胃癌组织中KAI1、nm23及P53的表达及其临床意义

目的:探讨正常胃黏膜、不典型增生胃黏膜及癌组织中KAI1、nm23及P53蛋白的表达．方法:应用SP法免疫组化检测22例正常胃黏膜,65例不典型增生胃黏膜及74N胃癌组织中的KAI1、nm23及P53蛋白的表达．结果:正常胃黏膜、不典型增生胃黏膜及胃癌组织中,KAI1和nm23阳性率呈降低趋势,组间差异性有统计学意义(x2=20．885, P<0．001;x2=29．133,P<0．05):P53蛋白阳性表达率呈增加趋势,组间差异性有统计学意义(x2=21．954,P<0．001)．Fisher精确概率检验显示:在胃癌组中不同的浸润深度、有无淋巴结转移和脉管侵犯组内KAI1、nm23及 P53组阳性表达率的差异性有统计学意义(x2 =20．885,P<0．001;x2=29．133,P<0．05;x2= 21．954,P<0．001);而在年龄、性别组间的差异性无统计学意义．Spearman等级相关分析显示 KAI1与nm23表达呈正相关(r=0．859,P<0．05); KAI1与P53表达呈负相关(r=-0．859,P<0．05), nm23与P53表达呈负相关(r=-0．874,P<0．05) 结论:抑癌基因KAI1与nm23的缺失以及P53 蛋白的过表达可能是胃癌发生、发展及浸润和转移的重要原因之一．     

NF-κB在肝细胞癌组织中的表达及意义

目的：探讨NF-κB基因在肝细胞癌组织中的表达及生物学意义。方法：采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western-blot免疫组织化学技术检测32例肝癌组织及癌旁肝组织中的NF-κB基因的mRNA和蛋白表达水平及蛋白定位。结果：NF-κB基因在肝癌组织中的表达较癌旁肝组织显著性增高(P<0.05)。免疫组化结果显示，NF-κB蛋白在肝癌细胞胞浆和胞核中均有表达，而在癌旁肝细胞中仅在胞浆中有表达。结论：NF-κB基因在肝癌组织中呈显著高表达，提示其可能参与了肝癌的发生发展。NF-κB表达定位在癌细胞和癌旁肝细胞中的差异，提示NF-κB活化后，进入胞核，通过调节下游基因的转录，促进肝癌的发生。     

乙肝病毒X基因对肝癌细胞表达RhoC的影响

目的：探讨X基因对肝癌细胞表达RhoC基因的影响。方法：用定向克隆的方法构建X基因的真核表达载体pcDNA3.1-X，脂质体转染HEPG2细胞;潮霉素选择培养稳定表达X基因的HEPG2-X细胞;免疫组化鉴定HEPG2-X细胞RhoC蛋白表达。结果：构建的真核表达载体pcDNA3.1-X在HEPG2细胞中有稳定表达，HEPG2-X细胞表达RhoC蛋白增强。结论：体外条件下，X基因可促进肝癌HEPG2细胞RhoC表达增强。这可能与肝癌的侵袭、转移有关。     

精神分裂症患者G72基因表达水平的研究

目的 本工作旨在检测精神分裂症（Schizophrenia）患者外周淋巴细胞中G72基因的表达情况，进而探讨G72基因的表达与精神分裂症的相关关系。 方法 工作在56例精神分裂症患者和84名年龄性别相匹配的对照中进行，在新鲜外周血样本中抽提总RNA，反转录成cDNA，基因表达量的检测在ABI Prism7900HT型序列监测系统上进行，采用TaqMan的方法对患者及对照组样本的mRNA进行定量，采集的荧光数据经SDS2.1软件自动处理，每个样本作三次平行检测，取平均值作为该样本的最终定量。数据应用SPSS统计软件进行处理，对组间基因表达水平的差异采用独立样本的T检验，调用本实验室G72基因单核苷酸多态性（SNPs）资料，用单因素方差分析的方法分析SNP与基因表达水平的关联性。结果 1.检测得到G72基因在对照组中的表达量为0.0586±0.0114amol/ng cDNA, 在精神分裂症患者组中的表达量为0.0498±0.0121amol/ng cDNA。2.经显著性检验， G72基因的表达水平在病例和对照组间差异无统计学意义，t=-0.512，df138，P=0.609，95%CI:-4.258~2.506。3.单因素方差分析结果显示，rs947267位置上的SNP与该基因的表达水平无相关，F=0.355，df2，χ2=0.703；而rs2181953位置上的SNP与G72基因表达水平相关联，F=6.275，df2，χ2=0.004。A/A基因型的患者基因表达水平显著高于其他基因型。结论：精神分裂症患者G72基因的表达量总体上较正常人并无显著变化，但rs2181953位置上的基因型会影响精神分裂症患者该基因的表达。     

Sequence analysis of the gene coding for glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (gpd) of Podospora anserina: use of homologous regulatory sequences to improve transformation efficiency

Summary The glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (gpd) gene of Podospora anserina has been isolated from a genomic library by heterologous hybridization with the corresponding gene of Curvularia lunata. The coding region consists of 1014 nucleotides and is interrupted by a single intron. The amino-acid sequence encoded by the gpd gene shows a high degree of sequence identity with the corresponding gene products of various fungi. Multiple alignments of all fungal GPD sequences so far available resulted in the construction of a phylogenetic tree. The evolutionary relationships of the various fungi belonging to different taxa will be discussed on the basis of these data. Sequence analysis of 1.9 kbp of the 5 non-coding region revealed the presence of typical fungal promoter elements. Utilizing different parts of the 5 regulatory sequence of the Podospora gpd gene, expression vectors containing a dominant selectable marker gene (hygromycin B phosphotransferase) have been constructed for the transformation of P. anserina protoplasts. The use of these homologous gpd regulatory sequences resulted in a significant increase in transformation efficiencies compared to those obtained with vectors in which the selectable marker gene is under the control of the corresponding heterologous promoter of Aspergillus nidulans.     

军团菌MOMPS基因的克隆并在原核系统中表达

以军团菌DNA为模板，PCR扩增获得军团菌主要外膜蛋白基因（Major outer membrane protein gene，ompS），与原核表达质粒pUC18定向重组，构建重组质粒，转化大肠杆菌BL21，并用限制性酶酶切分析、聚合酶链式反应、核酸序列分析、十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、Western印迹进行鉴定。实验结果表明我们扩增出了军团菌914bp的ompS基因，成功构建了重组质粒pLPompS，并在原核系统中得到了表达。     

CLONING AND EXPRESSION OF cDNA FOR HUMAN LYMPHO-TOXIN

人淋巴毒素（ｈＬＴ）系由淋巴细胞经抗原或有丝分裂原活化后产生的一类细胞因子，它具有抗瘤、抗病毒活性和许多重要的免疫调节作用，是一种非常有前途的生物制剂。近年来发现的膜相关型淋巴毒素更提示ｈＬＴ可能具有尚未被揭示的免疫调节活性。因此，克隆人ＬＴｃＤＮＡ并在大肠杆菌表达重组ｈＬＴ，对于ｈＬＴ的开发利用和研究其功能都具有重要意义。本实验按照公布的ｈＬＴｃＤＮＡ序列，经计算机分析并结合实验要求设计并合成一对ＰＣＲ引物，采用ＲＴ－ＰＣＲ技术从ＰＨＡ／ＰＭＡ活化２４ｈ的人Ｔ细胞系Ｊｕｒｋａｔ细胞总ＲＮＡ扩增出一５４１ｂｐＤＮＡ片段；经α－互补筛选，质粒小量快速抽提，限制性内切酶酶切鉴定，将该片段定向克隆于ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９质粒载体。限制性内切酶图谱分析和Ｓａｎｇｅｒ双脱氧链终止法序列测定表明：该ＤＮＡ片段与公布的人淋巴毒素ｃＤＮＡ序列完全一致。它包括编码人淋巴毒素成熟肽的全部ｃＤＮＡ序列。再进一步将该ｃＤＮＡ片段克隆于原核表达载体ｐＢＶ２２０，经地高辛标记探针菌落原位杂交筛选，限制性内切酶酶切鉴定方向，筛选出一阳性重组子ｐＢＶ－ｈＬＴ。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ分析表明：经温控诱导，该重组菌成功     

重组人脑髓鞘碱性蛋白及其抗体的研究

将EcoR1和SalⅠ酶切的人脑髓鞘碱性蛋白（MBP）基因cDNA克隆片段与表达载体pGEX-5T重组后转化大肠杆菌，经筛选，增殖和IPTG诱导，阳性克隆SDS－PAGE结果证实表达一条特异42KDa区带，Western印记杂交证实该区带具MBP抗原特异性，免疫斑点杂交和ELISA检测表达产量占菌体可溶性蛋白含量6％，达到414.6mg/L菌液，将含可溶性MBP蛋白的菌液后SDS－PAGE分离纯化得重组MBP抗原，对新西兰兔进行背部皮下多点注射，5次免疫后以琼脂板免疫双扩法检测抗效价达1：16，并通过免疫斑点杂交和Western印亦杂交证实证抗体具抗MBP特异性。     

Transformation of Trichoderma viride using the Neurospora crassa pyr4 gene and its use in the expression of a Taka-amylase A gene from Aspergillus oryzae

Summary A pyrG mutant of Trichoderma viride, a very efficient cellulase producer, was isolated from among 5-fluoroorotic acid-resistant mutants. The mutation was complemented with the pyr4 gene of Neurospora crassa and used as a selection marker for the transformation of T. viride. A plasmid vector, pDJB1-Taa, carrying both the pyr4 gene and a gene encoding Taka-amylase A from Aspergillus oryzae, was constructed and introduced into protoplasts of T. viride pyrG^-. The transformation frequency was 1–10 transformants (3 on average) per g DNA. One transformant showed highly elevated -amylase production (about 17 times higher than the recipient level) and the integration of more than one copy of the Taka-amylase gene.