民族药铁棒锤炮制前后乌头碱和3-脱氧乌头碱含量的HPLC分析

目的:探讨藏医、羌医和回医所采用的不同炮制方法对民族药铁棒锤中乌头碱和3-脱氧乌头碱等毒性成分含量的影响,考察炮制与毒性的相关性.方法:采用HPLC方法,色谱柱为Kromasil C18(250 mm ×4.6 mm,5 μm),流动相:甲醇-水-三乙胺(95∶5∶0.3);流速:1.0 mL/min;检测波长:235 nm;柱温:25℃.结果:与生品相比,各炮制品中乌头碱和3-脱氧乌头碱含量均有所降低,其中,温度是破坏两者双酯型结构和降低毒性的最主要因素.结论:所测成分色谱峰均能达到基线分离,方法稳定,藏医采用的方法较多且减毒效果最好.     

附子双酯型生物碱的提取工艺研究

目的:探讨附子中3种双酯型生物碱提取的影响因素,确定适宜的提取条件。方法:采用HPLC法测定中乌头碱、乌头碱和次乌头碱的含量,采用单因素试验法,对附子双酯型生物碱的提取工艺进行研究。结果:最佳双酯型生物碱提取工艺为:在15℃条件下,将附子粗粉置于10倍无水乙醇中冷浸3次,每次1 d,双酯型生物碱收率为0.57%,质量分数为18.81%,其中中乌头碱、乌头碱和次乌头碱收率分别为0.16%、0.032%和0.38%。结论:该提取方法高效、低毒、经济、操作方便,适合工业化生产。     

用细胞膜色谱法和HPLC-TOF/MS研究附子中的有效成分

目的通过细胞膜色谱技术和高效液相-飞行时间质谱（HPLC-TOF／MS）技术相结合,初步筛选和鉴定附子中的有效成分。方法初步筛选采用自制的大鼠心肌细胞膜色谱柱,流动相为10mmol／L磷酸盐缓冲溶液,流速为0．2ml／min。色谱分离采用SHISEIDO CAPCELL PAKC18柱,流动相为0．1％甲酸水溶液和乙腈,梯度洗脱,流速为1．0ml／min。质谱鉴定采用TOF／MS,正离子模式扫描。结果确定了附子中8个可能的有效成分。结论通过细胞膜色谱技术和HPLC-TOF／MS技术相结合,为从天然产物中快速寻找新的活性成分提供了途径。     

中毒动物生物检材中乌头类生物碱的LC/MS/MS分析

目的:建立乌头中毒致死的动物检材中乌头类生物碱的LC/MS/MS分析方法。方法:将生物检材用氨水调pH值为8~9,用氯仿/乙醚(1:4)萃取生物检材样品,采用电喷雾离子源,正离子模式检测。结果:在中毒致死的动物检材中发现了乌头碱、中乌头碱和次乌头碱。结论:LC/MS/MS法灵敏可靠,样品处理快速简便,适用于生物检材中乌头类生物碱的检测。     

酸性染料比色法测定乌头属不同药材中乌头生物碱含量

目的:测定毒性中药附子、川乌、草乌、雪上一枝蒿的乌头生物碱含量,对这4种药材的临床用量进行控制。方法:用酸性染料比色法,测定制附子、川乌、草乌中雪上一枝蒿的乌头生物碱含量。结果:附子中生物碱含量为0.2403 mg/g,川乌为1.0412 mg/g,草乌为2.1149 mg/g,雪上一枝蒿为0.6702 mg/g。结论:本实验中建立的酸性染料比色法测定乌头生物碱含量,可作为评价毒性药材质量的根据。     

HPLC法测定新疆准噶尔乌头中双酯型生物碱

目的 采用高效液相色谱法测定新疆准噶尔乌头中双酯型生物碱(乌头碱、新乌头碱、次乌头碱).方法 采用X Bridge C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),以甲醇-水-三氯甲烷(浓氨水调节pH为10.62)(70∶30∶2)为流动相,体积流量为1.0 mL/min,进样量10 μL,检测波长为235nm.结果 准噶尔乌头中含有乌头碱、新乌头碱和次乌头碱,相对于已有法定药材标准的川乌药材而言,准噶尔乌头中乌头碱质量分数较高,新乌头碱和次乌头碱质量分数较低.结论 准噶尔乌头中乌头碱质量分数较高,具有抗炎镇痛等药用价值,值得进一步深入研究.     

高乌头“毒性”部位及镇痛抗炎“药效”部位的筛选

目的：筛选高乌头的毒性及药效部位,探讨毒性与药效的关系,为高乌头"减毒存效"合理炮制提供科学依据。方法：采用小鼠急性毒性实验比较不同溶剂萃取部分的毒性,筛选高乌头的"毒性"部位,以热板法、扭体法及二甲苯致鼠耳肿胀实验考察不同剂量高乌头"毒性"部分对小鼠的镇痛抗炎作用。结果：高乌头不同溶剂萃取部分急性毒性强度差别较大,三氯甲烷部分的毒性最强,水提及正丁醇部分次之,LD₅₀分别为89.65,1 805.40,24 409.41 mg·kg^-1;石油醚、乙酸乙酯及乙醇部分毒性最小,最大给药量分别为2 686.01,3 108.13,28 376.21 mg·kg^-1。给药后120 min,1.5,4.5 mg·kg^-1的高乌头三氯甲烷部分均能提高小鼠热板痛阈值,且呈量效关系,镇痛作用优于1.6 mg·kg^-1氢溴酸高乌甲素组。注射乙酸15 min后,1.5,4.5 mg·kg^-1的高乌头三氯甲烷部分均能有效抑制乙酸所致小鼠的扭体次数,且呈量效关系,抑制率略低于1.6 mg·kg^-1氢溴酸高乌甲素组。在二甲苯致鼠耳肿胀实验中,1.5,4.5 mg·kg^-1的高乌头三氯甲烷部分均能有效缓解小鼠耳肿胀度,且呈量效关系,肿胀抑制率略低于1.6 mg·kg^-1消炎痛组。结论：高乌头三氯甲烷部分既是其毒性部位,又是其镇痛抗炎的主要药效部位,且呈量效关系,推测其镇痛抗炎活性与毒性存在一定的关联。     

附子化学成分研究

目的: 研究附子Aconitum carmichaelii Debx. 的子根的化学成分。方法: 采用硅胶、MCI 以及 Sephadex LH-20 柱色谱等分离,运用波谱数据鉴定化合物的结构。结果: 从附子中分离得到12个化合物,分别鉴定为烟酰胺(1)、尿嘧啶(2)、次黄嘌呤(3)、腺苷(4)、尿苷(5)、5-羟甲基-吡咯-2-甲醛(6)、马齿苋酰胺E(7)、顺-对香豆酸-4-O-β-D-葡萄糖苷(8)、顺-阿魏酸-4-β-葡萄糖苷(9)、反-阿魏酸-4-β-葡萄糖苷(10)、异麦芽酚-葡萄糖苷(11)、2,4,6-三苯基-1-己烯(12)。结论: 除化合物 2 以外,其他化合物均为首次从该属植物中分离得到。     

The anti-arthritic effects of Aconitum vilmorinianum, a folk herbal medicine in Southwestern China

Ethnopharmacological relevance

Aconiti Radix (AC) and Aconiti Kusnezoffii Radix (AK) are two traditional Chinese medicines commonly used to treat joint pain and arthritis. In Southwestern China, Huangcaowu (AV), the root of Aconitum vilmorinianum Kom., has long been used as a local substitute for these herbs for analgesia and anti-inflammation. However, its anti-arthritic effects have not been investigated.

Aim of study

To investigate the anti-arthritic effects of Huangcaowu (AV).

Materials and methods

Mono-arthritis in SD rats was induced by unilateral intra-articular injection of Freund's complete adjuvant. Physiological saline was injected in the contralateral knee. Seventy five percent ethanol extracts of AV (10 mg/kg/day and 100 mg/kg/day), AC (100 mg/kg/day) and AK (100 mg/kg/day) were administered to rats by oral gavage for 14 consecutive days (Day -6 to Day 7) while arthritis was induced at the seventh day (Day 0). The anti-arthritic effects of the herbs were assessed by measuring allodynia, swelling, hyperaemia and the vascular permeability of the knee joints.

Results

AV (10 mg/kg/day and 100 mg/kg/day), AC (100 mg/kg/day) and AK (100 mg/kg/day) suppressed joint allodynia. AV (10 mg/kg/day and 100 mg/kg/day) and AK (100 mg/kg/day) significantly reduced join swelling and hyperaemia while AC (100 mg/kg/day) did not. AV (100 mg/kg/day) attenuated vascular permeability while AC (100 mg/kg/day) and AK (100 mg/kg/day) showed no improvement.

Conclusions

Huangcaowu (AV) significantly improved allodynia, swelling, hyperaemia and vascular permeability in arthritic knee joints. It showed the highest anti-arthritic effects among the three tested Aconitum herbs.     

乌头叶面细菌、真菌DGGE分析条件的建立与优化

目的:筛选并优化适用于分析乌头叶面细菌、真菌多样性的变性梯度凝胶电泳(DGGE)实验条件。方法:采用Touch Down-PCR技术扩增乌头叶面细菌16 S r DNA V3区域和真菌18 S r DNA~5.8 S r DNA序列,利用该扩增产物对乌头叶面细菌、真菌DGGE电泳条件进行优化。采用DGGE垂直电泳法筛选凝胶变性梯度,时间间隔法优化电泳时间。结果:乌头叶面细菌DGGE最佳分析条件为变性剂梯度30%~65%(Gel 10%),电泳温度60℃,电压120 V,电泳时间7 h。乌头叶面真菌DGGE最佳分析条件为变性剂梯度25%~45%(Gel 8%),电泳温度60℃,电压120 V,电泳时间10 h。结论:利用以上优化条件能有效分离乌头叶面细菌16 S r DNA V3区及真菌18 S r DNA~5.8 S r DNA序列,为乌头叶面细菌,真菌的群落结构PCR-DGGE分析提供可靠的技术支撑。