血浆同型半胱氨酸和叶酸及ＭＴＨＦＲ基因多态性与早产

【目的】 探讨孕妇血浆同型半胱氨酸水平（Ｈｃｙ）、叶酸水平及ＭＴＨＦＲ基因多态性与早产的相关性。【方法】 采用病例对照研究,选取４４０例分娩孕妇为研究对象,其中早产临产孕妇（ｃａｓｅ ｇｒｏｕｐ）、同孕周健康孕妇（ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ）各２２０例。用高效液相色谱荧光检测法（ＨＰＬＣ－ＦＤ）检测两组孕妇血浆同型半胱氨酸水平和叶酸水平差异;１４Ｃ 放射法测定两组孕妇ＭＴＨＦＲ的活性;Ｔａｑｍａｎ－ＭＧＢ技术检测两组孕妇ＭＴＨＦＲ基因的５个ＳＮＰ分型差异。【结果】 早产临产孕妇的血浆Ｈｃｙ 水平（μｍｏｌ／Ｌ）明显高于同孕周健康孕妇的血浆Ｈｃｙ水平 （７．５６ ± ２．９７ ｖｓ． ５．９６ ± ２．５４, Ｐ ＝ ０．０１５）,而早产临产孕妇的血浆叶酸水平（μｍｏｌ／Ｌ）明显低于同孕周健康孕妇血浆叶酸水平（１６．２１ ± ２．９１ ｖｓ． １８．５３ ± ３．４４, Ｐ ＝ ０．００２）。早产临产孕妇ＭＴＨＦＲ的活性（ｎｍｏｌ·ｍｇ－１·ｈ－１）明显低于同孕周健康孕妇ＭＴＨＦＲ的活性（１３．３３ ± ３．１６ ｖｓ． ２６．８６ ± ５．６３, Ｐ ＝ ０．０００）。在ＭＴＨＦＲ基因中ｒｓ１８０１１３１和ｒｓ１８０１１３３在早产临产孕妇组与同孕周健康孕妇组的基因型分布差异有统计学意义（Ｐ ＜ ０．０５）。【结论】 早产儿孕妇血浆同型半胱氨酸水平受叶酸水平影响,并与ＭＴＨＦＲ基因ＳＮＰ分型密切相关。     

ＲＮＡｉ沉默ＰＥＬＰＩ／ＭＮＡＲ基因对子宫内膜癌细胞增殖和细胞周期的作用

【目的】 构建脯氨酸－谷氨酸－亮氨酸富集蛋白１（ＰＥＬＰ１）基因慢病毒表达载体,研究沉默ＰＥＬＰ１／雌激素受体非基因组活性辅助调节因子（ＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲ）基因表达对子宫内膜癌细胞增殖和周期的作用及机制。【方法】 构建合成靶向ＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲ ＲＮＡｉ慢病毒表达载体,并转染子宫内膜癌Ｉｓｈｉｋａｗａ细胞,Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲ和ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测ＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲ ｍＲＮＡ和蛋白水平的表达。使用普通培养基和加入Ｅ２的培养基培养各组细胞,ＭＴＴ检测各组细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞生长周期情况;Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测ＥＲ下游靶基因ｃ－ｆｏｓ,ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１的蛋白表达水平。【结果】 成功构建合成靶向ＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲ ＲＮＡｉ慢病毒表达载体,转染子宫内膜癌Ｉｓｈｉｋａｗａ细胞,转染后 ＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲ ｍＲＮＡ的表达和蛋白的表达分别下降８６％和６５％（Ｐ ＜ ０．０５）。转染后Ｉｓｈｉｋａｗａ细胞与对照组相比增殖抑制（Ｐ ＜ ０．０５）, 细胞周期Ｇ０／Ｇ１期细胞比例增加,Ｓ期细胞比例减少 （Ｐ ＜ ０．０５）。加入雌激素后,三组细胞的生长速度加快,细胞Ｓ期的比例增加,转染组增殖抑制明显（Ｐ ＜ ０．０５）,Ｓ期比例降低（Ｐ ＜ ０．０５）。转染组ＥＲ下游基因ｃ－ｆｏｓ、ｃｙｃｌｉｎ－Ｄ１蛋白水平均显著降低（Ｐ ＜ ０．０５）。【结论】 在子宫内膜癌细胞中沉默ＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲ的表达能能抑制细胞生长、使细胞阻滞在Ｇ１期,下调ＥＲ靶基因蛋白表达,ＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲ有望成为子宫内膜癌治疗的潜在靶点。     

ｖｏｎ Ｈｉｐｐｅｌ－Ｌｉｎｄａｕ病伴视网膜毛细血管瘤的长期随访

【目的】 探讨伴有视网膜毛细血管瘤的ｖｏｎ Ｈｉｐｐｅｌ－Ｌｉｎｄａｕ（ＶＨＬ）病患者的长期预后。【方法】 对９例伴有视网膜毛细血管瘤的ＶＨＬ病患者进行长期随访,观察其眼部及其他系统病变。【结果】随访８～１１年,平均９．１年。随访末期所有患者视网膜毛细血管瘤均双眼受累,共１８眼,治疗前与随访末期最佳矫正视力不变的有１２眼（６６．７％）,提高１眼（５．６％）,下降５眼（２７．７％）。随访末期５例（５６．６％）合并肾肿瘤,５例（５６．６％）合并中枢神经系统血管母细胞瘤,２例因肾细胞癌死亡。【结论】伴有视网膜毛细血管瘤的ＶＨＬ病患者中,眼部视网膜毛细血管瘤病变经早期及时治疗远期效果稳定,中枢神经系统血管母细胞瘤和肾肿瘤是常见的其他系统病变,肾肿瘤的远期预后不良。ＶＨＬ病的处理需要早期发现,多学科合作,规范随访,及时治疗。     

肾部分切除术后急性肾损伤早期的监测指标

【目的】 探讨肾部分切除术后急性肾损伤指标早期监测效能。【方法】７６例肾癌患者在我院接受肾部分切除术,术后根据急性肾损伤诊断标准将患者分为两组：急性肾损伤组和非急性肾损伤组,采用受试者工作特征曲线评价急性肾损伤生化指标判断急性肾损伤的效能。【结果】 ２４例（３１．６％）患者术后发生急性肾损伤,其余５２例（６８．４％）患者术后未发生肾损伤,肾损伤组患者术中肾血管阻断的时间（ｍｉｎ）较非肾损伤组长（３０ ± １９ ｖｓ ２４ ± ９, Ｐ ＝ ０．０３）,肾损伤组有５例（２０％）患者术中接受输血而非肾损伤组仅有８例（１５％）患者接受输血（Ｐ ＝ ０．０１１）,肾损伤组患者住院时间较非肾损伤组患者长（Ｐ ＝ ０．０１７）。术后２４ ｈ和４８ ｈ血清胱抑素Ｃ水平具有良好预测急性肾损伤效能,其ＡＵＣ分别为０．７９０ ［９５％ＣＩ ０．６８８ ～ ０．８９３, Ｐ ＝ ０．０００ ）和０．７５４ （９５％ ＣＩ ０．６４６ ～ ０．８６３, Ｐ ＝ ０．０００）。多元回归分析发现术后急性肾损伤危险因素包括输血 （Ｐ ＝ ０．０２８）和术后２４ ｈ血清胱抑素Ｃ浓度（Ｐ ＝ ０．０１８）。【结论】术后血清胱抑素Ｃ可能是肾部分切除术后急性肾损伤早期监测指标,输血和术后血清胱抑素Ｃ浓度可能是术后急性肾损伤独立危险因素。     

妊娠期特异性甲状腺功能正常参考值范围

【目的】 建立中山大学孙逸仙纪念医院妊娠期特异性甲状腺功能正常参考值范围。 【方法】 对２０１０年３月至２０１２年１２月在中山大学孙逸仙纪念医院产检的２ １２０例孕妇进行甲状腺功能的检查,包括ＴＴ４、ＦＴ４、ＴＳＨ、ＴＰＯＡｂ,并随访其妊娠结局。根据美国国家生化研究院推荐的标准,并结合妊娠结局,筛选出“正常孕妇”７５１例：早孕１３３例,中孕３８８例,晚孕２３０例。对其进行统计分析得到ＴＴ４、ＦＴ４、ＴＳＨ的正常参考值范围。 【结果】 ＴＴ４、ＦＴ４服从或经对数转换后服从正态分布,ＴＳＨ不服从正态分布。“正常孕妇”早、中、晚孕期ＴＴ４均数分别为：１３２．５６、１３７．３８、１２８．７０ ｎｍｏｌ／Ｌ,双侧９５％参考值范围分别为７４．５３ ～ １９０．５９、８７．０３ ～ １８７．７３、７８．４６ ～ １７９．０４ ｎｍｏｌ／Ｌ。早、中、晚孕期ＦＴ４均数分别为１６．１４、１３．６０、１２．０３ ｐｍｏｌ／Ｌ,双侧９５％参考值范围分别为１１．２２ ～ ２１．０６、９．９２ ～ １７．２８、９．０３ ～ １５．０３ ｐｍｏｌ／Ｌ。早、中、晚孕期ＴＳＨ中位数分别为１．０３０、１．４１５、１．５５０ ｍＵ／Ｌ; Ｐ２．５ ～ Ｐ９７．５分别为０．０３７ ～ ３．１８１、０．１４６ ～ ３．８３０、０．３５５ ～ ３．６２３ ｍＵ／Ｌ。【结论】 妊娠期甲状腺功能与非孕期有较大差异,结合妊娠结局选择正常孕妇来建立妊娠期正常参考值范围,在理论上来说可能更合理。     

肠易激综合征患者静息状态下大脑右侧海马的功能连接

【目的】 利用功能磁共振成像技术（ｆＭＲＩ）,探索肠易激综合征患者（ＩＢＳ）静息状态下大脑右侧海马的功能连接与正常对照组的区别,了解大脑右侧海马及其功能相关区域在ＩＢＳ患者的病理机制中的作用。【方法】对２１例ＩＢＳ患者及２１例年龄、性别、受教育程度均匹配的健康对照组进行静息状态下的功能磁共振成像扫描,选取大脑右侧海马为种子点,比较两组之间大脑右侧海马功能连接的差别。【结果】与正常对照组相比,ＩＢＳ患者在静息状态下大脑右侧海马与右侧扣带回中部、右侧岛叶、左右侧的中央前回的功能连接降低;与左侧额中回、左侧顶上回以及左侧楔前叶的功能连接增强。【结论】 本研究证明静息状态下ＩＢＳ患者大脑右侧海马功能连接存在异常。本研究从功能整合的角度探究ＩＢＳ患者大脑神经活动的改变,促进我们进一步理解ＩＢＳ的神经活动特点。     

申克孢子丝菌ＳＰＤＳ基因的生物信息学分析及分子克隆

【目的】 分析预测申克孢子丝菌ｃＤＮＡ中编号为Ｌｏｃｕｓ＿１６８＿Ｃｏｎｔｉｇ＿１序列编码的基因及蛋白质结构、功能特征,并进行分子克隆。 【方法】 利用ＮＣＢＩ及Ｅｘｐａｓｙ网站提供的ＢＬＡＳＴｘ、ＳｉｇｎａｌＩＰ、ＩｎｔｅｒＰｒｏ Ｓｃａｎ等生物信息学软件分析其序列,判断其是否为全长编码序列、同源序列名称,并分析其结构、定位及功能等;将其中的全长编码区利用ＰＣＲ方法进行扩增后克隆到ｐＥＴ－３０ａ（＋）载体,测序验证。 【结果】 该序列是亚精胺合成酶（ＳＰＤＳ）的同源基因,全长序列为１０６２ ｂｐ,包含完整的编码区１９０ ～ １ ０６２ ｂｐ,编码２９１个氨基酸,在ＧｅｎＢａｎｋ中,其与粗糙脉孢菌的ＳＰＤＳ基因同源性最高,达８８％。理化性质预测其编码蛋白疏水性高;无质体、线粒体等定位序列,不存在跨膜螺旋结构,为非分泌型蛋白。进化树分析结果显示与粗糙脉孢菌同源性最高;ＰＣＲ扩增及测序结果证实目的基因成功克隆进入ｐＥＴ－３０ａ（＋）质粒。【结论】 获得申克孢子丝菌ＳＰＤＳ的基因及蛋白结构、功能特点,构建了其重组表达质粒,将为进一步明确其在孢子丝菌病中的致病作用奠定理论基础。     

高度近视ＬＡＳＩＫ术后远期视觉相关生活质量调查

【目的】 研究高度近视患者ＬＡＳＩＫ术后远期视觉相关生活质量。【方法】 应用视觉相关生活质量调查问卷对８０例高度近视ＬＡＳＩＫ术后患者及８０例术前高度近视患者进行调查,同时对术后患者进行视力、屈光度及近对比敏感度检查,评估术后远期视觉相关生活质量及了解术后常见视觉障碍,评分越高,视觉障碍越严重。【结果】ＬＡＳＩＫ术后患者生活质量得分为（８．６ ± ８．２）分,低于术前对照组得分（１６．２ ± ８．９）分（Ｐ ＜ ０．０５）。视觉障碍阳性率发生较高的前６项条目,依次为电脑使用和阅读容易疲劳（２８．８％）、近视力感受变差（２２．６％）、夜间视物模糊（２２．６％）、眼干涩不适（２０．１％）、眩光（２０％）、夜间驾驶困难（１７．５％）。其中电脑使用和阅读引发视疲劳与术后视力、高空间频率（１８ｃｐｄ）呈负相关（ｒ ＝ －０．２５７、－０．２６５）;近视力感受变差与术后视力呈负相关（ｒ ＝ －０．３０６）,与术后屈光度存在正相关（ｒ ＝ ０．２７０）;夜间视物模糊与术后视力、低空间频率（３ｃｐｄ）存在负相关（ｒ＝ －０．４３６,－０．２２６）,与术后屈光度存在正相关（ｒ＝ ０．４７８）;眩光与术后视力、各空间频率存在负相关（ｒ ＝ －０．２６５ ～ －０．４０８）,与术后屈光度存在正相关（ｒ ＝ ０．３４２）;夜间驾驶困难与术后视力、高空间频率（１８ｃｐｄ）呈负相关（ｒ ＝－０．３５１、－０．２４９）,与术后屈光度存在正相关（ｒ ＝ ０．３６９）。【结论】 ＬＡＳＩＫ手术能有效改善高度近视患者远期的视觉生活质量。电脑使用和阅读容易疲劳是ＬＡＳＩＫ术后远期高度近视患者最常见视觉障碍。     

乙型肝炎病毒ＢＣＰ、ＰｒｅＣ和Ｃ区基因突变与母婴传播免疫失败的相关性

【目的】 探讨ＢＣＰ、ＰｒｅＣ和Ｃ区基因突变率及突变热点与ＨＢＶ母婴传播免疫失败的关系。【方法】 选取血清ＨＢｓＡｇ阳性且ＨＢＶ ＤＮＡ定量＞１０００Ｕ／ｍＬ的孕妇,以所分娩的新生儿是否发生免疫失败和孕妇血清ＨＢＶ ＤＮＡ定量水平将孕妇分为免疫失败组（１９例）和对照１组（免疫成功且ＨＢＶ－ＤＮＡ定量≥１．０ × １０７ Ｕ／ｍＬ,４８例）、对照２组（免疫成功且ＨＢＶ－ＤＮＡ定量＜１．０ × １０７ Ｕ／ｍＬ,３８例）。对３组孕妇血中ＨＢＶ进行ＢＣＰ／ＰｒｅＣ／Ｃ区基因ＰＣＲ扩增和测序,比较３组的突变率和突变位点的不同。【结果】免疫失败组与对照１组间ＨＢＶＤＮＡ定量相比,差异无统计学意义（Ｐ ＞ ０．０５）,但均大于对照２组（Ｐ ＜ ０．０５）;ＢＣＰ、ＰｒｅＣ、Ｃ区基因突变率,免疫失败组与对照１组间相比,差异无统计学意义（Ｐ＞ ０．０５）,但均低于对照２组（Ｐ ＜ ０．０５）。突变热点ｎｔＡ１７６２Ｔ、ｎｔＧ１７６４Ａ、ｎｔＧ１８９６Ａ在３组中的发生率差异无统计学意义（Ｐ ＞ ０．０５）。【结论】ＢＣＰ／ＰｒｅＣ／Ｃ区基因突变率与ＨＢＶ ＤＮＡ定量有关,但未见其与ＨＢＶ母婴传播免疫失败有明显相关性;也未见ｔＡ１７６２Ｔ、ｎｔＧ１７６４Ａ、ｎｔＧ１８９６Ａ等突变热点与免疫失败的相关性。