Cdh1小干扰RNA载体的构建及鉴定

目的:构建Cdh1小干扰RNA载体,并将其转染至Hela细胞进行鉴定.方法:根据pENTRTM/H1/TO中间载体要求,设计Cdh1小干扰RNA载体的干扰序列及无干扰作用的对照序列,合成相应的DNA单链,退火后连接到pENTRTM/H1/TO线性载体,形成完整载体,进行测序鉴定.分别将测序鉴定成功的Cdh1小干扰RNA载体及对照载体采用脂质体法转染Hela细胞,转染后48 h提取细胞总RNA及细胞总蛋白,采用实时定量PCR和Western Blot检测Cdh1的表达.结果:经测序鉴定成功构建Cdh1小干扰RNA载体和对照载体,分别命名为pENTR/shCdh1和pENTR/shcontrol.与未转染及转染pENTR/shcontrol的Hela细胞相比,转染pENTR/shCdh1的Hela细胞Cdh1表达降低(P《0.05).结论:成功构建Cdh1小干扰RNA载体,并能下调Hela细胞Cdh1的表达.     

木黄酮对白血病K562细胞增殖的影响

目的:探讨木黄酮(genistein)抑制白血病K562细胞增殖的机制.方法:用噻唑蓝染色法检测genistein对K562细胞增殖的抑制作用;用流式细胞仪进行细胞周期解析,通过细胞形态学观察细胞分裂;应用RT-PCR方法检测白血病细胞WT1 mRNA表达.结果:Genistein浓度分别为2～30μg/ml作用K562细胞72 h,细胞增殖呈浓度依赖性受抑,与对照组相比差异显著(P＜0.01),IC50=11.4μg/ml;细胞周期解析发现,浓度为30μg/ml的genistein作用K562细胞12 h,引起了明显的G2/M期阻滞,24 h后G2/M期细胞增至93%;细胞分裂指数与对照组比没有明显差别;30μg/ml genistein作用K562细胞24 h,3 h起WT1 mRNA表达开始降低,24 h时降至对照的30%.结论:genistein抑制K562细胞增殖,诱导G2期或M早期阻滞及下调WT1的表达.     

低浓度5-Fu24-小时持续化疗对BEL-7402肝癌细胞株的细胞周期的影响

目的研究低浓度5-Fu 24-小时持续化疗和高浓度5-Fu短时间化疗对BEL-7402肝癌细胞株的细胞周期的影响：方法用低浓度(1000．0μg/L)的5．Fu对BEL-7402肝癌细胞株进行持续24小时的培养(A组)，用高浓度(50000．0μg/L)的5-Fu对BEL-1 7402肝癌细胞株进行2小时培养(B组)，在培养后的不同时间点用流式细胞技术检测细胞周期的变化。结果A组结果显示：0h、4h、8h、12h、16h、20h和24h的S期细胞的百分数分别为25.23％、32．35％、39．28％、41．05％、46．02％、47．00％及47．14％。B组结果显示：0h、4h、8h、12h、16h、20h和24h的S期细胞的百分数分别为24．68％、68．43％、46．67％、43．67％、35．42％、33．22％及32．96％。结论5-Fu引起的S期细胞周期阻滞不但和浓度相关，也和作用时间相关。低浓度(1000．0μg/L)的5-Fu持续化疗较高浓度(50000．0μg/L)的5-Fu短时间(2小时)化疗更容易引起BEL-7402肝癌细胞株S期阻滞。     

Cyclin D1在胶质瘤细胞系中表达分布模式的初步研究

目的：探讨cyclin D1在胶质瘤细胞系中的细胞周期表达模式，将为从生物学功能上阐明cyclin D1在胶质瘤细胞周期演进中的作用．方法：利用流式细胞仪双参数法和细胞同步化，确定cyclin D1在胶质瘤细胞系SHG-44和BT-325中的细胞周期表达分布模式．结果：在胶质瘤细胞系SHG-44和BT-325中，Cyclin Dl的表达呈细胞周期依赖性：在SHG-44中，cyclin D1在G1期表达最高，4h左右达到峰值，S期及G2／M期下降，但仍可检测到；在BT-325中，cyclin D1在G1期表达最高，6h左右达到峰值，S期及G2／M期下降，但仍可检测到．结论：cyclin D1蛋白质的表达呈细胞周期依赖性，且与细胞周期行进有关；cyclin D1在SHG-44和BT-325胶质瘤细胞进入G1期的早期发挥着重要的生物学作用。     

莱菔硫烷对人膀胱癌细胞周期的影响及机制研究

背景与目的:探讨莱菔硫烷对人膀胱癌细胞(T24)细胞周期的影响及作用机制。材料与方法:采用噻唑蓝(MTT)法研究不同浓度的莱菔硫烷对T24细胞生长的抑制作用并测定其半数抑制浓度(IC50);采用流式细胞仪检测莱菔硫烷对T24细胞周期的影响;采用westernblot研究莱菔硫烷对T24细胞中细胞周期蛋白依赖激酶抑制剂P16和P27的表达情况。结果:在较低剂量范围内(≤40μmol/L),随着作用剂量的增加,莱菔硫烷对T24细胞的生长的抑制作用也明显增强。10、20、40μmol/L莱菔硫烷的抑制率分别为(12.5±3.95)%,(25.0±2.50)%、(50.0±5.33)%;在较高剂量(60μmol/L~160μmol/L)时,这种抑制作用不再呈剂量依赖性;莱菔硫烷作用72h后的IC50值为(51.12±7.10)μmol/L;莱菔硫烷能使T24细胞周期阻滞于G0/G1期,20μmol/L莱菔硫烷作用48h后,在G0/G1峰之前出现凋亡峰;20μmol/L莱菔硫烷作用于T24细胞8、12、24h后能明显诱导P27蛋白的表达,作用早期(8h)时能诱导P16蛋白的表达。结论:莱菔硫烷能抑制T24细胞生长并使该细胞周期阻断在G0/G1期,其作用机制主要是通过诱导P27蛋白及早期诱导P16蛋白来实现的。     

锌对小鼠骨髓造血细胞辐射损伤影响的研究

目的 探讨锌对γ射线诱导的体外培养小鼠骨髓细胞辐射损伤的影响及可能的机制。方法 分离小鼠骨髓细胞并悬浮于RPMI1640培养基中，分别将锌按20，200，400，800μmol／L终浓度加入细胞培养液中，5Gy^60Coγ射线照射骨髓细胞后置于37℃、5％CO2细胞培养箱中培养，16h后终止培养，分别测定有核细胞数、细胞DNA含量，并用流式细胞术和免疫组织化学技术测定细胞周期、细胞凋亡和基因表达的改变。结果5Gy60C07射线照射体外培养的小鼠骨髓细胞后，骨髓有核细胞数、DNA含量均明显下降；细胞凋亡率增加，细胞发生S期阻滞：bel-2蛋白表达下降，而p21蛋白的表达升高。照前在培养液中加入一定浓度的锌后，凋亡率下降，DNA含量升高，有核细胞数增加，细胞bcl-2蛋白表达升高而p21表达下降，细胞周期阻滞得到缓解。结论 锌可能通过影响细胞凋亡、细胞周期和基因表达而发挥辐射损伤防护作用。     

重组人白细胞介素－6对急性髓细胞白血病和非白血病祖细胞增殖影响的观察

观察了重组人白细胞介素－６（ｒｈＩＬ－６）对２２例非白血病骨髓和１２例急性髓细胞白血病骨髓祖细胞的增殖影响。结果表明ｒｈＩＬ－６有促进人正常骨髓造血祖细胞增殖作用，其主要作用靶细胞为粒系祖细胞。但对骨髓正常细胞群增殖周期各时相变化影响不明显。而在白血病骨髓，ｒｈＩＬ－６促克隆形成作用较低，但可促进Ｇ０／１期细胞进入Ｓ期。     

三氧化二砷诱导慢性髓系白血病细胞G2/M周期停滞及其机理

目的 研究三氧化二砷对慢性髓系白血病细胞的体外作用特点及其机理。方法 将三氧化二砷与慢性髓性白血病细胞系K562作用后，测定细胞的生长曲线及活性，流式细胞测量术检测细胞凋亡和细胞周期分布的改变；同时，采用RT-PCR方法检测药物作用前后细胞周期相关基因表达的变化。结果 ①三氧化二砷明显抑制K562细胞的生长，其作用呈时间和浓度依赖性；②三氧化二砷诱导K562细胞凋亡的作用较弱，但可明显诱导K562细胞在G2／M期停滞，此效应也呈时间和浓度依赖性；③三氧化二砷作用后，细胞周期抑制基因p57表达明显上调，而细胞周期促进基因cyclinB的表达受到抑制。结论 三氧化二砷能有效抑制慢性髓系白血病细胞的生长，其机理主要为诱导细胞G2／M期周期停滞；该效应与细胞周期相关基因的表达变化有关。     

乳腺癌组织中Cyclin D1及p16蛋白表达的联合检测及其意义

目的:探讨乳腺癌中Cyclin D1及p16蛋白表达的相关性及其临床意义。方法:LSAB法检测多种乳腺组织中Cyclin D1及p16蛋白的表达情况,结合有关临床资料,分析Cyclin D1和p16蛋白表达异常与乳腺癌中重要的临床病理因素的关系。结果:62例乳腺癌组织中,Cyclin D1蛋白过度表达占48·4%,其表达与乳腺癌组织学分级呈明显正相关,且Cyclin D1蛋白过度表达更常见于ER、PR阳性的乳腺癌中。乳腺癌旁组织中Cyclin D1蛋白过度表达为20·0%,其他几种乳腺组织很少有CyclinD1蛋白的过度表达。p16蛋白仅在58·1%的乳腺癌组织中有表达,且p16的表达与组织学分级程度有负相关关系。正常乳腺组织中未见p16蛋白的异常。结论:乳腺癌组织中存在着Cyclin D1蛋白的过度表达及p16蛋白的异常,二者对乳腺癌组织的增殖分化有一定的影响。