牡蛎天然活性肽对人胃腺癌BGC-823细胞周期与基因表达的调控

目的 比较研究牡蛎天然活性肽（BPO）对人胃腺癌BGC-823细胞凋亡的生物学效应，并进一步探索其对胃癌细胞的作用机制。方法 采用酸抽提、凝胶柱层析等方法，从牡蛎体内分离提取到牡蛎天然活性多肽组分BPO-1，以姜黄素和HMBA处理组为平行对照，流式细胞仪检测细胞周期变化及以免疫细胞化学方法检测相关癌基因、抑癌基因表达变化。结果 BPO-1能有效抑制BGC-823细胞增殖活动，出现亚G1期细胞，细胞进入凋亡现象。BPO-1，姜黄素及其组合均能不同程度地上调BGC-823细胞p16，c-myc，Fas，p2^WAF1/CIP1蛋白表达，下调突变型p53，bcl-2蛋白表达。结论 BPO-1对胃癌细胞具有显著的诱导凋亡作用。其诱导癌细胞凋亡机制与其调节和干预bcl-2，c—myc等癌基因和p53，p16，p21^WAF1/CIP1等抑癌基因的表达有关。     

光动力治疗肝癌远期疗效及影响因素探讨

目的 分析光动力治疗肝癌的临床表现和远期疗效,探讨疗效影响因素和治疗适应证,为临床推广应用提供参考数据。方法 肝癌患者７０例,其中小肝癌２例,大肝癌６８例。均经Ｂ超、ＣＴ定位,甲胎蛋白（ＡＦＰ）定量,病理组织学确诊。治疗前４８ｈ,患者行血卟啉衍生物（ＨｐＤ）皮试,阴性者按每公拆体重５ｍｇ静脉给药。治疗时,在Ｂ超引导下,用１８Ｇ肝空针经皮穿刺将石英光纤引导入肝肿瘤内进行光辐照。激光器为氩离激光泵浦梁     

生物信息学在药物不良反应研究中的应用

目的 介绍生物信息学在药物不良反应(ADRs)机制研究中的应用.方法 通过对国内外相关文献的分析,并结合实际研究经验,对生物信息数据库及软件在ADRs事件监测,ADRs机制研究及新药的不良反应预测等方面的应用进行简明而系统论述.同时,对目前Internet上公众可获取的ADRs相关的生物信息学资源进行一定的汇总和归类.结果 事实表明,将生物信息学应用于ADRs机制研究和预测,是一种可行、前瞻和先进的尝试.结论 生物信息学在ADRs研究中的应用可以促进药物毒理学的发展,成为理性新药开发的重要组成,并标志着ADRs的研究进入了后基因组时代.     

忽地笑多糖的体外抗氧化和抑菌活性研究

目的:研究水溶性忽地笑多糖的体外抗氧化和抑菌活性。方法:采用体外化学体系研究忽地笑多糖对超氧自由基(O2-.)、羟自由基(.OH)、脂自由基(R.)和过氧化氢(H2O2)的清除作用及用琼脂扩散滤纸片法测定其抑菌活性。结果:抗氧化活性测定以Vc为对照,忽地笑多糖的抗氧化活性总体上弱于Vc,但对.OH和H2O2的清除活性与Vc相当。抑菌活性实验结果表明:忽地笑多糖对藤黄微球菌、短小芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌抑制活性较强。结论:忽地笑多糖具有良好的.OH和H2O2清除活性及对革兰氏阳性菌的抑制活性。     

阿尔茨海默病患者早老素-1基因第3外显子突变分析

目的 探讨阿尔茨海默病（AD）早老素-1（PS-1）基因第3外显子的突变特点。方法 采用聚合酶链反应及基因测序技术，对12例血管性痴呆（VD）患者、13例散发性阿尔茨海默病（SAD）患者的PS-1基因第3外显子片段进行扩增与序列分析。结果 VD患者PS-1基因第3外显子未发现突变，SAD患者中有1例PS-1基因第3外显子扩增片段发现1处缺失突变。结论 在SAD中存在PS-1基因第3外显子突变。     

简单异尖线虫L-样半胱氨酸蛋白酶基因的克隆与表达

目的克隆简单异尖线虫L-样半胱氨酸蛋白酶基因(AsCP)全长,研究其表达特性。方法根据GenBank中简单异尖线虫表达序列标签L-样半胱氨酸蛋白酶基因的部分信息,设计特异引物,用cDNA末端快速扩增技术扩增3′端部分,获得基因全长序列。根据基因全长序列设计引物,以简单异尖线虫总RNA为模板,RT-PCR扩增AsCP基因编码序列,产物经EcoRⅠ和SalⅠ双酶切,克隆至表达载体pET32а(+),转化大肠埃希菌BL21(DE3)株,以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达效果经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测。结果3′端扩增片段大小为1211bp,拼接完整后基因全长1462bp,编码411个氨基酸,与秀丽隐杆线虫的L-半胱氨酸蛋白酶相似性达36.4%;重组载体pET32a(+)-AsCP经EcoRⅠ和SalⅠ双酶切后有一条约1150bp的条带,测序结果显示重组载体构建成功。SDS-PAGE结果表明,重组蛋白相对分子质量约为Mr60000(含6个组氨酸的标签),与目的蛋白相符。用不同浓度的IPTG诱导对表达量的影响很小,1mmol/LIPTG诱导2h后表达量达到最高水平。结论成功克隆并表达了L-样半胱氨酸蛋白酶。     

抗人死亡受体5单链抗体的构建表达纯化及活性分析

目的构建、表达、纯化抗人死亡受体5(DR5)单链抗体,并检测其诱导肿瘤细胞凋亡的活性。方法采用RT-PCR获取鼠源性抗人DR5单克隆抗体重链和轻链可变区基因序列,以一柔性连接肽连接二者,转入表达载体,以大肠杆菌表达融合蛋白,亲和色谱纯化后用MTT实验和凋亡检测试剂盒检测其凋亡诱导活性。结果获得的序列经比对为抗体重链和轻链可变区基因,表达纯化后的重组蛋白具有接近完整抗体的肿瘤细胞凋亡诱导活性。结论抗人DR5 scFv可作为诱导肿瘤细胞凋亡的候选药物,为肿瘤免疫学研究提供材料。     

急性白血病MLL融合基因新检测方法的建立和应用

本研究旨在建立一种快速检测急性白血病中常见MLL融合基因的方法。针对10种最常见的MLL融合基因,首先通过检索文献及数据库,确定已报道的所有融合形式并据此设计引物和探针。其次,以构建的16个阳性质粒和阴性细胞系建立和优化多重实时PCR检测体系。最后,利用所收集的54份白血病标本对该体系进行临床评估,并对检出的阳性标本进行测序验证。结果:该体系可对所有阳性质粒进行有效检测,且灵敏度均可达10个拷贝。在54份标本中,检出MLL-AF4、MLL-AF9、MLL-AF10、MLL-ELL 4种类型的融合基因,对阳性标本进行测序,测序结果与检测结果一致。结论:本研究建立了一种筛查MLL融合基因的多重实时PCR方法,能够对发生频率约占MLL融合类型90%的10种融合基因进行检测。该体系具有快速、灵敏、特异、可靠的优点,将有助于临床上MLL融合基因阳性患者的诊断和管理。     

厦门市临床分离的466株结核分枝杆菌基因分型研究

目的 了解厦门市结核分枝杆菌基因类型分布及主要流行基因群情况,并建立分型数据库。方法 采用实时荧光PCR法对厦门市2013 - 2015年分离到的466株结核分枝杆菌临床分离株进行菌株确认,然后采用间隔区寡核苷酸分型方法（spoligotyping）对其进行基因分型。分型结果与SpolDB4数据库进行比对,并使用Bionumeric6.6.4软件进行基因聚类分析。结果 466株菌均为结核分枝杆菌,基因分型分成96种基因型别,62种数据库中有相应的SIT编号,34种为新的型别。97.64%(455/466)的菌构成了15个基因簇。466株菌属于7个基因家族及未定义家族,排在前三的分别为:Beijing（北京）家族60.09%（280/466）、T家族21.03%(98/466)、H家族5.58%(26/466)。结论 厦门市结核分枝杆菌基因型别呈现多样性,北京家族为主要的流行基因群。     

探针熔解曲线法快速检测结核分枝杆菌注射类二线药耐药突变

目的 评价结核分枝杆菌注射类二线药耐药突变检测试剂盒MeltPro TB/SL的分析性能以及临床性能。方法 首先使用企业参考品对试剂盒的突变检出能力进行考察,之后将野生型基因组DNA以10倍梯度稀释后考察试剂盒的最低检测限,使用野生型质粒以及含常见耐药突变的质粒以不同突变比例混合考察试剂盒检测不均一耐药样本的能力,并使用23株非结核分枝杆菌标准株考察试剂盒的分析特异性,最后使用241份临床分离株对试剂盒进行临床评价。结果 该试剂盒可以将9种耐药相关突变与1种野生型多态性与野生型进行区分。可以检测到低至5个拷贝的野生型基因组DNA。当突变比例为30%或更高时,试剂盒可以将其与野生型进行区分。23种非结核分枝杆菌的结果显示该试剂盒有良好的特异性。和比例法药敏试验进行对比,该试剂盒的临床灵敏度为卡那霉素90.0%(9/10),阿米卡星80.0%(8/10),卷曲霉素85.7%(6/7);特异性为卡那霉素98.8%(85/86),阿米卡星98.8%(85/86),卷曲霉素96.6%(86/89)。试剂盒检测结果与测序结果一致。结论 该试剂盒灵敏度高、特异性好,可以快速、准确地检测结核分枝杆菌注射类二线药常见的耐药突变,有望应用于临床。