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1.
目的 采用pGEX-6p载体原核表达沙眼衣原体(Ct)巨噬细胞感染增强因子(MIP),进一步纯化后免疫小鼠,评价该蛋白作为Ct疫苗候选抗原的可行性。方法聚合酶链反应技术从Ct D型基因组扩增MIP编码基因,构建pGEX-6p-1/MIP重组质粒并转化大肠杆菌,IPTG诱导重组菌表达GST-MIP融合蛋白,PreScission蛋白酶切除GST标签后免疫Balb/c小鼠,ELISA法检测MIP的免疫学特性。结果MIP编码基因正确插入pGEX-6p-1载体,核苷酸序列与GenBank登陆的Ct D型MIP基因完全一致;重组融合蛋白在E.coli中稳定高效表达,酶切后纯度达90%以上;MIP蛋白具有良好的免疫原性,诱导小鼠产生高滴度特异性IgG型抗体,亚型以IgG2a为主;MIP免疫组小鼠脾淋巴细胞受MIP蛋白刺激,分泌高水平IFN-γ。结论重组表达的Ct MIP 蛋白具有良好的免疫原性,能诱导小鼠产生高特异性的体液及细胞免疫应答,可进一步探讨其作为Ct亚单位疫苗的可行性。  相似文献   
2.
目的 探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)在抗衣原体感染免疫以及介导衣原体生殖道病理损伤过程中的作用。方法 以5~6周龄雌性C57BL/6J野生型小鼠及TNF-αR基因敲除小鼠为研究对象,野生型和TNF-αR基因敲除两组各15只小鼠,经生殖道感染1×104包涵体形成单位的鼠衣原体,初次感染后第56天,每组8只小鼠再次感染同等剂量的鼠衣原体。每隔3~4 d 取小鼠生殖道分泌物用于衣原体包涵体数目的检测。于初次感染后第80天处死小鼠,收集小鼠腹腔巨噬细胞,并分离生殖道和脾脏。观察输卵管和子宫角病理损伤程度,并采用盲法对管腔扩张以及炎性细胞浸润程度进行半定量分析;测定小鼠巨噬细胞培养上清中的IL-6、IL-8、IL-1α、IL-1β和TNF-α等前炎症因子水平;制备脾细胞悬液,体外经衣原体EB刺激后检测其产生的IL-4、IL-5、IL-17和 IFN-γ 等细胞因子水平。结果 TNF-αR 基因敲除组生殖道衣原体清除速度与野生型组基本一致,与初次感染或再次感染无 关;两组小鼠子宫角和输卵管的炎症程度差异没有统计学意义(P>0.05),但TNF-αR基因敲除组输卵管水肿程度明显低于野生型组(P<0.05)。腹腔巨噬细胞细胞因子检测结果显示,TNF-αR基因敲除小鼠的TNF-α水平高于野生型小鼠(P<0.05);脾细胞细胞因子水平显示,两组小鼠脾细胞均产生较高水平的IFN-γ,TNF-αR基因敲除小鼠产生的IL-17细胞因子水平低于野生型小鼠(P<0.05)。结论 TNF-α对小鼠生殖道清除鼠衣原体感染无影响,但可促进鼠衣原体引起的生殖道炎症病理损伤。  相似文献   
3.
目的原核表达并纯化沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)巨噬细胞感染增强因子MIP,评价其作为Ct疫苗候选蛋白的可行性。方法采用PCR技术从Ct D型基因组中扩增MIP基因,构建pGEX-6p-1/MIP原核表达质粒,转化E.coli XL1-Blue,IPTG诱导重组GST-MIP融合蛋白表达,经酶切后得到无GST标签的纯蛋白免疫Balb/c鼠,ELISA法检测免疫小鼠的血清抗体和脾细胞因子的产生情况。结果成功构建了pGEX-6p-1/MIP原核表达质粒,序列测定证实重组质粒插入片段与Gen Bank登陆的Ct D型一致,长度为729 bp;GST-MIP融合蛋白在E.coli中获得稳定高效表达,纯化后纯度达90%以上;MIP蛋白免疫小鼠产生高滴度、高特异性的IgG抗体,以IgG2a亚型为主;MIP蛋白免疫小鼠的脾细胞受衣原体菌体或MIP蛋白刺激,产高水平IFN-γ。结论原核表达并纯化了Ct MIP蛋白,该蛋白具有良好的免疫原性,可诱导小鼠产生高滴度抗体和Thl型免疫应答,可能为潜在有效的Ct亚单位疫苗。  相似文献   
4.
目的:初步探讨抗淋病LTB-PorB核酸疫苗与蛋白疫苗联合免疫的免疫增强效应,为研制抗淋病疫苗提供实验依据。方法:大量制备核酸疫苗(pcDNA3.1(-)/ltB-porB)及重组蛋白疫苗(rLTB-PorB);通过鼻饲途径将核酸疫苗和蛋白疫苗采用核酸初免-蛋白加强(DNAprime-protein boost)联合免疫以及分别单独免疫雌性BALB/c小鼠,同时设PBS及空质粒(pcDNA3.1(-))对照组,检测各组体液免疫和细胞免疫应答水平。结果:免疫后第56天,联合免疫组小鼠生殖道sIgAA450(1·083±0·179)、血清IgG A450(1.023±0.116)、脾淋巴细胞诱生的IL-4[(357.58±34.44)/pg/ml]和IFN-γ[(261.85±29.92)/pg/ml]水平均明显高于各对照组(P0.01),小鼠脾淋巴细胞增殖率(SI:2.12±0.29)较对照组显著增高(P0.05);核酸疫苗组、蛋白疫苗组和联合免疫组血清IgG亚类IgG2a/IgG1比值分别为1.678、0.455和0.693。结论:LTB-PorB核酸疫苗和蛋白疫苗联合免疫组诱导的特异性体液免疫应答和细胞免疫应答水平明显优于单独的核酸疫苗组和蛋白疫苗组,且以诱导Th2倾向性免疫应答为主。  相似文献   
5.
Objective To investigate the specific humoral immune response and cellular immune response induced by DNA vaccine with Neisseria gonorrhoeae porin B (PorB) fused with B subunit of Escherichia coli heat-labile enterotoxin B (LTB) in mice. Methods Target genes of porB, ltB and ltB-porB were amplified by polymerase chain reaction (PCR) and cloned into eukaryotic vector pcDNA3.1(-). The recombinants were identified by PCR, enzyme digestion and DNA sequencing.The vectors were transfected into Hela cells, and expressed proteins were checked by cytoimmunofluorescence. Female BALB/c mice were intranasally immunized with recombination vectors. The humoral immune response and cellular immune response were detected by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) and methyl thiazolyl tetrazolium (MTT) colorimetric assay. The expressions of recombination vectors in intranasal mucosal tissues of the immunized mice were detected by immunohistochemistry. The means between groups were compared by analysis of variance. Results All the three recombinants were expressed in Hela cells and intranasal mucosal tissues. The PorB specific IgG in serum and sIgA in vaginal secretions in DNA vaccine immunized mice were significantly higher than those in controls (P<0.01 ; P<0.05). Moreover, the sIgA level in pcDNA3.1 (-)/ltB-porB group was higher than that in peDNA3, 1(-)/porB group (P=0. 002). The levels of interferon-gamma (IFN-γ) and interleukin-4 (IL-4) in the supernatants and stimulation index (SI) of spleen lymphocyte culture in pcDNA3, 1(-)/porB group were (170.04±23.89) pg/mL, (114.68±14.27) pg/mL and 1. 68±0.19, respectively; and those in pcDNA3, 1(-)/ltB-porB group were (161.42±27.50) pg/mL, (124.16±19.04) pg/mL and 1.73±0.28, respectively; which were both higher than those in pcDNA3.1(-)/ phosphate buffered saliae (PBS) group (P<0. 01; P<0.05) and pcDNA3.1 (-)/ltB group (all P<0.05), while there was no significant difference between pcDNA3.1 (-)/ltB-porB group and pcDNA3. 1 (-)/porB group (0. 998, 0. 696, 0. 994; all P>0.05). Conclusions The constructed DNA vaccines are all successfully expressed in Hela cells and murine intranasal mucosal tissues. The mucosal immunization of the vaccines [pcDNA3. 1 (- )/porB and pcDNA3.1 ( -)/ltBporB] could induce humoral immune response and cellular immune response, especially mucosal immune response. It is confirmed that mucosal adjuvant LTB could promote PorB to induce higher level of mucosal immune response in mice.  相似文献   
6.
我院从1996年至1998年,应用抗炎Ⅱ号栓肛塞治疗剖宫产术病人,在降低术后微热及产褥病率方面取得了较好的疗效,现报告如下。1 对象及方法11 病例选择 我们选择1996~1998年在我院产科住院行剖宫产术的病例100例,随机分为实验组和对照组各50例。各组病例条件相似,有可比性,均为初产妇,未有产科合并症。12 治疗方法 两组术后常规补液外,加用妥布霉素24万单位静滴3d,而实验组在此基础上,术前2h及术后3d早、晚,各用抗炎Ⅱ号栓2枚。13 观察指标 观察剖宫产术后病人微热持续的时间,…  相似文献   
7.
8.
宫颈糜烂与宫颈癌及宫颈上皮内瘤变的关系初探   总被引:2,自引:0,他引:2  
[目的]初步探讨宫颈糜烂与宫颈癌及宫颈上皮内瘤变(CIN)的关系.[方法]随机选取就诊于中国医科大学附属盛京医院宫颈病变诊疗室的患者为研究对象,设无糜烂组、轻度糜烂组、中度糜烂组和重度糜烂组四组,比较各组CIN和宫颈癌的疾病构成比,并作相关因素分析.[结果]各组无病变、CIN I、CINⅡ、CINⅢ及宫颈癌的疾病构成比分别为:无糜烂组25.0,36.5%,12.5%,23.1%,2.9%;轻度糜烂组30.4%,40.2%,16.7%,11.8%,1.0%;中度糜烂组37.8%,37.8%,13.3%,10.2%,1.0%;重度糜烂组47.0%,30.0%,11%,9%,3%.其中轻、中、重度糜烂组之间的疾病构成比比较,差异无统计学意义.无糜烂组CIN和宫颈癌的构成比明显高于糜烂组(P<0.01).[结论]与光滑的宫颈相比,糜烂的宫颈发生CIN和宫颈癌的可能性并未增加.不应该把宫颈糜烂作为宫颈病变的高危因素.对无糜烂的宫颈更应警惕宫颈病变的发生.  相似文献   
9.
阴道镜检查在子宫颈病变诊治中的价值--附1894例分析   总被引:2,自引:2,他引:0  
目的评价电子阴道镜检查在子宫颈病变诊治中的价值,调查中国医科大学附属第二医院妇科门诊子宫颈病变诊室就诊患者的疾病构成.方法回顾分析该院子宫颈病变诊室阴道镜检查1 894例,评价阴道镜检查的诊断效能,同时计算疾病构成比.结果阴道镜检查诊断子宫颈病变的敏感性85.2%,特异性52.4%,符合率72%,阳性预测值72.6%.该院子宫颈病变诊室的疾病构成比中,子宫颈上皮内瘤变(cerivical intraepithelial neoplasia,CIN)占56.0%,子宫颈癌占3.2%.结论阴道镜检查是子宫颈病变早期诊断不可或缺的辅助手段.阴道镜联合薄层细胞检查(thinprep cytologic test,TCT)可以提高筛查的阳性率.大型综合性医院妇科门诊的就诊患者中,CIN的疾病构成比很高,要积极对就诊患者进行规范的子宫颈癌防癌筛查,以防CIN和子宫颈癌的漏诊.  相似文献   
10.
巨大子宫肌瘤合并红细胞增多症3例报告   总被引:2,自引:0,他引:2  
自Thomson和Marson于1953年首次报道1例子宫肌瘤合并红细胞增多症,在手术切除肌瘤后红细胞与血红蛋白即下降至正常,以后陆续有一些病例报告。但至今世界范围内仅报道20例[1]。我院自1996年11月~12月共收治3例此类病例,现将临床资料简...  相似文献   
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