枸杞糖缀合物LbGp2的理化性质和活性研究

目的　分离纯化枸杞糖缀合物(LbGp2 )并研究其理化性质及活性。方法　采用柱色谱法得到LbGp2 ,经HPLC ,CE ,GC ,SEC及糖含量分析、元素分析和氨基酸分析等研究其理化性质,并用半体内法、形态学计数法和比色法等研究了Lbp2对腹腔巨噬细胞吞噬功能、淋巴细胞的转化以及对小鼠血清半数溶血等的影响。结果　LbGp2是均一组份,其分子量为6.8×10⁴,糖含量为90.7% ,糖组成为Ara Gal 3∶4(摩尔比) ,并含有18种天然氨基酸。免疫活性试验表明Lbp2具有显著的免疫增强作用。同时还具有很好的抗氧化作用。结论　LbGp2是均一的糖缀合物,有免疫活性和抗氧化活性     

沙眼衣原体T细胞抗原CT143原核表达、纯化及免疫活性鉴定

目的克隆沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis,Ct）T细胞抗原Ct143基因,表达并纯化该蛋白,检测其免疫活性。方法采用PCR技术从ct基因组中扩增Ct143基因,并构建pGEX-6p—Ct143原核表达质粒,转化E．coli XL1-Blue．IPTG诱导重组GST-CT143融合蛋白表达,经酶切后得到无GST标签的纯蛋白免疫Balb／c鼠,ELISA及Western-blot分析CT143蛋白免疫原性及免疫反应性。结果成功构建了pGEX-6p—CT143原核表达质粒,序列测定证实重组质粒插入片段与GenBank登陆的CtD型一致,长度为843bp;GST—CT143融合蛋白在E．coli中获得稳定高效表达;纯蛋白与佐剂混匀后肌肉免疫小鼠,ELISA检测免疫小鼠的血清效价为1：12800,Westem blot结果表明该蛋白与Ct泌尿生殖道感染病人混合血清中IgG结合,具有免疫反应性。结论成功克隆表达了CtT细胞抗原CT143,该抗原经纯化后具有良好的免疫原性及免疫反应性。     

99mTc-CL3-Bt的制备、质控及生物分布研究

目的 制备99mTc-CL3-Bt并对其质量控制、生物分布进行研究。方法 将单抗CL3生物素（Bt）化,以2-巯基乙醇（2-ME）还原后以直接法进行99mTc 标记。以细胞结合实验测定并比较99mTc-CL3-Bt 和99mTc-CL3的免疫活性;然后将两种标记物注入荷大肠癌裸鼠模型,6 h后处死裸鼠,计算并比较99mTc-CL3-Bt 和99mTc-CL3在体内的每克组织摄取分数（ID%/g）值和肿瘤ID%/g/其它组织ID%/g（T/NT）比值。结果99mTc-CL3-Bt和99mTc-CL3的细胞结合率分别为90%、94%;在瘤体的ID%/g值分别为（6.3±1.1）、（6.7±0.9）,二者无显著差异（t=0.6293, P>0.05）;瘤/血比值分别为（0.70±0.24）、（0.80±0.12）,二者亦无显著差异（t=0.8333, P>0.05）。结论 99mTc-CL3-Bt免疫活性高,能特异性被肿瘤摄取,可广泛用于临床放射免疫显像研究。     

简便高效分离细胞新型免疫磁珠制备

目的 采用碳二亚胺.N-基琥珀酰亚胺(EDC.NHS)方法在羧基磁珠表面偶联抗体.制备可高效分离细胞的免疫磁珠.方法 用EDC和NHS活化磁珠表面羧基,活化的羧基再与抗体上氨基进行反应,从而将抗体偶联于磁珠表面,获得免疫磁珠.使用高性能纳米粒度分析仪(HPPS)、二辛可酸(BCA)蛋白定量试剂盒、流式细胞仪、透射电镜(TEM)表征磁珠的粒径、磁珠表面联接的抗体量及其免疫活性.结果 HPPS检测磁珠平均水力学粒径为110nm;磁珠表面偶联52.4μg抗CD11a 抗体.mg磁珠.经磁分离后细胞的流式分析结果表明,CD11a 免疫磁珠可以有效分离髓系白血病细胞系(KG-1a)细胞,免疫磁珠均匀结合于细胞表面,且不影响细胞的活性.结论 成功制备可用于细咆分离且不影响分离后细胞活性的新型免疫磁珠.     

Two distinct insulin-related molecules in the guinea pig: immunological and biochemical characterization of insulin-like immunoactivity from extrapancreatic tissues of the guinea pig

Summary In this study we extracted guinea pig brain and testis with; the extract was adsorbed to and eluted from cartridges (the Sep-Pak C 18 procedure). We found this procedure superior for recovering crystalline insulin added to buffers or tissues, and for recovering endogenous insulin from plasma, but inferior for recovery of insulin from tissues. However, we did find rat/pork type-insulin in guinea pig brain and testis (5–50 pg/g wet weight tissue). Our results with the Sep-Pak C18 procedures were reproduced by four other laboratories (who found 4–60 pg/g wet weight of tissue) and similar findings were also obtained by an independent investigator. Thus, we conclude that extrapancreatic tissues of guinea pigs have a second type of insulin-related material that is more typical of other mammalian insulins, but that the amount recovered is dependent upon the extraction procedure utilized.     

高效高活性抗体片段的制备

为高效地制备高免疫活性的抗体片段，我们试用了两种新的蛋白酶消化鼠源性单克隆抗体（ｍＡｂ）。纯化的ＩｇＧ１抗肺癌ｍＡｂ经无花果蛋白酶和菠萝蛋白酶消化后，抗体片段的产率分别为最大理论产率的７７．６％和９８．８％。两种酶制备的片段为Ｆ（ａｂ′）２与Ｆａｂ混合物。经细胞结合实验、细胞结合抑制实验及动物模型的肿瘤定位显像证明，两种酶所得片段均具有良好的免疫活性，其中无花果蛋白酶所制片段的免疫活性较高，而菠萝蛋白酶所获酶解片段产率较高     

A Study of Immunoactivity of Retinal S—Antigen in Retinoblastoma

Purposese:To study retinal S-antigen expression in human retinoblastoma and as-sess if there is a correlation between S-antigen immunoactivity and degree of retinoblastoma cell differentiations.Methods:Ten cases of Chinese retinoblastoma parafin-embedded tissues were ap-plied for this thudy.A strain of monoclonal antibody,MabA9C6,Which defines an epitope in S-antigen retained in fixed-tissue sections,was used to study S-antigen expression in 10 cases of retinoblastomas.S-antigen was localized by the biotina-vidin indirect immunoperoxidase technique and purified MabA9C6 ascites fluid was used with1100dilution.The whole procedure could be finished within a few hours.Results:The S-antigen immunosctivity was observed in different pattterns:the“normal”photorecepto elements incorporated in 3cases of growing tumors;3of 4Fleurettes and E-W rosettes;and scattered tumor cells in50%of the cases.Conclusions:The result suggests that the expression of S-antigen in retinoblas-toma may be used to assess the degree of tumor differentiation as anothe tumor marker in retinoblastoma.     

Research progress on anti-tumor and immunity activity of CpG

CpG motifs are unmethylated oligodeoxynucleotides, and its core sequences are composed of unmethylated cytosine and unmethylated guanine. CpG motifs can induce the immune response by activating a variety of immune cells against diseases.The changes of CpG structure will increase the biological activities of CpG,and then enhance the therapeutic effect of CpG as the immuno adjuvant and the sensitizer of radiotherapy and chemotherapy in cancer treatment     

枸杞子糖缀合物的结构与生物活性研究

从宁夏枸杞中分离、纯化得到五个糖缀合物LbGp1～LbGp5。并对包括分子量、糖含量、单糖组成、氨基酸组成及元素分析等物理化学性质进行了研究。通过链霉蛋白酶E或β-消去反应等方法，将糖链从糖缀合物分子上解离下来，经凝胶柱层析或离子交换柱层析进行分离、纯化得到相应的糖链LbGp1-OL～LbGp5-OL。采用全水解和部分酸水解、甲基化分析、GC、GC／MS和^1H、^13C NMR等方法测定了这些糖链的重复单元结构。研究了这些糖缀合物及其糖链的免疫活性和免疫调节机理；实验结果表明它们均能提高正常小鼠的免疫功能，但作用方式不尽相同。其中LbGp1、LbGp4、LbGp5及LbGp1-OL、LbGp4-OL、LbGp5-OL，其主要的作用靶细胞为B-淋巴细胞，而LbGp2、LbGp3及LbGp2-OL、LbGp3-OL不但能作用于B-淋巴细胞，也能作用于T-淋巴细胞。实验结果还表明，糖链是调节免疫功能的主要成分，如LbGp3-OL的免疫活性要比LbGp3强3倍。同时以LbGp4和LbGp4-OL为目标化合物，进行了免疫作用机理的进一步研究，通过对裸鼠脾细胞、纯化B-淋巴细胞增殖的影响及目标化合物与受体作用位点的结合，进一步证明了LbGp4及LbGp4-OL直接作用的靶细胞是B-淋巴细胞。它的免疫活性可能与核转录调节因子NF—KB和激活蛋白AP-1的表达有关。此外，LbGp2能清除用碱性二甲基亚砜体系产生的过氧自由基和Fenton反应产生的羟基自由基，并呈量效关系。LbGp5能抑制低密度脂蛋白的过氧化。     

当归多糖对小鼠脾淋巴细胞增殖及诱生IFN-γ的影响

目的研究当归多糖对小鼠脾淋巴细胞增殖及诱生IFN-γ的影响。方法用4种不同浓度乙醇将当归总多糖(AP)进行分级沉淀,获得AP-I,AP-II,AP-III和AP-IV 4个部分多糖。用［³H］-TdR参入法检测当归部分多糖对小鼠脾淋巴细胞增殖作用;结晶紫染色法测定IFN-γ的生物活性;ELISA法测定IFN-γ的含量。结果AP-I和AP-II能明显促进体内外小鼠脾淋巴细胞增殖,体外显著诱导脾淋巴细胞分泌IFN-γ,增强IFN-γ的生物活性;特别是AP-II体外诱生较高含量的IFN-γ,AP-I体内诱生的IFN-γ生物活性较强。结论AP-I和AP-II是免疫活性较强的部分。