融合防龋DNA疫苗pGLUA-P的构建及其细胞表达研究

目的 将变形链球菌（Streptococcus mutans)表面蛋白PAc编码A区和P区（A－P）的序列克隆到真核载体pGLU中，构建出GTF－PAc融合防龋DNA疫苗，并检测其在原核细胞和真核细胞中的表达。方法 将pCIA-P质粒中A－P片段序列与pGLU质粒连接，构建出GTF－PAc融合防龋DNA疫苗pGLUA-P。将pGLUA-P转化大肠杆菌BL21（DE3），以SDS－PAGE电泳鉴定目的蛋白GLUA－P的表达。通过脂质体将pGLUA-P转染大鼠原代肌母细胞，以免疫组织化学检测GLUA－P的表达。结果 GTF－PAc融合防龋DNA疫苗pGLUA-P经酶切分析证实携带GLU和A－P片段。pGLUA-P转化的大肠杆菌BL21（DE3）经IPTG诱导能够表达完整的融合蛋白。pGLUA-P转染的大鼠原代肌母细胞中可检测到融合蛋白的表达。结论 成功地构建了融合防龋DNA疫苗pGLUA-P，所携带的基因序列正确，能够在原核和真核细胞中表达正确的融合蛋白。     

侵袭性牙周炎患者血清抗牙龈卟啉菌表面抗原抗体滴度和亲和力的研究

临床上通过检测抗牙龈卟啉菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)表面抗原脂多糖(lispopolysaccharide，LPS)的血清抗体滴度和亲和力来评估体液免疫反应在侵袭性牙周炎(aggressive periodontilis，AgP)中抵御Pg的作用。研究表明，在评估体液免疫反应在抵御牙周致病菌的作用时，抗体滴度更有价值。然而，抗体水平和亲和力之间的关系目前尚存有争议。此研究旨在探讨AgP患者血清中抗Pg表面抗原的IgG抗体的滴度和抗体亲和力之间的关系。     

弱阳性HBsAg的ELISA假阴性原因分析

ＥＬＩＳＡ检测肝炎病毒是目前最常见方法之一。但影响因素也较多 ,特别是低浓度样本易导致假阴性。本文通过加样时间、试剂平衡时间和溶血程度方面进行实验 ,以进一步探讨低浓度ＨＢｓＡｇ的干扰因素。1　试剂上海科华生产的ＨＢｓＡｇ试剂盒 ,卫生部临检中心提供的低值ＨＢｓＡｇ质控品。2　方法和结果方法 1是用 1ｎｇ/ｍｌＨＢｓＡｇ作样本 ,分别在 2 5℃加入反应板后放置 0ｍｉｎ、15ｍｉｎ、30ｍｉｎ、45ｍｉｎ和 6 0ｍｉｎ ,后按说明书操作。结果Ａ值分别为 0 .132、0 .148、0 .16 2、0 .188、0 .191,立即加样与 30ｍｉｎ以上比较差…     

一种国产HBsAg确认试剂的临床应用评价

Objective To carry out the clinical validation of a domestic HBsAg kit to evaluate its application value. Methods 543 serum samples with HBsAg ELISA values of S/CO ≥ 0. 7 were tested by HBsAg confirmatory test. Specific anti-HBs reagent and control reagent were added separately into duplicate wells of HBsAg ELISA plate, in which test sample was also added. After incubation at 37℃, HBsAg was detected by routine ELISA, and the inhibition rate was calculated using absorbanee (A) result of anti-HBs reagent well and control reagent well according to the provided formula. The sample was confirmed as HBsAg positive when the inhibition rate was≥50%. For HBsAg weakly positive samples, "prolonged confirmatory test" (conjugate reaction time was prolonged to 120 rain) was applied to increase the sensitivity. 39 samples were randomized selected for testing and comparison with Abbott Murex confirmatory test. Results 543 serum samples in total were tested by the confirmatory test. Among the 504 cases which showed positive reaction in screening HBsAg ELISA, 89 ( 17. 7% ) were confirmed as negative. According to their S/CO value of the screening HBsAg test, the ratio of negative cases / tested eases in the group were:S/CO≤<5.0, 87/143 (60. 8% ) ;5.0 < S/CO ≤ 10. 0,0/25 (0) ;10. 0 < S/CO ≤ 15.0, 1/21 (4. 8% ) ;15.0 < S/CO ≤ 20. 0, 1/23 (4. 4% ) ;S/CO 20. 0, 0/292(0). Among 39 cases with negative HBsAg (0. ≤相似文献   

慢性乙型肝炎血清HBcAg与肝细胞内HBsAg、HBcAg表达的关系及临床意义

【目的】探讨慢性乙型肝炎患者血清HBcAg与肝细胞内HBsAg、HBcAg表达的关系及临床意义。【方法】血清中HBcAg检测方法系RIA法。同时行肝组织活检，对肝组织进行炎症活动度分级（G）和纤维化程度分期（S），并采用免疫组织化学技术观察肝细胞内HBsAg、HBcAg表达。【结果】437例患者血清HBcAg阳性率为86．72％（379／437），肝细胞内HBsAg和HBcAg阳性表达率分别为93．82％（410／437）和65．45％（286／437）。血清HBcAg／抗-HBc（-／＋）分别与HBcAg／抗-HBc（＋／＋）和HBcAg／抗-HBc（-／-）组比较，肝细胞内HBcAg阳性表达率分别为52％（26／50）、66．5％（252／379）、100％（8／8），经比较差异有显著性。HBcAg／抗-HBc（＋／＋）、HBcAg／抗-HBc（-／＋）、HBcAg／抗-HBc（-／-）组肝细胞内HBsAg阳性表达率分别为94．2％（357／379）、90％（45／50）和100％（8／8）。在G1、G2，G3和G4组中血清HBcAg阳性率分别为75．4％（52／69），83．2％（119／143）、91．3％（136／149）和94．7％（357／379），G1、G2分别与G3、G4组比较差异有显著性（P〈0．05-0．005）。在S1、S2，S3和S4组中血清HBcAg阳性率分别为76．2％、87．3％、93．6％和90．0％，S1与S2、S3、S4组比较差异有显著性（P〈0．025-0．005）。【结论】结果提示，HBcAg／抗-HBc（-／＋）组肝细胞内HBsAg、HBcAg表达阳性率低。随着HBcAg阳性率的增加，肝脏的炎症和纤维化程度均加重。血清中HBcAg与肝细胞内HBsAg、HBcAg的表达，与肝脏的炎症和纤维化程度相关，可作为抗病毒治疗期间观察血清转换的一个指标。     

乙型肝炎病毒S基因在毕赤酵母中的表达及在乙型肝炎病毒表面抗体检测中的应用

目的　构建含有乙型肝炎病毒S基因的表达载体 ,在毕赤酵母中表达出高免疫反应性的重组乙型肝炎表面抗原 (HBsAg)S蛋白 ,用以制备乙型肝炎表面抗体 (HBsAb)酶免试剂盒。 方法采用聚合酶链反应从含乙型肝炎病毒全基因序列 (adw)的质粒PHBV1中扩增出S基因 ,并将其插入pPICZB质粒。携带有S片段的pPICZB质粒转化毕赤酵母菌株KM71H ,甲醇诱导重组酵母细胞表达S蛋白。表达产物包被聚丙乙烯反应板 ,用酶联免疫吸附实验 (ELISA)检测HBsAb。结果　酶切电泳及DNA测序证实乙型肝炎病毒S基因已正确克隆到表达载体中 ;聚丙烯酰胺凝胶电泳显示HBsAg在毕赤酵母中表达 ;表达量约占总蛋白的 2 5 %～ 35 %。表达产物用ELISA测定效价达 1∶2 5 6 0 0 ;Westernblot显示与正常人血清无交叉反应 ;用纯化产物作为包被抗原对卫生部临床检验中心HBsAb质控物及血清标本进行检测 ,灵敏度达 10mIu/ml,特异性达 10 0 % ,重复性及线性良好 ,与国产商品试剂检测结果一致。结论　毕赤酵母表达系统高效表达出具有良好免疫反应性和特异性的HBsAg,可用于基因工程原材料的HBsAb酶免试剂盒的研制     

溶血标本对ELISA法检测HBsAg结果的影响及消除对策

ELISA法仍然是国内检测HBsAg的常用方法之一，但实验操作中各个环节对实验结果影响较大，特别是以辣根过氧化物酶（HRP）为标记的酶结合物的试剂检测HBsAg时，溶血标本可导致假阳性结果，从而影响临床诊断和治疗，给患者带来不必要的经济损失和精神负担。本组通过对大批量标本进行HBsAg的筛查也同样发现溶血标本对检测结果的影响较大，特别是对弱阳性结果影响更为明显。同时，其他因素（如采血过程、洗板不干净等）也可出现假阳性。通过对弱阳性结果标本的重新测试，探讨标本质量对ELISA结果的影响及消除假阳性的对策。     

血清中HBsAg浓度差异在乙型肝炎标志物模式分析中价值

目的分析不同浓度HBsAg血清中乙型肝炎标志物表现模式,以揭示其在人群中的分布特征。方法采用ELISA法与微粒子酶免疫分析技术(microparticle enzyme immunoassay,MEIA)测定5987例非肝炎流行区住院及门诊患者血清中HBsAg及其表面抗体(抗HBs)、乙肝e抗原及e抗体(HBeAg、抗HBe)和乙肝病毒核心抗体(抗HBc);根据定值参比血清和样本HBsAg荧光速率值/阴性对照荧光速率值之比(S/N值),再结合中和确证试验结果来确定HBsAg浓度,同时分析乙肝病毒血清学标志物模式;对低浓度(HBsAg≤1μg/L)再用PCR-ELISA法定量测定HBV DNA。结果:共检出HBsAg阳性784例,HBsAg浓度在5μg/L以上有636例,占HBsAg阳性81.1%;HBsAg浓度在2~5μg/L的有47例(5.99%);1~2μg/L的有69例(8.80%);1μg/L以下的有32例(4.08%)。尤其高浓度(HBsAg>5μg/L)和低浓度(HBsAg≤1μg/L)在人群中分布率分别为10.62%和0.53%;而中等浓度(1μg/L相似文献   

乙型肝炎病毒表面抗原确认试验方法的建立

目的 建立适用于国产酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂测定为乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）阳性样本的确认试验方法。方法 以特异性抗-HBs中和样本中的HBsAg并设立加对照液的对照孔，然后按常规方法检测样本中HBsAg含量（吸光度表示），按公式求得加抗-HBs孔的抑制率，如抑制率≥50％即表示该样本被确认为HBsAg阳性。结果 确定以混合抗-HBs阳性人血清为特异性中和抗体，选定确认试验常规操作步骤。对109份HBsAg阳性样本用确认试剂进行测定，结果均被确认。对4份乙型肝炎5项血清标志阴性的样本进行确认试验，结果均为HBsAg阴性。对17份HBsAg阳性血清用本法与Murex HBsAg确认试剂作比对试验，二者结果一致，17份HBsAg阳性者均被确认。结论 本研究建立的HBsAg确认试验方法和试剂适用于对HBsAg阳性样本进行确认，填补国内确认试剂缺如的空白。经进一步临床试验后，值得推广应用。     

脐血与外周血树突状细胞及细胞组成的比较

目的分析脐血与外周血的细胞组成情况及二者树突状细胞含量变化,探索获得树突状细胞的来源及脐血再利用的可能性。方法正常成人外周血9例,脐血12例,分离单个核细胞。应用流式细胞仪,使用CD4、CD8、CD19、CD34、CD38、CD83、CD1a、CD11c、和CDw123单克隆抗体,测定正常成人外周血和脐血细胞的细胞表面抗原变化及树突状细胞情况。结果正常成人外周血CD4 细胞占35.36%、CD8 细胞23.44%、CD19 细胞5.07%、CD38 细胞5.07%,CD34 造血干细胞数为0.02×105/ml、树突状细胞CD1a 细胞为0.01×105/ml、CD11c 细胞为4.32×105/ml、CD83 细胞为1.31×105/ml、CDw123 细胞1.41×105/ml。脐血单个核细胞中CD4 细胞占33.43%、CD8 细胞18.9%、CD19 细胞5.98%、CD38 细胞25.04%,而CD34 造血干细胞数为0.22×105/ml、树突状细胞CD1a 细胞0.27×105/ml、CD11c 细胞为5.87×105/ml、CD83 细胞为1.94×105/ml、CDw123 细胞为2.73×105/ml。结论脐血与正常成人外周血都含有一定量的造血干细胞和树突状细胞,脐血的造血干细胞和树突状细胞含量明显多于外周血,这些树突状细胞作为抗原提呈细胞在肿瘤免疫治疗上将起到重要作用。