏和心外血管的结构及功能改变，     

氟伐他汀抑制高糖诱导足细胞发生上皮—间叶细胞转分化

目的探讨他汀类药物保护高糖诱导的糖尿病肾小球损伤的可能机制。方法给予25mmol／L葡萄糖刺激的同时给予不同浓度的氟伐他汀处理分化后的足细胞36h。采用蛋白免疫印迹法检测旷平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、纤维粘连蛋白（FN）、CD2相关蛋白（CD2AP）和Wilms肿瘤1基因（WT-1）蛋白的表达;间接免疫荧光法检测α-SMA。结果低糖（5．6mmol／L）条件下小鼠足细胞表达高水平的WT-1、CD2AP,基本不表达α-SMA和FN;予25mmol／L葡萄糖作用36h后,足细胞中α-SMA和FN表达水平升高,同时WT-1和CD2AP表达水平降低。在高糖条件下给予不同浓度的氟伐他汀处理,结果表明氟伐他汀可部分逆转高糖的上述作用,且存在一定的剂量依赖性。结论氟伐他汀可在一定程度上抑制高糖诱导的足细胞发生向间叶细胞表型的转分化。     

高糖诱导大鼠血管平滑肌细胞转分化的作用

目的:观察高糖对体外培养的大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMCs)功能以及与成骨细胞转分化相关蛋白表达的变化,探讨糖尿病血管病变的可能细胞/分子发病机制. 方法:用组织贴块法建立SD大鼠胸主动脉VSMCs的体外培养技术;高糖(葡萄糖浓度:50 mmol/L)作用该细胞,设相同浓度甘露醇为对照组,观察在不同的培养时间下(3、12h和第3、6、9、12d),采用免疫蛋白印迹法和间接免疫荧光法分别检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA),骨桥蛋白(osteopontin,OPN)和成骨细胞特异性核转录因子(core-binging factor α-1,Cbfα-1/RUNX2)的表达.细胞钙沉积含量测定观察培养细胞钙盐的沉积. 结果:组织贴块法培养的大鼠原代胸主动脉VSMCs呈梭型,α-SMA表达强阳性;高糖作用12h,VSMCs的Cbfα-1表达明显上升;高糖作用9d后,VSMCs的α-SMA表达量较高糖作用前降低近90%;免疫荧光染色显示VSMC细胞呈低强度的α-SMA染色阳性;同时,高糖作用下的VSMCs能够检测到OPN蛋白的表达,与对照组相比差异显著;高糖作用下细胞钙沉积含量明显增加. 结论:持续的高糖作用能够使动脉VSMCs发生向类似成骨样细胞的转分化,提示高糖诱导的VSMCs转分化可能参与糖尿病血管病变的发生发展.     

小鼠BTLA基因重组慢病毒载体的构建及鉴定

目的 :构建小鼠B、T淋巴细胞衰减子(BTLA)基因重组慢病毒载体,探讨BTLA基因过表达对小鼠脾T淋巴细胞增殖及活化的影响。方法:以小鼠脾脏组织总RNA为模板,逆转录为c DNA,通过PCR技术扩增BTLA基因,构建p WPTS-m BTLA慢病毒载体,磷酸钙法感染人胚肾上皮细胞株293T细胞。RT-PCR及Western blot法检测BTLA m RNA和BTLA蛋白表达,50%组织培养感梁剂量(TCID50)法检测重组慢病毒滴度。通过感染p WPTS-m BTLA及p WPTS-GFP慢病毒载体的293T细胞与小鼠脾脏T淋巴细胞混合培养,初步研究BTLA基因过表达对小鼠脾T淋巴细胞活化与增殖的影响。结果:成功构建小鼠p WPTS-m BTLA慢病毒载体,并制备高滴度病毒颗粒(1.3×108pfu/ml)。通过对比实验组与对照组小鼠脾T淋巴细胞的增殖结果 ,发现4 d及8 d T细胞的增殖效应均明显受抑制,差异具有统计学意义(P<0.05),且这种抑制作用在0~8 d内具有时间依赖性。结论:过表达BTLA基因的293T细胞与小鼠脾T淋巴细胞混合培养后对其增殖及活化有抑制作用,提示成功构建具有生物学效应的小鼠BTLA基因重组慢病毒载体。