p16在肝细胞癌组织内变异的研究

应用分子杂交及免疫组化方法检测５６例ＨＣＣ组织内的抑癌基因ｐ１６。结果显示,ＨＣＣ标本中ｐ１６蛋白在癌细胞内表达的阳性率为３７５％（２１／５６）,而ｐ１６ＤＮＡ斑点杂交的阳性率为５５３６％（３１／５６）。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ转膜杂交证实,１２５％（７／５６）ＨＣＣ标本存在ｐ１６的甲基化变异,４４６４％（２５／５６）ｐ１６基因缺失。提示ＨＣＣ发生、发展过程中存在ｐ１６基因的缺失和甲基化变异     

胎盘组织中解脲脲原体感染的检测与分型

应用扩增解脲脲原体（Ｕｕ）ＭＢ抗原基因的ＰＣＲ方法与培养法对照检测了３２例新鲜胎盘组织,结果ＰＣＲ扩增阳性８例,其中属于生物Ⅰ型Ｕｕ５例,生物Ⅱ型３例,ＰＣＲ扩增阳性的新生儿出生时体重平均比扩增阴性的新生儿低０６２ｋｇ,且以感染Ｕｕ生物Ⅰ型者更为显著,培养法检出Ｕｕ阳性５例。结果提示胎盘组织中Ｕｕ检出率,ＰＣＲ法显著高于培养法,感染胎盘的Ｕｕ可引起新生儿体重降低,可能与Ｕｕ生物Ⅰ型有关。     

脆性X综合征的PCR筛查与诊断

采用多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术结合变性序列胶银染方法对１６９例智力低下（简称智低）疑诊病例及６个脆性Ｘ综合征家系中３３名成员的ＦＭＲ１基因（ＣＧＧ）ｎ重复序列进行了分析,结果发现：（１）智低疑诊病例中３例男性未检出ＰＣＲ阳性产物;（２）脆性Ｘ综合征家系内,５例男性先证者亦未检出ＰＣＲ扩增带;（３）对上述ＰＣＲ结果为阴性的８例男性智低患者（此８例均经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交证实为全突变患者）,设立ＦＲＡＸＥ位点引物作内对照,结果仅获得ＦＲＡＸＥ位点的正常扩增产物,故而可排除ＦＲＡＸＡ位点ＰＣＲ产物为假阴性的可能。结果表明,ＰＣＲ分析ＦＭＲ１基因（ＣＧＧ）ｎ重复序列可有效检出前突变携带者,若男性智低患者的ＰＣＲ结果为阴性,在设立内对照基本排除假阴性的前提下,对本病也有提示作用。该方法快速、简便、稳定、可靠,适合于脆性Ｘ综合征的大量群体筛查。     

恶性黑素瘤患者外周血酪氨酸酶与临床分期的相关性研究

使用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测恶性黑素瘤患者外周血中酪氨酸酶ｍＲＮＡ,并与健康供血者和其它皮肤恶性肿瘤患者对照。结果：６８例恶性黑素瘤患者,临床Ⅰ期和Ⅱ期酪氨酸酶ｍＲＮＡ的ＲＴ－ＰＣＲ阳性率分别为６．５％和１３．３％,Ⅲ期为４２．９％,Ⅳ期（即有远距离转移者）为８７．５％（Ｐ＜０．００１）。说明外周血中酪氨酸酶ｍＲＮＡ阳性率与临床分期有明显的关系,而与性别、肿瘤发病部位和病理学分类无关（Ｐ＞０．０５）。在健康供血者和其他皮肤恶性肿瘤患者血液中酪氨酸酶ｍＲＮＡ的ＲＴ－ＰＣＲ均为阴性。提示酪氨酸酶ｍＲＮＡ具有特异性。     

ICA在糖尿病诊疗中的应用研究

用免疫酶法分析了糖尿病患者及甲状腺疾病患者血清中胰岛细胞抗体（ＩＣＡ）的水平。结果为经胰岛素吸收后,ＩＤＤＭ组阳性率为４６．７％（最高）,ＮＩＤＤＭ组阳性率为１３．３％,甲状腺疾病组（其中１例Ｇｒａｖｅｓ’病伴糖尿病ＩＣＡ阳性）阳性率为４％,健康组０。统计学分析,Ｐ〈０．０５,具有显著性差异,表明ＩＣＡ是Ⅰ型糖尿病的特异性免疫标志物,ＩＣＡ检测作为对ＩＤＤＭ与ＮＩＤＤＭ的鉴别诊断,特别是对ＬＡＤＡ     

DNA探针板杂交法检测临床标本中结核杆菌的应用

目的：在酶标板上进行ＤＮＡ探针杂交,评价其在检测临床标本中结核杆菌的应用价值。方法：收集７１份结核性标本和３２份非结核性标本,进行ＤＮＡ扩增,把扩增产物分别进行电泳和ＤＮＡ探针杂交,比较其结果。结果：７１份结核性标本电泳法阳性率为４５１％,ＤＮＡ探针法阳性率为６９０％;３２份非结核性标本二者均为阴性。结论：ＤＮＡ探针杂交可提高临床标本中结核杆菌的阳性检出率,是结核病早期诊断的一种新方法。     

乙型肝炎患者特异性CMSC及IIPC实验与临床研究

了解乙型肝炎患者补体介导 ＨＢｓＡｇ特异性免疫复合物溶解能力（ＣＭＳＣ）及补体介导免疫沉淀 的抑制作用（ＩＩＰＣ）两种新功能低下在乙型肝炎发病中的作用。方法：采用ＰＥＧ沉淀法测定患者血清循环免疫复 合物（ＣＩＣ）,以ＨＢｓＡｇ和抗－ＨＢｓ制备特异性免疫复合物（ＩＣ）,加入补体（血清）抑制其沉淀,或使ＩＣ裂解并定量测 定上清中的ＨＢｓＡｇ,确定ＣＭＳＣ及ＩＩＰＣ功能,同时用单向琼脂扩散法测定Ｃ３、Ｃ４。结果：患者组ＣＩＣ检出阳性率为 ４５．０％～８２．６％,均显著高于正常组（Ｐ＜０．０５～０．００１）;正常组ＣＭＳＣ后上清液ＨＢｓＡｇ为０．５８±０．１３ｎｇ,各种乙肝 组均明显低于正常对照组（Ｐ＜０．０５～０．００１）;ＩＩＰＣ后上清中ＨＢｓＡｇ浓度为０．４５±０．１８ｎｇ,急性肝炎、慢活肝、重症 肝炎均显著降低（Ｐ＜０．００１）,肝硬化组亦明显降低（Ｐ＜０．０５）;Ｃ３、Ｃ４在患者组亦有不同程度的降低。结论：乙型 肝炎患者血清中存在特异性ＩＣ,患者ＣＭＳＣ及ＩＩＰＣ明显降低在乙型肝炎的发病中有一定作用,补体成分的减少与 ＣＭＳＣ和ＩＩＰＣ的降低有一定关系。     

急性白血病患者MGMT基因突变的研究

目的研究甲基鸟嘌呤－脱氧核糖核酸－甲基转移酶（ＭＧＭＴ）基因突变与急性白血病发病的关系。方法应用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）技术对６２例急性白血病中ＭＧＭＴ基因进行了突变分析。结果ＭＧＭＴ基因突变在急性白血病中为１４．５％。结论急性白血病中存在ＭＧＭＴ基因突变,其在急性白血病的发生与发展中起到一定作用。     

RT—PCR方法在小鼠肝炎病毒检测中的初步应用

采用4株小鼠肝炎病毒,MHV1、MHV3、A59和JHM的混合液人工感染SCID小鼠,接种病毒后1、2、5d分别取小鼠的全血、肝、肺、脑、脾和血清,用组织总RNA抽提试剂盒提取各组织的总RNA,然后用RTPCR方法检测小鼠肝炎病毒,并对各反应产物进行平均光密度测定。结果显示,接种后24h即可检测出血液中的小鼠肝炎病毒,病毒在小鼠体内各脏器出现的先后顺序为血、肝、脾、肺、脑,主要在肝脏进行复制。     

E.coli产Ampli Taq DNA聚合酶的分离纯化

将含有Ｔａｑ ＤＮＡ聚合酶基因的Ｅ．ｃｏｌｉ经发酵,细胞培养液经破壁裂解,粗蛋白抽提Ｓｅｐｈａｅｒｙｌ－ｓ－１００,ＣＭ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｃ５０柱层析等纯化步骤,可获得电泳纯的重组Ｔａｑ ＤＮＡ聚合酶,用于科研和检测工作。