乳腺肿块腋窝淋巴结超声造影与人乳腺珠蛋白基因检测对比研究

目的通过分析乳腺肿块患者皮下注射超声造影剂（SonoVue）后腋窝淋巴结（ALN）的增强情况并检测前哨淋巴结（SLN）中人乳腺珠蛋白基因（hMAMmRNA）的表达,探讨超声造影与hMAMmRNA检测在诊断乳腺癌SLN的应用前景。方法2l例乳腺肿块患者的肿物周围相同部位皮下先后分别注射造影剂和美蓝,观察同侧ALN的增强情况,术前对SLN标记,术后离体标本行病理及hMAMmRNA的逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测。结果21例患者造影后15例检出SLN,检出率71．4％（15／21）,美蓝染色后检出SLN19例,检出率90．5％（19／21）,两组诊断准确率差异无统计学意义（P〉0．05）。恶性者共检出SLN38个。病理显示15个转移,RT-PCR有26个阳性;良性患者11个SLN,且病理与RT—PCR均为阴性;两者检测的阳性率分别为75．5％（37／49）、97．9％（48／49）,差异有统计学意义。结论皮下注射SonoVue超声造影可较好地检测出SLN并可判断其良恶性。     

人乳腺珠蛋白基因真核表达载体的构建及其表达

[目的]构建人乳腺珠蛋白(hMAM)基因的真核表达载体pcDNA3.1-hMAM,并观察重组载体在COS-7细胞中的表达,为肿瘤DNA疫苗研究奠定基础.[方法]利用PCR方法扩增hMAM基因,酶切测序分析后,克隆入真核表达载体pcDNA3.1,构建真核表达载体pcDNA3.1-hMAM.将重组载体用脂质体转染法转染入COS-7细胞,间接免疫荧光法检测目的基因的表达.[结果]成功扩增hMAM基因,酶切测序结果表明,重组载体含有hMAM基因,在COS-7细胞中可检测到hMAM表达.[结论]hMAM基因的真核表达载体构建成功,为进一步进行DNA肿瘤疫苗研究提供了实验依据.     

人乳腺珠蛋白mRNA在腋窝淋巴结及外周血中的表达规律及其临床意义

目的探讨人乳腺珠蛋白mRNA（hMAM mRNA）在乳腺癌组织、腋窝淋巴结及外周血中表达的意义。方法应用实时荧光定量PCR（RQ-PCR）技术检测乳腺癌组织、腋窝淋巴结及外周血中hMAMmRNA的表达情况,并取乳腺良性肿瘤、健康志愿者外周血作为阴性对照。结果（1）在15例新鲜乳腺癌组织中有14例hMAM mRNA表达阳性,表达的敏感性为93%,在乳腺良性肿瘤及非乳腺组织中不表达;（2）在30例腋窝淋巴结中hMAM mRNA总的阳性表达率63%,其中病理阳性淋巴结hMAM mRNA的表达率为94.4%,病理阴性的淋巴结hMAM mRNA的表达为25%;（3）54例乳腺癌患者外周血中hMAM mRNA的阳性表达率为29%;其中Ⅰ期10%,Ⅱ期21%,Ⅲ期45%,Ⅳ期80%。20例乳腺纤维瘤及20例健康志愿者外周血中均未检测出hMAM mRNA的表达;hMAM mRNA的阳性表达与肿瘤临床分期有关。结论人乳腺珠蛋白是检测乳腺癌微转移的特异性指标,可以反映乳腺癌患者微转移情况,对患者预后判断有重要意义。     

人乳房珠蛋白外周血表达RT-PCR检测及乳腺癌诊治应用

目的建立灵敏外周血人乳房珠蛋白(hMAM)表达 RT-PCR 检测方法,探索 hMAM 在乳腺癌诊治中的应用价值。方法分离受检者外周血单个核细胞,TRIZOL 液提取总 RNA,作 RT-PCR,并查β-actin 监控;确认的 cDNA 先作普通PCR 扩增,再作荧光定量 PCR 扩增。结果 64例标本有63例确认转录为 cDNA,其中乳腺癌43例、良性乳腺肿瘤和正常对照各10例。经普通 PCR 后再作荧光定量 PCR,乳腺癌 hMAM 表达阳性率为53.3%,与良性乳腺肿瘤和正常对照间阳性率有显著差异(P<0.05);而不作普通 PCR 的 cDNA 直接行荧光定量 PCR,结果无阳性。淋巴结转移较未转移,hMAM 表达阳性率有极显著差异(P<0.01)。结论外周血 hMAM 表达是乳腺癌细胞微转移的特异指标;单次 PCR 法的灵敏度不够,二次 PCR 可明显提高灵敏度,并一次普通 PCR 加一次荧光定量 PCR 的组合效果更理想。外周血 hMAM 表达可能是监测淋巴结转移较好指标。     

SBEM和hMAM在乳腺癌中的表达及临床意义

目的 探讨乳腺上皮粘蛋白（SBEM）和人乳腺珠蛋白（hMAM）在乳腺癌中的表达及其临床意义。方法 采用实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测109例乳腺癌患者和25例对照组（5例健康者与20例其他肿瘤患者）外周血SBEM mRNA和hMAM mRNA的表达情况,流式细胞术检测SBEM和hMAM阳性表达细胞的比例;并分析其与临床病理特征的关系。结果 RT-PCR检测显示SBEM mRNA和hMAM mRNA仅表达于乳腺癌患者外周血中,在健康者和其他肿瘤患者外周血中无表达。流式细胞术检测显示SBEM和hMAM在乳腺癌患者中阳性表达细胞的比例分别为55.9％和40.4％,而在健康者和其他肿瘤患者中仅为10％左右。乳腺癌外周血SBEM和hMAM表达与TNM分期、淋巴结转移有关,而与年龄、肿瘤大小、激素受体和C erbB-2均无关。结论 SBEM mRNA和hMAM mRNA在乳腺癌患者外周血中均有高表达,两者联合检测有助于判断血道微转移的存在。     

血管内皮生长因子浓度对乳腺癌微转移的影响

目的:研究腋淋巴结阴性乳腺癌(ALNNBC)血管内皮生长因子(VEGF)血清浓度与乳腺癌微转移关系。方法:采用巢式RT-PCR方法,检测62例ALNNBC外周血人类乳腺珠蛋白(hMAM)mRNA的表达,阳性表达者判定为乳腺癌微转移;ELISA方法检测患者VEGF血清浓度。分析hMAM mRNA表达及VEGF血清浓度与相关临床病理因素间的关系,VEGF血清浓度与微转移及复发转移的关系。结果:ALNNBC中c-erbB2阳性表达者hMAM mRNA阳性表达率高(P<0.05);hMAM mRNA阳性表达提示乳腺癌存在微转移;ER阴性、P53阳性、c-erbB2阳性、hMAM mRNA阳性表达组VEGF血清浓度高(P<0.05或者P<0.01);高VEGF浓度组无复发生存率较低(P<0.05)。结论:ALNNBC外周血血清VEGF高浓度与微转移及临床复发和转移密切相关,血清VEGF浓度可能是ALNNBC预后预测因子。     

外周血中hMAM表达与乳腺癌微转移关系的研究

目的 研究乳腺癌患者外周血中人乳珠蛋白(hMAM-mRNA)的表达与乳腺癌微转移的关系.方法 以MCF-7乳腺癌细胞为阳性对照,利用Nested-RT-PCR技术检测92例乳腺癌术后患者、20例乳腺良性肿瘤患者、10例其他系统恶性肿瘤患者、10例正常人群外周血hMAM-mRNA表达情况.结果 hMAM-mRNA仅在乳腺癌患者外周血中表达.92例乳腺癌患者外周血中hMAM-mRNA表达率为43.5%(40/92),hMAM-mRNA在外周血中的表达与ER、PR状态,患者月经状况,肿瘤大小无关.与HER-2、CEA、CA15-3在外周血中是否阳性表达及患者年龄相关.与腋窝淋巴结转移状况密切相关.结论 外周血中hMAM-mRNA检测是乳腺癌血微转移可供参考的临床指标.     

CK19和hMAM及SBEM检测乳腺癌微转移价值分析

目的：探讨生物学标志乳腺上皮小黏蛋白（smallbreastepithelialmucin,SBEM）、乳腺珠蛋白（humanmamma—globin,hMAM）和细胞角蛋白19（cytokeratin19,CK19）检测乳腺癌外周血及淋巴结微转移的临床应用价值。方法：收集2012-04—13—2012-10—10广西医科大学附属肿瘤医院乳腺外科首诊的患者外周血及组织标本。采用巢式PCR技术对47例乳腺癌患者和45例乳腺良性肿瘤患者外周血有核细胞中SBEM、hMAM和CK19的mRNA进行检测;采用半定量PCR技术对10例乳腺癌组织及对应的癌旁组织,以及10例乳腺良性肿瘤患者组织mRMA进行检测;采用免疫组化技术对其中27例乳腺癌患者的109个淋巴结进行检测。结果：乳腺癌和乳腺良性肿瘤患者的外周血SBEM表达率分别为82．98％（39／47）和62．22％（28／45）,χ2=5．005,P=0．021;乳腺癌和乳腺良性肿瘤患者的外周血hMAM表达率分别为65．96％（31／47）和42．22％（19／45）,差异有统计学意义,χ2=5．220,P=0．022;乳腺癌和乳腺良性肿瘤患者的外周血CK19表达率分别为89．36％（42／47）和80．00％（36／45）,差异无统计学意义,χ2=1．562,P=0．211。免疫组化CK19在52个转移性淋巴结中强阳性表达,在57个常规病理检查未发现的转移性淋巴结中检出5个淋巴结存在转移灶;hMAM及SBEM在转移性淋巴结中表达比CK19弱,而且阳性细胞染色不均一。结论：SBEM、hMAM和CK19作为乳腺癌外周血微转移生物学标志具有较高的灵敏性,但缺乏特异性,联合检测可以提高特异性,对发现早期乳腺癌微转移有一定临床意义;CK19可用于检测乳腺癌腋窝淋巴结的微小转移灶。     

乳腺癌患者外周血hMAM及SBEM检测及其临床意义

目的研究乳腺癌患者外周血人乳腺珠蛋白（hMAM）及乳腺上皮粘蛋白（SBEM）的表达及临床意义。方法应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测58例乳腺癌患者外周血hMAM mRNA及SBEM mRNA的表达，并用健康志愿者及乳腺良性肿瘤患者各10例作为对照。结果hMAM及SBEM在58例乳腺癌患者外周血的阳性表达率分别为34.5%、25.9%，乳腺良性肿瘤和正常对照均无阳性表达，两者的阳性表达与患者的临床分期显著相关（P〈0.05），两者联合检测的总阳性率为41.4%（24/58），与单一标志物相比缺乏统计学意义。结论hMAM及SBEM特异性表达于乳腺癌外周血，可作为检测乳腺癌外周血肿瘤细胞标志物，并有可能在乳腺癌微转移诊断和预后判断中具有重要意义。