大肠癌p16抑癌基因甲基化及与Dukes分期的关系

目的 检测大肠癌患者p16基因启动子CpG区甲基化的改变,探讨其与大肠癌发生、发展和临床资料的关系。方法 采用甲基化特异PCR技术（MSP法）研究58例大肠癌标本p16基因甲基化改变,分析临床病理资料。结果 25例标本（43．1％）呈p16 CpG区甲基化阳性;Dukes C、D期病人p16 CpG区甲基化发生率（75％）明显高于Dukes A、B期病人（13．3％）。结论 p16启动子区甲基化导致p16抑癌基因失活参与了大肠癌的发生和发展;p16甲基化可以作为估计大肠癌病人预后的一个指标。     

喉癌中p16基因突变和甲基化的研究

目的 探讨ｐ１６基因在喉癌发生发展中的作用和在喉癌中的失活机制。方法 应用聚合酶链反应－单链构象多态性分析（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ－ｓｉｎｇｌｅ ｓｔｒａｎｄ ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍａｎａｌｙ－ｓｉｓ,ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）银染方法和ＰＣＲ甲基化敏感内匹酶方法检测３２例喉癌和相应癌旁组织的ｐ１６基因第１,第２外显子突变和甲基化热点区域部分内切酶     

DNMT3A对骨关节炎软骨细胞SOX9基因DNA甲基化修饰的影响

目的 探讨DNMT3A对SOX9基因DNA甲基化修饰的影响。方法 培养正常软骨细胞和OA软骨细胞,显微镜下观察软骨细胞形态,甲苯胺蓝染色、Ⅱ型胶原染色鉴定软骨细胞,qRT-PCR、Western Blot检测DNMT3A、SOX9 mRNA和蛋白表达水平,亚硫酸氢盐测序检测SOX9基因DNA甲基化状态,慢病毒沉默DNMT3A观察SOX9基因DNA甲基化修饰的变化。结果 正常软骨细胞形态规则,体积较大,数量较多,OA软骨细胞形态不规则,体积较小,数量较少。与正常软骨细胞比较,OA软骨细胞中DNMT3A mRNA和蛋白表达量增高（P＜0.05）,SOX9 mRNA和蛋白表达量明显降低（P＜0.05）,SOX9基因DNA甲基化百分比增高。在OA软骨细胞中沉默DNMT3A后,SOX9基因DNA甲基化百分比明显降低。结论 DNMT3A调节SOX9基因DNA甲基化修饰参与OA软骨细胞病变。     

p16在肝细胞癌组织内变异的研究

应用分子杂交及免疫组化方法检测５６例ＨＣＣ组织内的抑癌基因ｐ１６。结果显示,ＨＣＣ标本中ｐ１６蛋白在癌细胞内表达的阳性率为３７５％（２１／５６）,而ｐ１６ＤＮＡ斑点杂交的阳性率为５５３６％（３１／５６）。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ转膜杂交证实,１２５％（７／５６）ＨＣＣ标本存在ｐ１６的甲基化变异,４４６４％（２５／５６）ｐ１６基因缺失。提示ＨＣＣ发生、发展过程中存在ｐ１６基因的缺失和甲基化变异     

p16和p15第二外显子HapⅡ位点在成人急性髓性白血病中的突变

目的　探讨p16和p15基因第二外显子HapⅡ位点在成人急性髓性白血病 (AML)中的突变。方法　用甲基敏感和甲基非敏感限制性内切酶切消化基因组DNA后 ,经PCR扩增和琼脂糖电泳研究 3 1例AML中无p16/p15基因第二外显子缺失的患者中HapⅡ位点的突变情况。结果　在 3 1例成人AML样本中 ,p16E2 的 4个HapⅡ位点和p15E2 的 6个HapⅡ位点均未发生突变。结论　本研究提示p16和p15基因第二外显子中因甲基化而引起的CCGG位点的突变在成人AML患者中不是主要失活方式。     

苦参碱诱导K562细胞分化的基因组DNA甲基化模式变化

目的：我们在已建立的较稳定的苦参碱诱导人白血病K562细胞分化模型基础上，利用基因表达谱芯片扫描发现0．1mg／ml苦参碱作用K562细胞24小时后，277条基因表达下调，84条上调。为进一步探明苦参碱诱导K562细胞分化时基因表达变化发生机制，本文拟从表观遗传学角度研究苦参碱诱导K562细胞分化时基因组DNA甲基化模式的变化。方法：采用对5’-甲基胞嘧啶敏感的限制性核酸内切酶salI和SmaI以及不敏感的HaeⅢ分别消化K562细胞以及0．1mg／ml苦参碱作用24小时和96小时后细胞的基因组DNA，观察限制性核酸内切酶对对照组与药物处理组细胞DNA的不同酶切效果。结果：苦参碱作用K562细胞24小时后，基因组DNA对5’-甲基胞嘧啶敏感的限制性核酸内切酶的敏感性下降。提示苦参碱诱导K562细胞分化的基因表达变化同基因组DNA甲基化模式改变有关。     

肝癌患者血清p16甲基化检测

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是原发性肝癌的主要病理类型，其发病的分子机制尚不清楚。近年来发现，p16基因5’-启动子区CpG岛异常甲基化在许多肿瘤组织及患者血清或血浆循环核酸(ciI℃ulatingnucleicacid，CNA)中有较高检出率。我们用甲基化特异性PCR(methvlationspecific PCR，MSP)检测HCC患者血清p16基因启动子区CpG岛甲基化状态，分析p16甲基化与HBV感染、AFP等的关系，并探讨其临床意义。     

3株肺癌细胞中9个肿瘤相关基因的启动子甲基化状态和部分基因表达的相关性

目的对3株肺癌细胞中9个肿瘤相关基因的启动子甲基化状态和部分基因表达的相关性进行评估.方法通过甲基化特异性多聚酶链反应法(MSP)结合DNA测序来确定3株肺腺癌细胞株(A549,SH77和SPE-A-1)中9个基因的启动子CpG岛的甲基化状态:APC,CDH13,DAPK1,MGMT,MYOD1,p16INK4a,p73,RAR-β和WT1基因.同时采用半定量RT-PCR的方法来量度下列5个基因的表达:CDH13,MGMT,MYOD1,RAR-β和WT1基因.结果在9个受检基因之中,下列4个基因在三株细胞中均呈同样的甲基化谱式:仅有去甲基化:APC和DAPK1,以及兼有甲基化和去甲基化:p73和p16INK4a.而其余5个基因则表现为不同的甲基化模式.尽管,这5个基因的表达谱式大体上符合其启动子CpG岛甲基化的表达静息的原则,个别的例外亦是有的.这提示着与DNA甲基化状态无关的机制可能也会参与该基因的表达调控.结论肺癌细胞株中的肿瘤相关基因的启动子CpG岛的过甲基化可与该基因的表达状态有较高的相关性.     

检测痰脱落细胞p16基因甲基化对周围型肺癌的诊断价值

目的　探讨检测痰脱落细胞p16基因甲基化对周围型肺癌的诊断价值。方法　应用甲基化特异性PCR(methylation specificPCR ,MSP)对 5 0例周围型肺结节患者及 2 0例正常人痰脱落细胞p16基因甲基化改变进行检测 ,将检测结果与术后病理报告相对照。结果　周围型肺癌痰脱落细胞 p16MSP阳性率( 2 7/ 44 ,61.4%)明显高于良性周围型肺结节 ( 1/ 6,16.7%)及正常人 ( 3 / 2 0 ,15 .0 %) ( χ2 值分别为 4.2 81和11.869,P <0 .0 5 ) ,良性周围型肺结节 p16MSP阳性率与正常人无显著性差异 ( χ2 =0 .13 6,P >0 .0 5 )。鳞癌和腺癌患者痰脱落细胞 p16MSP阳性率无显著性差异 ( χ2 =3 .416,P >0 .0 5 )。如果以痰脱落细胞 p16MSP阳性作为判断肺结节恶性的标准 ,其诊断周围型肺癌的阳性预测值为 96.4%,阴性预测值 2 2 .7%,灵敏度 61.4%,特异度 83 .0 %。结论　检测痰脱落细胞 p16基因甲基化对周围型肺癌具有辅助诊断价值     

肿瘤候选抑制基因RASSF1A

新克隆的RASSF1A基因位于3p21．3，是新的肿瘤候选抑制基因，能明显抑制肿瘤细胞生长。RASSF1A失表达见于多种实性肿瘤组织，与RASSF1A启动子甲基化密切相关。RASSF1A启动子甲基化检测可能是很有用的临床指标。