经皮穿针和逆行髓内针固定治疗肱骨近端骨折

目的探讨经皮穿针和逆行髓内针固定治疗肱骨近端骨折的临床效果。方法1999年6月-2003年12月对29例肱骨近端骨折分别采用经皮穿针内固定21例，逆行髓内针固定5例，经皮穿针和逆行髓内针固定3例。结果术后无针眼感染、血管损伤、医源性桡神经损伤、螺纹针折断，未出现肱骨头坏死的征象。1例行经皮穿针内固定出现腋神经损伤症状，经治疗2个月后症状消失。29例术后8—12周骨折全部骨性愈合，无延迟愈合。术后3个月参照Neer肩关节百分评分标准，优10例，良15例，可3例，差1例，优良率为86．2％（25／29）。结论经皮穿针和逆行髓内针固定治疗效果满意，并发症发生率低，是治疗肱骨近端骨折的理想办法。     

生长分化因子5在小鼠肢体骨骼发育中的表达规律

目的:检测生长分化因子5在小鼠肢芽组织的表达,分析该基因在肢体骨骼发育中的表达变化,从而进一步认识生长分化因子5基因在肢体发育过程中的作用。方法:实验于2005-05/07在华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科实验室完成。选取清洁级2～3月龄昆明种小鼠30只,雌性20只,雄性10只,于每天下午6时按雌雄2∶1合笼,次日晨8时取出,查见阴道栓者定为孕期第0.5天。分别在胚胎11.5,12.5,13.5,14.5,15.5d颈椎脱臼处死孕鼠,无菌条件下分离出胚胎,解剖显微镜下用眼科剪取肢芽组织备用。分别采用反转录聚合酶链反应和Westernblotting免疫印迹法检测生长分化因子5在小鼠胚胎发育过程中肢芽组织mRNA和蛋白表达的变化。结果:①小鼠胚胎肢芽组织生长分化因子5mRNA的表达:孕11.5,12.5,13.5,14.5,15.5d胚胎肢芽组织均可见一条219bp的生长分化因子5特异扩增条带,其与β-actin吸光度的比值分别为0.521±0.023,1.210±0.014,1.221±0.008,0.556±0.014,0.510±0.019。孕12.5d和孕13.5d生长分化因子5mRNA的相对含量与孕11.5,14.5,15.5d相比有极显著性差异(P<0.01)。②小鼠胚胎肢芽组织生长分化因子5蛋白的表达规律:孕11.5,12.5,13.5,14.5,15.5d胚胎肢芽组织均观察到相对分子质量为13700的蛋白条带,其与β-actin蛋白吸光度的比值分别为0.589±0.021,1.103±0.124,1.112±0.041,0.601±0.015,0.552±0.006。孕12.5d和孕13.5d生长分化因子5mRNA的相对含量与孕11.5,14.5,15.5d相比有极显著性差异(P<0.01)。结论:生长分化因子5mRNA及其蛋白表达的变化趋势一致,在小鼠肢体骨骼发育早期阶段持续表达,孕12.5d和孕13.5d呈高表达,继而减弱。表明生长分化因子5是肢体骨骼发育早期的一个关键因子,在小鼠肢体骨骼发育和关节形成中具有重要作用。     

人BMP2及VEGF双基因共表达腺病毒穿梭质粒的构建及鉴定

目的 构建人骨形态发生蛋白2（BMP2）与血管内皮生长因子（VEGF）双基因腺病毒穿梭质粒。方法 对pCU-CAGGS-hVEGF165的目的基因亚克隆并引入新的酶切位点，定向连入腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV，将质粒pcDNA3．1-BMP2及pIRES酶切后，将BMP2和IRES片段定向连入pShuttle-CMV-hVEGF165，构建可同时表达两个目的基因重组质粒pShuttle-CMV-hBMP2-IRES-hVEGF165，进行酶切分析及序列测定。结果 酶切分析及核酸序列测定证实重组质粒构建正确。结论 成功构建了BMP2及VEGF双基因腺病毒穿梭质粒；为联合基因治疗骨缺损的研究奠定了基础。     

深静脉穿刺术在休克抢救中的作用

我院手术室2007年2月—2008年2月,对52例失血性休克患者的抢救中应用深静脉穿刺术。为休克患者迅速建立静脉输液通道,及时有效补充液体,提高了抢救成功率,现报告如下。     

Co-culture of mesenchymal stem cells with umbilical vein endothelial cells under hypoxic condition

By co-culturing humm mesenchymal stem cells (hMSCs) and human umbilical rein en-dothelial cells (HUVECs) under hypoxia and creating a microenvironment similar to that of trans-planted hMSCs for the treatment of avascular ni ANFH, the effect of hMSCs on survival, apoptosis, migration and angiogenesis of human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) under the hypoxic condition were investigated in vitro. hMSCs and HUVECs were cultured and identified in vitro. Three kinds of conditioned media, CdM-CdMNOR, CdM-CdMHYP and HUVEC-CdMHYP were pre-pared. HUVECs were cultured with these conditioned media under hypoxia. The survival rate, apop-tosis rate, migration and angiogenesis of HUVECs were respectively detected by CCK-8, flow cy-tometry, Transwell and tube formation assay. The content of SDF-1α, VEGF and IL-6 in CdM was determined by ELISA. Our results showed that hMSCs and HUVECs were cultured and identified successfully. Compared with MSC-CdMNOR and HUVEC-CdMHYP groups, the survival rate, migra-tion and angiogenesis of HUVECs in MSC-CdMHYP group were significantly increased while the apoptosis rate was declined (P<0.05). Moreover, the expression of SDF-1α, VEGF and IL-6 in MSC-CdMHYP group was up-regulated. Under hypoxia, the apoptosis of HUVECs was inhibited while survival, migration and angiogenesis were improved by co-culture of hMSCs and HUVECs. The underlying mechanism may be that hMSCs could secrete a number of cytokines and improve niche, which might be helpful in the treatment of femoral head necrosis.     

缝隙连接阻断剂1-庚醇对小鼠骨髓基质干细胞体软骨分化的影响

[目的]研究缝隙连接阻断剂1-庚醇对小鼠骨髓基质干细胞体外软骨分化的影响。[方法]体外培养小鼠骨髓基质干细胞(MSCs),贴壁细胞传代,取第3代细胞,以生长分化因子-5(GDF-5)(100ng/ml)和1-庚醇(2.5μmol/L)干预培养后,MTT法测定1-庚醇对小鼠骨髓基质干细胞增殖的影响,RT-PCR和免疫细胞化学法检测Ⅱ型胶原的表达,Westernblotting检测Cx43蛋白的表达,阿尔辛蓝(Alcian)染色蛋白多糖。[结果]MTT结果显示2.5μmol/L浓度1-庚醇对小鼠MSCs的增殖不产生影响,对细胞没有毒性抑制作用;RT-PCR和免疫细胞化学显示1-庚醇能够抑制Ⅱ型胶原mRNA和蛋白的表达;Alcian染色结果显示1-庚醇抑制分化细胞分泌蛋白多糖基质;Western blotting结果表明1-庚醇对Cx43蛋白的表达没有作用。[结论]GDF-5能够定向诱导小鼠骨髓基质干细胞向软骨方向分化,Cx43蛋白介导的缝隙连接细胞间通讯在GDF-5诱导软骨分化中发挥着很重要的作用。     

Clinical observation of particulate cancellous bone impaction grafting in combination with total hip arthroplasty for acetabular reconstruction

Objective： To investigate the effect of particulate cancellous bone impaction grafting in combination with total hip arthroplasty （THA） for acetabular reconstruction in patients with posttraumatic arthritis and bone loss after acetabular fractures.
Methods： Totally 15 consecutive cases with unilateral acetabular fracture were treated with bone impaction grafting in combination with THA in our department. There were 10 males and 5 females with mean age of 48.2 years （ranging from 36 to 73 years）. Eight cases had the fracture at left hips, 7 at right hips. The average age at injury was 28 years （ranging from 18 to 68 years）. The mean follow-up period was 4.3 years （ranging from 2 to 7 years）. Results： Compared with mean 42 points （ranging from 10 to 62） of the preoperative Harris score, the survival cases at the final follow-up had mean 84 points （ranging from 58 to 98）. One patient had mild pain in the hip. No revision of the acetabular or femoral component was undertaken during the follow-up. Normal rotational centre of most hips was recovered except 2 cases in which it was 0.8 mm higher than that in opposite side. All of them had a stable radiographic appearance. Progressive radiolucent lines were observed in Ⅰ,Ⅲ zones in 2 cases. One patient had a nonprogressive radiolucent line in zone Ⅲ. The cup prosthesis was obviously displaced （6 mm） in one patient, but had not been revised.
Conclusion： Particulate cancellous bone impaction grafting in combination with THA as a biological solution is an attractive procedure for acetabular reconstruction in patients with posttraumatic arthritis and bone loss after acetabular fracture, which can not only restore acetabular bone stock but also repair normal hip anatomy and its function.     

人骨形态发生蛋白2基因活化纳米骨浆的成骨能力

背景：纳米骨浆在骨缺损修复过程中仅起支架和骨传导作用,不具备骨诱导能力。目的：观察人骨形态发生蛋白2（human bone morphogenetic protein-2,hBMP-2）基因活化纳米骨浆的异位诱导成骨能力和修复骨缺损效果。时间及地点：实验于2006-06/2007-03在华中科技大学同济医学院分子生物中心实验室和协和医院骨科实验室完成。材料：将纳米骨浆与hBMP-2基因真核表达质粒相复合,形成hBMP-2基因局部释放系统。方法：实验一：昆明种小鼠24只右侧大腿后群肌袋注射纳米骨浆＋hBMP-2质粒作为实验侧,其中12只小鼠左侧大腿后群肌袋注射纳米骨浆＋空白质粒为对照侧1,另12只左侧注射纳米骨浆为对照侧2。实验二：新西兰白兔54只,其中6只作左桡骨中段骨缺损,不植入材料,为空白对照;另48只制成双侧桡骨中段15mm骨缺损模型,随机分成3组,缺损处分别植入hBMP-2＋纳米骨浆、空白质粒＋纳米骨浆、纳米骨。主要观察指标：实验一：采用放射学、分子生物学和组织形态学等方法检测成骨基因hBMP-2表达和诱导成骨效应。②实验二：取桡骨标本作影像学检查、组织学观察和生物力学检测。结果：实验一：小鼠术后2,4周实验侧有hBMP-2表达。实验侧术后2周出现大量软骨组织和呈岛状散在分布的骨组织,术后4周可见大量成骨组织,新生骨相互融合生长并形成较为成熟的板层骨和骨小梁结构;对照侧未见骨组织形成。实验侧碱性磷酸酶活性明显高于对照侧（P〈0.01）。实验二：术后12周空白对照组骨缺损无愈合,其余3组骨缺损均修复。植入hBMP-2＋纳米骨浆组的碱性磷酸酶水平、成骨速度及新生骨力学强度均明显优于植入空白质粒＋纳米骨浆或纳米骨组（P〈0.05）。结论：经组织学、影像学及生物力学的综合检测验证,纳米骨浆复合hBMP-2质粒后,具有一定的骨诱导作用,植入体内后成骨速度、质量及力学强度较单纯的纳米骨浆明显增强,能够有效修复骨缺损。     

人骨形态发生蛋白2与血管内皮生长因子165双基因真核表达质粒的构建及体外表达

目的：构建人骨形态发生蛋白2与血管内皮生长因子165双基因真核表达质粒。方法：实验于2005-03／2005—10在华中科技大学同济医学院公共实验平台完成。①通过聚合酶链反应对pcDNA3．1-BMP2及pUC-CAGGS-VEGF165的目的基因片段亚克隆并引入新的酶切位点，将其分别定向连人真核双表达载体pIPES，构建同时表达两个目的基因的双顺反子，通过聚合酶链反应、酶切分析及DNA序列测定鉴定重组质粒。②重组质粒经脂质体介导体外转染小鼠骨髓基质细胞，通过反转录-聚合酶链反应检测骨形态发生蛋白2及血管内皮生长因子165mRNA的表达。结果：①pIRES-BMP2-VEGF165双基因表达质粒的构建和鉴定：将重组质粒pIRES-BMP2-VEGF165分别作XhoⅠ／MluⅠ和Xba Ⅰ／NotⅠ双酶切，经10g／L琼脂糖凝胶电泳可见1．2kbp的人骨形成蛋白2条带和592bp的血管内皮生长因子165条带，酶切条带与聚合酶链反应产物电泳带处于相同位置。经聚合酶链反应、酶切分析及DNA序列测定证实，目的基因插入片段方向正确，DNA序列无突变。②骨形成蛋白2、血管内皮生长因子165mRNA的表达：以转染pIPES空质粒为阴性对照，48h后提取转染细胞的RNA分别用P1，P2和P3，P4作为引物进行反转录一聚合酶链反应。结果表明转染pIPES-BMP2-VEGF165的小鼠骨髓基质细胞扩增出1．2kbp及592bp两条带。证实该重组质粒能在体外同时表达骨形态发生蛋白2及血管内皮生长因子165 mRNA。结论：成功构建了可同时表达骨形态发生蛋白2及血管内皮生长因子165的双基因真核表达质粒，为进行联合基因治疗骨缺损的实验研究奠定了基础。     

全麻下可视化椎间孔镜技术治疗腰椎间盘突出症

[目的]探讨全麻下可视化椎间孔镜技术治疗腰椎间盘突出症的可行性及安全性。[方法] 2015年1月～2017年1月本科收治腰椎间盘突出症患者94例,均采用椎间孔镜技术进行治疗。其中,常规组30例,采用局麻、常规定位和椎间孔镜操作;可视化组64例,采用全麻,可视化定位与操作技术。评估患者的术中疼痛、手术时间、透视时间、住院时间、术后并发症及恢复情况。[结果]两组患者均顺利完成手术,两组均未出现脊髓及神经根损伤等并发症。两组在手术时间、伤口大小、术中出血量、住院天数的差异均无统计学意义(P0.05)。然而,常规组患者多数术中有不同程度的疼痛,而可视化组患者因全麻术中无疼痛,常规组术中射线曝露时间明显长于可视化组,差异有统计学意义[(10.12±3.24) s vs (1.06±0.18) s,P0.05]。两组患者平均随访6～12个月,末次随访时,两组的VAS和ODI均显著减少,与术前相比差异有统计学意义(P0.05),但末次随访时,两组间VAS和ODI的差异均无统计学意义(P0.05)。[结论]全麻下可视化椎间孔镜技术可显著减轻患者术中疼痛,减少术中X线透视量,提高患者围手术期舒适度。