日本血吸虫视黄酸X受体2全长cDNA的克隆及初步分析

目的克隆编码日本血吸虫视黄酸X受体2(SjRXR2)蛋白的全长cDNA,并对其进行初步研究。方法利用cDNA末端快速扩增技术(RACE)获得SjRXR2蛋白全长编码cDNA。利用生物信息学技术,对基因结构进行初步分析。利用实时荧光定量(Real time)PCR技术对该基因在日本血吸虫不同时期虫体中的转录情况进行分析。应用在线抗体表位预测软件获得SjRXR2配体结合区抗原性较强的一个多肽序列,合成该多肽片段,并免疫小鼠制备抗血清。利用Western blot技术分析该蛋白在日本血吸虫中的表达。结果采用RACE技术成功获得了SjRXR2蛋白全长编码cDNA,总长度为5 960bp,其完整开放阅读框为4 308 bp,编码1 435个氨基酸,预测分子量为159 kDa。生物信息学分析表明该基因编码的蛋白质序列具有核受体家族2的典型结构域特征,且与曼氏血吸虫RXR2有较高的相似性。Real time PCR分析表明,该基因在21、42 d龄日本血吸虫虫体内有较高的转录水平。Western blot分析表明,小鼠SjRXR2多肽免疫血清可特异性识别日本血吸虫虫体150 kDa蛋白。结论成功获得了编码SjRXR2蛋白的全长cDNA,并制备了针对该蛋白的特异性多克隆抗体,为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础。     

壳六糖治疗翼状胬肉的实验研究

目的 为翼状胬肉的治疗提供线索和新视野.方法 对翼状胬肉组织块培养,获得翼状胬肉上皮原代细胞(PECs).添加壳六糖后,通过Transwell检测壳六糖对翼状胬肉迁移的抑制效果.利用Real-Time PCR和Western印迹技术检测迁移相关基因MMP-9和TIMP-1的表达情况.结果 MMP-9主要在进展型的翼状胬肉上皮中表达.添加一定剂量的壳六糖,可以有效抑制翼状胬肉细胞的迁移.目标基因(MMP-9和TIMP-1)表达变化后,发现壳六糖可以抑制MMP-9,同时上调TIMP的表达.结论 壳六糖可能是通过打破MMP-9和TIMP-1之间的平衡抑制PECs的迁移,进而有效治疗翼状胬肉.     

肿瘤细胞特异启动子hTERT介导的靶向mdr1基因的RNAi用于逆转卵巢癌细胞MDR的研究

目的:探索应用肿瘤细胞特异启动子hTERT介导靶向肿瘤多药耐药基因mdr1的siRNA在卵巢肿瘤细胞特异表达并逆转MDR的可行性。方法:应用携带luc报告基因的报告质粒验证了hTERT启动子在卵巢肿瘤细胞株A2780中的转录活性,构建由hTERT启动子引导的靶向mdr1基因的siRNA表达载体phTERTsiMDR1B,并与携带mdr1基因靶序列的报告质粒进行共转染抑制实验,进一步将phTERT-siMDR1B表达载体与mdr1基因表达载体共转染A2780细胞,检测细胞中mdr1基因的mRNA与P-gp蛋白的表达水平。以具有耐紫杉醇表型的A2780细胞作为靶细胞进行耐药评价实验。结果:hTERT启动子在卵巢肿瘤细胞株A2780中具有良好的转录活性,而在正常人二倍体细胞株MRC-5中无转录活性;hTERT启动子介导的siMDR1B具有良好的抑制效果与特异性;hTERT启动子介导的siMDR1B可显著抑制细胞中mdr1基因的mRNA与P-gp蛋白的表达水平;转染了hTERT启动子介导的siMDR1B表达元件的细胞对紫杉醇的耐药程度显著降低。结论:hTERT启动子介导的靶向mdr1基因的RNAi用于逆转卵巢癌细胞MDR是可行的,本研究结果可为进一步开展卵巢肿瘤MDR逆转研究提供重要基础。     

吸毒者感染粪类圆线虫1例报告

本文报道了吸毒者感染粪类圆线虫1例，用肠虫清按常规治疗，治愈。     

鸡胚胎干细胞分离方法和培养体系的优化

背景：胚胎干细胞是从动物早期胚胎的内细胞团或原始生殖细胞分离出来的具有发育全能性的一种未分化的无限增殖细胞系。而鸡胚胎干细胞则是从X期鸡胚的胚盘分离而来。 目的：优化鸡胚胎干细胞分离方法和离体培养体系。 方法：采用滤纸纸环-发环的方法从X期鸡胚分离胚盘细胞,并采用STO细胞作为饲养层和大鼠肝细胞(BRL)条件培养基(CM)+细胞因子作为离体培养体系对分离的胚盘细胞进行培养。 结果与结论：滤纸纸环-发环法获得的完整胚盘率为75%~85%,克隆形成率约为50%。BRL-CM+饲养层培养体系,鸡胚胎干细胞可传至7代,而BRL-CM+饲养层+细胞因子培养体系,鸡胚胎干细胞可传至25代。分离到的鸡胚胎干细胞,经碱性磷酸酶染色、SSEA-1染色鉴定,表明鸡胚胎干细胞处于未分化状态。提示,实验不仅优化了鸡胚胎的分离方法,获得完整且杂质少的胚盘,而且进一步优化了鸡胚胎干细胞体外培养体系。     

pEGFP基因启动子区甲基化的梯度降落PCR定量检测法

目的改进亚硫酸氢钠测序法,并在CMV基因启动子甲基化检测中进行验证。方法提取pEGFP-C3质粒重组人肝癌细胞株HepG2 DNA,亚硫酸氢钠化学修饰,针对修饰后质粒基因CMV启动子序列设计特异引物并结合梯度降落PCR扩增,T-A载体克隆、测序,目标区域甲基化定量。结果 pEGFP-C3质粒基因约600bp的CMV启动子区甲基化水平可以精确定量,检测结果与标准品一致,重复测量结果稳定。结论改进后亚硫酸氢钠测序法能明显减少非特异性扩增,提高PCR效率,更适于基因甲基化状态的检测。     

3种线虫rDNA-ITS2-RFLP分析

目的爪哇根结线虫(Meloidogynejavanica)、鼠蛲虫(Enterobiussp·)和犬钩虫(Ancylostomacaninum)是来自不同种属的3种线虫,利用rDNA-ITS2-RFLP方法分析3种不同线虫种间多态性,为将来进一步发展以rDNA-ITS-RFLP分析为基础的土源性线虫的分子诊断方法建立基础。方法应用种间具有较为保守性的遗传区域-内转录间隔区,包括部分的5·8S序列、ITS2和28S的序列,以爪哇根结线虫、鼠蛲虫、犬钩虫3种不同种类线虫的基因组DNA为模板,设计特定引物用PCR扩增rDNA-ITS2+片段,用限制性内切酶HindⅢ、EcoRⅠ、EcoRⅤ、PstⅠ、KpnⅠ和SalⅠ酶切PCR扩增产物进行RFLP分析。结果PCR扩增爪哇根结线虫、鼠蛲虫、犬钩虫得到的ITS2+片段大小分别为1000bp、1800bp、1800bp,用6种限制性内切酶酶切PCR扩增产物,共产生12条酶切片段。用限制性内切酶HindⅢ/EcoRⅠ,PstⅠ/EcoRⅠ,HindⅢ/PstⅠ双酶切爪哇根结线虫、鼠蛲虫和犬钩虫的rDNA-ITS2+的PCR扩增产物,除爪哇根结线虫外,鼠蛲虫和犬钩虫均可得到2条以上的RFLP片段。结论爪哇根结线虫、鼠蛲虫、犬钩虫rDNA-ITS-RFLP分析显示这3种不同线虫rDNA-ITS2+存在着种间多样性,其中爪哇根结线虫为植物寄生性线虫,而鼠蛲虫和犬钩虫均为动物寄生性线虫,说明rDNA-ITS2+-RFLP方法可用来作为判断线虫种间多样性以及诊断和区分不同线虫的有用依据。     

湖南目平湖钉螺血吸虫病原生物控制资源调查及感染试验

目的虽然一种贝类可作数种吸虫的中间宿主,但在各吸虫种类都存在的一自然环境中,它们共同贝类宿主的一个体通常只携带一种吸虫幼虫期。作者利用这一规律在湖南汉寿目平湖血吸虫病区进行媒介钉螺的调查,查到钉螺感染有日本血吸虫(Schistosoma japonicum)、外睾类吸虫(Exorchis)、斜睾类吸虫(Plagiorchis)、侧殖类吸虫(Asymphylodora)和背孔类吸虫(Notocotylus)5种吸虫的幼虫期。其中对生物控制媒介钉螺有利用价值的外睾类吸虫,其钉螺感染率为3.298%(96/2911),终宿主鲶鱼(Parasilurus asoyus)的感染率为99.31%(434/437)、平均每尾鲶鱼的感染强度为115.4条。先用外睾类吸虫虫卵感染钉螺后再感染日本血吸虫毛蚴,切片观察不同时间的实验螺,后侵入的血吸虫幼虫,全部受损害不能发育。     

马齿苋活性成分体内外抗癌作用的初步筛选

目的 观察马齿苋活性成分对人肺腺癌细胞系(A-549 cell)、人喉表皮样癌细胞系(Hep-2 cell)、人宫颈癌细胞系(Hela cell)和人恶性胚胎横纹肌瘤细胞系(RD cell)生长的影响.方法 体外培养条件下用不同浓度的马齿苋活性成分处理4种癌细胞,通过溴化二甲噻唑二苯四氮唑(MTT)试验法测定癌细胞的增殖;同时处理S180荷瘤小鼠,观察荷瘤小鼠的体重、瘤重、死亡率和抑瘤率.结果 马齿苋生物碱对离体培养的A-549肺癌细胞、Hela细胞和Hep-2细胞的增殖均具有明显抑制作用,马齿苋多糖对Hela细胞有较强的抑制作用, 马齿苋脂肪酸对Hep-2细胞有一定的抑制作用,马齿苋黄酮对RD细胞有很强的抑制作用,并存在浓度剂量效应,高浓度抑制作用强.结论 马齿苋活性成分能选择性地杀伤癌细胞,有进一步研究的潜在价值.     

海藻真菌菌株 Aspergillus sp. AF044 中的两个新天然产物

目的：研究海藻真菌 Aspergillus sp. AF044 的化学成分。方法：通过色谱层析柱对提取物进行分离纯化, 并通过波谱解析（一维、二维的核磁共振谱和质谱）确定化合物的结构。结果：分离纯化得到3个化合物, 分别鉴定为6-hydroxy-5-methoxy- 3-methyl-3, 6-dihydro-2H-pyran-4-carboxylic acid （1）, 8, 9-dihydroxy-8, 9-deoxyaspyrone（2） and penicillic acid（3）。结论：化合物 1和 2 是首次发现的新化合物。化合物 3 在多种真菌菌株中分离得到。