联合应用SSH和cDNA表达谱芯片筛选肝星状细胞早期活化的相关基因

目的利用抑制消减杂交(suppressionsubtractivehybridization,SSH)和cDNA表达谱芯片筛选早期活化的肝星状细胞(hepaticstellatecell,HSC)和大鼠正常肝脏组织、轻度肝纤维化组织、重度肝纤维化组织中差异表达的基因。方法从SSH构建的大鼠轻度肝纤维化、重度肝纤维化2个差异cDNA文库中挑选1000条上调显著的基因,与正常大鼠4136条基因克隆制作成一张芯片,筛选早期活化的肝星状细胞相关基因。结果获得与HSC早期活化相关的上调基因有202条,下调基因有80条,其中血清和糖皮质激素调节蛋白激酶(serumandglucocorticoidsensitivekinase,SGK)在正常大鼠基因克隆和2周及8周SSH上调差异基因中均呈上调信号。结论联合应用SSH和cDNA表达谱芯片是筛选和鉴定不同样本中差异表达基因的快速、经济和有效的方法;SGK可能作为多种细胞信号传导通路和细胞磷酸化级联反应的一个功能性交汇点,参与了肝星状细胞的早期活化和信号传导。     

癌胚抗原DNA疫苗对大肠癌特异性细胞免疫的激活效果

目的检测以质粒pIRES为载体构建的带有全序列癌胚抗原(CEA)基因的核苷酸疫苗对机体特异性抗肿瘤免疫反应的激活效果。方法将CEA基因片段连接于真核表达质粒pIRES中,用肌肉注射方法接种核酸疫苗;检测CEA在小鼠肌肉组织中的表达情况及其对小鼠脾细胞CEA特异性细胞免疫反应的激活效果。结果小鼠经肌肉注射质粒后,免疫组化证实该核酸疫苗可在体内有效表达CEA;分子免疫检测显示注射后小鼠特异性淋巴细胞增值反应明显并且伴有自然杀伤细胞NK活性显著增高。结论实验所构建的核酸疫苗pIRESCEA可在体外及小鼠体内高效表达并表现出良好的细胞免疫原性。     

胰腺原发性破骨细胞样巨细胞瘤

目的对胰腺原发性破骨细胞样巨细胞瘤的诊断、治疗和预后进行探讨。方法收集长海医院15年间2115例胰腺手术患者中2例胰腺原发性破骨细胞样巨细胞瘤患者的临床资料,结合国内外报道46例资料进行分析。结果48例胰腺原发性破骨细胞样巨细胞瘤患者男女比例相当,平均年龄(60.5±13.4)岁。病灶位于胰头的27例,病灶平均直径为(9.2±4.7)cm,临床表现以上腹部隐痛及纳差为首发症状多见,生存期平均(24.5±12.3)个月。结论胰腺原发性破骨细胞样巨细胞瘤临床罕见,极易误诊;好发于胰头,多为低度恶性,根治性或姑息性手术切除是其有效的治疗方法。     

应用抑制消减杂交和cDNA表达谱芯片筛选肝星形细胞持续活化的相关基因

目的：利用抑制消减杂交（suppression subtractive hybridization,SSH）和cDNA表达谱芯片筛选早期活化的肝星状细胞与大鼠正常肝脏组织、轻度肝纤维化组织、重度肝纤维化组织中差异表达的基因.方法：从SSH构建的大鼠轻度和重度肝纤维化中两个差异cDNA文库中挑选1 000条上调显著的基因,与正常大鼠4 136条基因克隆制作成一张芯片,筛选持续期活化的肝星状细胞相关基因.结果：获得与HSC持续活化相关的上调基因633条,下调基因715条,其中血清和糖皮质激素调节蛋白激酶（SGK）在正常大鼠基因克隆和2、8周SSH上调差异基因中均呈上调信号.结论：联合应用SSH和cDNA表达谱芯片是筛选和鉴定不同样本中差异表达基因的快速、经济和有效方法;SGK可能作为多种细胞信号传导通路和细胞磷酸化级联反应的一个功能性交汇点,参与了肝星状细胞的早期活化和信号传导.     

门静脉高压症肝纤维化的研究现状

我国肝炎的发病率极高,肝炎后肝硬化所致的门静脉高压症也相当常见,门静脉高压症一旦并发消化道出血,死亡率高达50%,预后极差.而解决肝炎后肝硬化门静脉高压症的关键在于解决肝纤维化.长期以来,肝纤维化被认为是一种不可逆的病变,但近年来一些实验和临床实践证实,肝纤维化是可能被阻断和逆转的.因此,只要我们能阐明肝纤维化发生发展过程的具体机制,临床就有可能解决肝炎后肝硬化所致的门静脉高压症.复习文献,对肝纤维化研究的现状做一综述.     

抗肿瘤核酸疫苗免疫佐剂的研究进展（文献综述）

重点介绍抗肿瘤核酸疫苗中细胞因子，共刺激分子，趋化因子，微生物蛋白，脂质介导的佐剂效应。     

胰腺癌2061例外科手术的疗效与预后分析

目的 单中心研究胰腺癌的手术治疗效果及相关因素分析.方法 回顾性分析长海医院胰腺外科2000年1月至2011年12月诊治的2061例胰腺癌患者的诊治情况和临床数据,并对患者进行随访,随访截止至2012年9月30日.结果 所有收治的胰腺癌患者中,根治性手术治疗1657例(80.4％),姑息性手术治疗271例(13.1％),剖腹探查活检133例.根治性切除组1、3、5年生存率分别为60.3％、21.1％、10.9％,术后中位生存时间为19.6个月,其中180例患者术后存活超过5年;姑息性手术组术后中位生存时间为7.2个月.胰腺癌患者手术切除率和术后3年生存期分别由2000年至2003年的75.3％和12.4％提高到2008年至2009年的82.5％和22.1％.通过Cox回归模型发现,大血管侵犯、淋巴结转移、神经浸润以及肿瘤分化程度是胰腺癌预后的独立影响因素.结论 手术是目前胰腺癌治疗的唯一有效手段,随着手术方式和围手术期治疗的进步,胰腺癌的手术病死率和并发症发生率明显下降,术后生存率逐步提高.     

胰腺结核二例报告

1 临床资料例1,患者男性28岁,患者入院前4个月无明显诱因出现间歇性发热,因"间歇性发热、乏力4个月,伴消瘦"入院.患者4月前无明显诱因出现间歇性发热,夜间多见,伴出汗,无咳嗽、腹痛,未予重视,1月前出现腹胀、消瘦,于当地医院查CT示胰头癌待排,就诊于我院.     

DNA疫苗诱导的小鼠抗肿瘤特异性细胞免疫和体液免疫

目的:检测以双表达质粒pIRES为载体构建的带有全序列癌胚抗原(CEA)基因和IL-2基因的核苷酸疫苗对机体特异性抗肿瘤免疫反应的激活效果。方法:利用分子生物学技术,将CEA基因片段和IL-2基因片段连接于真核双表达质粒pIRES中,用肌内注射方法接种核酸疫苗;检测疫苗在小鼠肌肉组织中的表达情况及其对小鼠脾细胞CEA特异性细胞免疫和体液免疫反应的激活效果。结果:小鼠经肌内注射质粒后,免疫组化证实该核酸疫苗可在体内有效表达CEA分子;免疫检测显示注射后小鼠血清中出现抗CEA抗体,脾细胞IL-4分泌增强,特异性淋巴细胞增值反应明显并伴有自然杀伤细胞NK活性显著增高。结论:实验所构建的核酸疫苗pIRES-CEA,pIRES-IL-2,pIRES-IL-2等可在小鼠体内高效表达并表现出良好的免疫原性。     

应用抑制性消减杂交筛选大鼠不同程度肝纤维化的上调基因

目的 应用抑制消减杂交技术,筛选大鼠正常肝脏组织、轻度肝纤维化和重度肝纤维化组织中差异表达的上调基因.方法 利用抑制消减杂交技术,构建大鼠轻度肝纤维化和重度肝纤维化2个差异cDNA文库,并挑选36条上调显著的基因进行测序鉴定.结果 获得1 152个克隆,其中有1 036个含有插入片段.挑选32个克隆测序,与GenBank数据库进行初步比较,其中28条与已知基因的部分序列高度同源.结论 用抑制消减杂交技术成功构建了轻度肝纤维化和重度肝纤维化差异表达基因的cDNA削减文库,为进一步研究肝纤维化发生、发展和逆转的机制奠定了理论基础.