大鼠转化生长因子β1基因转染成骨细胞后的表达

背景：将生物材料复合细胞因子基因，或复合转入细胞因子基因的细胞植入骨缺损处可以促进骨修复。目的：观察将大鼠转化生长因子β1基因转染成骨细胞后进行骨缺损基因治疗的可行性。设计：对照观察实验。单位：华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科。对象：新生SD大鼠5只，雌雄不限。方法：实验于2000—02／09在华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科实验室完成。通过脂质体介导将转化生长因子β1基因导人大鼠成骨细胞，并以质粒pcDNA，转染细胞作为对照。转染24h后通过链霉亲和素-生物素化过氧化物酶复合物法和原位杂交法检测目的基因瞬时表达的情况。采用G418筛选转染细胞2周，获得阳性细胞克隆，用链霉亲和素-生物素化过氧化物酶复合物法检测转染细胞稳定表达转化生长因子β1的情况。主要观察指标：链霉亲和素-生物素化过氧化物酶复合物法和原位杂交法检测转染细胞基因表达情况。结果：①pcDNA3-TGF-β1转染成骨细胞瞬时表达组化检测和原位杂交检测结果：24h转染成骨细胞胞浆中充满染色的棕黄色颗粒，对照组空载体转染细胞腧浆中刚没有棕黄倘．颗粒．说明转基因细胞中转化毕长因子β1 mRNA明显增高。②G418筛选转基因细胞组化检测：G418筛选2周后的转染细胞仍然有较高的转化生长因子β表达。结论：利用基因转染技术可使成骨细胞瞬时、高效表达细胞因子，转染后瞬时和筛选2周后，均呈现转化生长因子β1基因转染成骨细胞后稳定的高表达，说明采用细胞因子基因转染成骨细胞进行骨缺损的基因治疗具有可行性。     

双侧全髋关节置换一期完成与术后关节功能同步恢复的探讨

目的探讨同时完成双侧全髋关节置换治疗双髋病变的临床效果与术后关节功能同步恢复等问题。方法31例双髋关节病变患者在全麻下行后外侧切口入路,同期置换全髋关节,采用进口全髋26例,国产5例,骨水泥型14例,非骨水泥型13例,混合型4例,随访6～26个月。结果所有患者双全髋关节一期置换手术顺利,无感染及其他并发症,手术时间相对较长,但比分次完成费用明显降低。术后关节功能同步恢复好,且时间短,双下肢肢体均等长。结论有条件的医院和技术操作熟练的医师,选择合适的病例,一期完成双髋关节置换术,具有诸多优点。     

单启动子双表达载体pIRES-p14ARF-p53的构建及对骨肉瘤细胞增殖的抑制

背景：以往的研究表明，ADp14ARF转染p53阳性的肿瘤细胞系，可以发现明显的细胞增殖受阻现象。而转染p53阴性的肿瘤细胞系，尽管也可见肿瘤细胞增殖受阻，但在程度上明显轻于前者。同时转染p14ARF和p53两种基因，既增强p53表达又加强p53积累，能否更易促进肿瘤细胞凋亡？目的：利用基因工程技术构建双质粒表达载体pIRES-p14ARF-p53，并观察其对骨肉瘤细胞增殖生长的抑制作用。设计：随机对照观察。单位：华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科。材料：实验于2005—01／2006—10于华中科技大学同济医学院基础医学院免疫教研室公共实验平台完成。人骨肉瘤MG-63细胞有华中科技大学同济医学院免疫教研室细胞室提供。含p53全长基因序列的质粒pIRES-p53和pIRES载体均购自武汉晶赛生物公司。方法：利用基因工程技术，将从培养的正常人肝细胞系L02细胞中扩增出的p14cDNA（0．5kb）亚克隆至pIRES载体中，通过PCR、限制性内切酶酶切鉴定重组质粒pIRES-p14ARF-p53。通过脂质体介导转染入骨肉瘤MG-63细胞中，并筛选出阳性克隆，将细胞分为3组：空白对照组（MG-63细胞），空载体对照组（稳定转染pIRES-neo细胞），p14ARF-p53组（稳定转染pIRES-p14ARF-p53细胞）。①采用流式细胞仪测定转染前后瘤细胞DNA含量和细胞周期。②逆转录PCR（RT-PCR）和Westem bolt对稳定转染后的瘤细胞p53、p14ARF蛋白的表达进行定性和半定量检测。③采用噻唑蓝比色法与细胞生长曲线观察细胞增殖情况。主要观察指标：①骨肉瘤细胞DNA含量和细胞周期。②瘤细胞p53、p14ARF蛋白的表达。③细胞增殖情况。结果：成功构建出双质粒表达载体pIRES-p14ARF-p53。①骨肉瘤细胞DNA含量和细胞周期：流式细胞仪检测发现转染后的瘤细胞多停滞于G1期。②蛋白表达检测结果：RT-PCR与Western blot检测证实p14ARF、p53基因在靶细胞mRNA和蛋白水平分别有独立表达。③细胞生长情况：转染MG-63后24，48，72，96h瘤细胞生长抑制率分别为33．43％、69．37％、66．19％、75．26％，与空载体对照组差异显著（P〈0．01）。结论：野生型p53和p14ARF可协同抑制骨肉瘤细胞的增殖促进瘤细胞的凋亡。     

Boston矫形器治疗青少年特发性脊柱侧凸的疗效分析

目的研究Boston矫形器对青少年特发性脊柱侧凸(AIS)的临床治疗效果。方法选择1997年3月至2002年12月使用Boston矫形器治疗并得到随访的AIS患者108例,观察并比较患者治疗前、后的Cobb角、顶椎偏离中线距离(AVT)、顶椎旋转度(AVR)、躯干位移(TS)以及肺活量(VC)、第1秒用力呼气容积占用力肺活量的百分比(FEV1／FVC)、每分钟最大通气量(MVV)、残气量(RV)等指标,分析并评价Boston矫形器的疗效。结果矫形器治疗前,脊柱侧凸的Cobb角为(38．2±10．8)°,矫形器治疗2年后Cobb角平均为(24．4±8．9)°,治疗前、后比较差异有统计学意义(P<0．01),矫正率为36．1％。矫形器治疗后, AVT、AVR和TS与治疗前比较,有显著改善(P<0．01);而肺功能各项指标(包括VC、FEV1／FVC、MVV和RV)的正常率并无明显改变(P>0．05)。Risser。征Ⅰ度(包括0度)患者矫正率分别与Risser征Ⅱ度、Ⅲ度患者比较,差异均有统计学意义(P<0．05)。除3例患者因出现侧凸进展改行手术矫形外,其他患者侧凸畸形均得到显著改善,肺功能无明显损害。结论Boston矫形器对AIS的临床治疗有效,Risser征可以作为预测AIS矫形器矫形效果的指标之一。     

温敏凝胶制备及其在体内的生物相容性评价

学术背景:凝胶材料在体温条件下能以凝胶形式稳定存在,是其作为医学植入物的必备条件,故需要将温敏型凝胶的低临界溶解温度调节到超过人体体温的水平.目的:制备低临界溶解温度超过37 ℃的温敏凝胶材料聚-(N-异丙基丙稀酰胺/N-羟甲基丙烯酰胺) P(NIPAAm-co-NHMPA),并初步评价其作为医学植入物的安全性.设计:随机、非盲法、分组对照动物实验.单位:华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科.材料:实验于2007-01/10在华中科技大学同济医学院附属协和医院中心实验室、武汉大学化学系医用高分子材料教育部重点实验室完成.NIPAAm和NHMPA单体购自Aldrich公司、交联剂N, N'-亚甲基双丙烯酰胺(MBAAm)购自Fluka公司、促进剂过硫酸铵(APS)和四甲基乙二胺(TEMED)购自Sigma公司.方法:①温敏凝胶的制备:以APS和TEMED为氧化还原引发体系,MBAAm为交联剂制备P(NIPAAm-co-NHMPA),反应体系中添加一定质量分数的NHMP,溶涨率法测定低临界溶解温度.②安全性评价:进行过敏实验、急性全身毒性实验、遗传毒性实验、植入实验等一系列体内生物相容性动物实验以评估植入物的安全性.主要观察指标:过敏实验记录激发部位红斑水肿;急性全身中毒实验观察记录注射后4,24,48和72 h动物的一般状态;遗传毒性实验于注射6 h后在显微镜下计数鼠骨髓多染红细胞微核;植入实验将制得的切片进行光镜下观察.结果:①合成的凝胶材料符合预期的温敏特性要求,低临界溶解温度为38 ℃.②在过敏实验皮内注射浸提液及生理盐水组皮肤无红斑水肿;急性全身毒性实验显示腹腔注射浸提液及生理盐水组无毒性表现;遗传毒性实验中实验组和阴性对照组鼠骨髓多染红细胞的微核出现率无差异;体内植入实验表明材料周围炎性反应轻微而局限.结论:温敏凝胶P(NIPAAm-co-NHMPA)的生物相容性良好,是一种有潜力的医学植入物.     

国产超高分子聚乳酸可吸收螺钉治疗髌骨骨折术后下肢功能评定半年随访

目的探讨国产超高分子聚乳酸可吸收螺钉治疗髌骨骨折的效果及安全性.方法病例来源于2002/2003在华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科住院的行手术切开复位超高分子聚乳酸可吸收螺钉内固定的髌骨骨折患者28例.术后第2～3天患肢置于下肢持续被动器上做持续被动屈伸功能锻炼,第5天开始进行床上练习患肢主动屈膝活动;1周后持拐下地患肢不负重行走并逐渐加大屈膝活动,术后6周可逐渐脱拐行走.术后1,2,4,12和24周进行定期随访,评定膝关节功能,观察骨折愈合时间.结果全部病例平均随访11.7(6～20)个月.①远期膝关节功能评定术后6个月对患者关节功能评定结果为优17例,良9例,可2例,差0例.优良率93%.②骨折愈合时间随访3,4个月时,患者无畸形及延迟愈合发生;股四头肌萎缩6例,术后6～12个月恢复4例,12～18个月恢复2例;无一例患者发生螺钉松动或移位.结论超高分子聚乳酸可吸收螺钉具有良好的生物相容性及有效性;在早期能保证骨折端固定所需有强度,能达到安全、稳固牢靠的要求,且随着骨折的愈合,强度逐渐降低,和骨折愈合同步进行,不产生应力遮挡,有利于恢复骨的正常生物学结构和功能;固定强度维持时间长达6个月;最终能被人体完全吸收并排除体外.用于治疗髌骨骨折,膝关节功能恢复好,安全可靠,是髌骨骨折的理想内固定物.     

功能锻炼与物理因子联合治疗对重症臀肌挛缩症患者术后疗效的影响

目前临床上一般认为，臀肌挛缩症多因臀部反复肌肉注射用苯甲醇稀释的青霉素注射液而诱发，由于患者为瘢痕体质或体内缺乏某种免疫因子，导致其臀部肌肉挛缩而出现下肢功能及步态异常等一系列临床症状；当患者臀中、小肌及髋关节囊受到侵犯时，其症状、体征较为严重(即重症臀肌挛缩症)。近年来。关于臀肌挛缩症病因、诊断及治疗方面已有较多的报     

中华长城椎弓根螺钉系统对胸腰椎骨折后脊髓功能的恢复作用

目的 观察中华长城椎弓根螺钉系统(China Great-Wall Spinal System)在胸腰椎爆裂性骨折中的应用效果，以探讨其对骨折后脊髓功能的恢复作用。方法 采用中华长城椎弓根螺钉系统治疗胸腰椎爆裂性骨折18例，并用X线检查评估Cobb角、椎体成角、上下终板成角椎体前缘高度。结果 术后及随访期同拍X片测定Cobb角(由术前平均7．8&;#176;到术后平均1．3&;#176;)、椎体成角(由术前平均-17．2&;#176;到术后平均-3．2&;#176;)、上下终板成角(由术前平均-15．6&;#176;到术后平均3．9&;#176;)、椎体前缘高度与正常高度的比值均明显改善，随访期间测量以上结果与术后相比无明显变化。最后一次随访按Frankel分级评估，4例A级Frankel分级无改变，其余均改善1～2级。3例C级和4例D级恢复到E级，2例B级和3例C级恢复到D级。1例B级恢复到C级，1例A级恢复到B级，4例A级Frankel分级无改变，但感觉平面有所下降。结论 中华长城椎弓根螺钉系统(CGWS)能有效减轻胸腰骨折后的脊椎移位，促进脊髓功能的恢复。     

前后联合入路治疗髋臼骨折并中心性脱位

目的探讨前后联合入路治疗髋臼骨折并中心性脱位的疗效。方法对2008年6月～2011年12月采用前后联合入路治疗的24例髋臼骨折并中心性脱位进行回顾性分析。均采用切开复位重建钢板螺钉内固定术。结果所有患者获得6～36个月(平均15个月)随访。临床结果按照Matta标准:解剖复位15例,满意复位9例。髋关节功能采用Matta改良的d’Aubigne-Postel评分标准评定:优7例,良14例,可3例,优良率87.5%。创伤性关节炎6例,异位骨化4例。医源性股外侧皮神经损伤3例,均为不完全性损伤,术后1个月左右完全恢复。结论手术治疗髋臼骨折并中心性脱位时,采用前后联合入路显露较好,方便骨折复位及固定,并发症较少,可获得满意的临床疗效。