基于UPLC/LTQ-Orbitrap-MS的消风宣窍汤对变应性鼻炎小鼠尿液代谢组学研究

目的 分析变应性鼻炎（Allergic rhinitis,AR）模型小鼠尿液内源性代谢物的变化,观察消风宣窍汤对AR异常代谢物的调节作用,从代谢组学的角度探究消风宣窍汤作用机制。方法 将60只BALB/c小鼠随机分为对照组、模型组、孟鲁司特组和消风宣窍汤组,以卵蛋白腹腔注射进行致敏,局部鼻黏膜激发的方法建立BALB/c小鼠AR模型,孟鲁司特组和消风宣窍汤组分别给予孟鲁司特钠片和消风宣窍汤,每天2次,连续7d,各组分别于给药最后1天采集尿液样本。采用基于UPLC/LTQ-Orbitrap-MS的代谢组学技术研究各组代谢物的变化,分析药物的干预机制。结果 AR引起小鼠体内酸类、胺类等多种代谢物紊乱。消风宣窍汤主要调控了其中14种异常代谢物的水平,对AR小鼠的干预效果良好。结论 AR小鼠尿液中多个小分子偏离正常状态,消风宣窍汤主要通过对非对称性二甲基精氨酸（ADMA）、N-甲基烟酸、S-腺苷甲硫氨酸(SAMe)、吲哚-2-羧酸(I2CA)、6-氨基己酸(EACA)、咪唑乙酸、1-甲基-4-吡啶-5-羧酰胺(M4PY)的上调和1-甲基组胺的下调,改善组氨酸代谢和半胱氨酸和蛋氨酸代谢以达到治疗效果。      

茯苓水提物UPLC指纹图谱的建立及其镇静催眠作用的谱效关系研究

目的:建立茯苓水提物的超高效液相色谱(UPLC)指纹图谱,并考察其与镇静催眠作用的谱效关系。方法:将10批不同产地茯苓经水提后得水提物。采用UPLC法测定该水提物,色谱柱为Waters HSS-C18,流动相为0.1%磷酸溶液-乙腈-甲醇(梯度洗脱),流速为0.4~0.2 mL/min,检测波长为210、242 nm,柱温为40℃,进样量为2μL。采用《中药指纹图谱相似度评价系统》(2012A版)建立10批茯苓水提物的指纹图谱并进行共有峰指认。以小鼠的入睡率、入睡潜伏期和睡眠持续时间为单一药效指标,考察戊巴比妥钠协同作用下10批不同产地茯苓水提物的镇静催眠作用;将单一药效指标和总药效(由单一指标经层次分析法计算而得)进行数据转化后,采用灰色关联度分析法分析茯苓水提物指纹图谱中各共有峰与单一药效及总药效的关联度。结果:10批茯苓水提物共有24个共有峰,指认出11个成分,分别为16-羟基松苓新酸(6号峰)、16α-hydroxytrametendic acid(7号峰)、茯苓酸B(9号峰)、去氢土莫酸(10号峰)、茯苓酸A(12号峰)、猪苓酸C(15号峰)、3-O-乙酰基-16α-羟基松苓新酸(17号峰)、去氢茯苓酸(20号峰)、茯苓酸(21号峰)、松苓新酸(22号峰)、脱氢齿孔酸(24号峰)。经灰色关联度分析发现,24个峰与睡眠持续时间的关联度均大于0.6(0.6115~0.8118),与入睡潜伏期的关联度除14、24、2号峰外,其余均大于0.6(0.6059~0.7904);与入睡率的关联度除23、19、17、5号峰外,其余均大于0.6(0.6064~0.7216);与总药效的关联度除2、5、19号峰外,其余均大于0.6(0.6190~0.7812);与总药效关联度排名前10位的色谱峰分别为15号峰(猪苓酸C)、16号峰、8号峰、11号峰、12号峰(茯苓酸A)、1号峰、7号峰(16α-hydroxytrametendic acid)、3号峰、9号峰(茯苓酸B)、20号峰(去氢茯苓酸)。结论:本研究建立了茯苓水提物的UPLC指纹图谱,指认了11个共有峰成分;猪苓酸C等10种成分与镇静催眠总药效关联较大,初步揭示了茯苓镇静催眠作用的药效物质基础。     

基于UPLC/QTOF-MS的代谢组学研究辛伐他汀对不同性别小鼠尿液中代谢物的影响

目的:基于代谢组学技术研究辛伐他汀对小鼠尿液中脂类代谢物的影响。方法:收集给予药物辛伐他汀后不同天数的小鼠尿液样品,采用超高效液相色谱-高分辨飞行时间质谱(UPLC/Q-TOF MS)联用,Acquity BEH C₁₈色谱柱,流动相为水-乙腈,梯度洗脱,电喷雾离子源,负离子检测模式,通过数据采集进行代谢轮廓分析。采用MarkerLynxXS软件读取总离子流色谱图中峰信息,利用主成分分析和正交偏最小二乘法-判别分析对样品进行分类。筛选出候选的差异代谢物后,通过一级、二级质谱碎片信息,比对数据库鉴别差异代谢物的结构。结果:给药辛伐他汀后,雌鼠和雄鼠的体质量增长速率存在差异,尿液中的代谢物变化有所不同。鉴定出棕榈酸、胆甾烷五醇、羟睾酮葡糖醛酸苷、硝基亚油酸胆固醇、磷脂酸和磷脂酰乙醇胺共6个脂类代谢差异物,呈现出对体内脂类代谢的影响,在雌雄个体中呈现不同的变化规律。结论:研究结果提示辛伐他汀的临床用药需要考虑性别差异的因素。     

UPLC法测定度鲁特韦有关物质含量

目的:建立测定度鲁特韦原料药有关物质含量的超高效液相色谱方法。方法:色谱柱为Waters BEH C 18(2.1 mm×150 mm×1.7μm),流动相:10 mmol·L-1甲酸铵溶液(pH=2.5)为流动相A,乙腈为流动相B,梯度洗脱:0~15 min,流动相B 20%~80%,柱温30℃,流速0.28 mL·min-1,进样量1.0μL,检测波长246 nm。结果:度鲁特韦与各杂质之间的分离度均>1.5;杂质A~D的检测限和定量限分别为8 ng·mL-1和25 ng·mL-1;度鲁特韦浓度和杂质A~D浓度在相应浓度范围内与峰面积线性关系良好,相关系数r均>0.998;杂质A~D加样回收率均在80.0%~120.0%之间,RSD<5.0%(n=9),度鲁特韦含量准确度结果在99.0%~101.0%范围内,RSD<0.2%(n=9),3批原料药含量结果分别为99.79%,99.77%,100.03%,杂质A分别为0.10%,0.10%,0.11%,杂质B、C均未检出,未知单杂均小于0.05%,总杂分别为0.15%,0.13%,0.14%。结论:本研究建立的UPLC法,专属性强,重复性好,灵敏度和准确度高,可作为度鲁特韦原料药有关物质和含量的控制方法。     

UPLC法同时测定淫羊藿中5种黄酮类成分的含量

目的建立同步测定中药材淫羊藿中朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、宝藿苷I 5种黄酮类成分含量的UPLC-DAD法。方法采用Aglientl290型超高效液相色谱仪,色谱柱为Aglient Zorlbax EclipsePlus C_(18)柱(50mm×2.1mm,1.8μm),柱温为40℃。流动相为乙腈和0.1%磷酸水,梯度洗脱,流速为0.4mL/min,进样量为1μL,检测波长为270nm。结果淫羊藿药材中5种黄酮类成分分别在2.02~202μg/mL、2.12~212μg/mL、2.14~214μg/mL、2.52~252μg/mL和1.12~112μg/mL的浓度范围内呈良好的线性关系,最低检测限分别为2.82、3.03、2.72、3.09、1.23ng/mL。重复性、稳定性试验结果的RSD值均小于3%,各成分平均回收率分别为99.76%、98.96%、98.76%、98.67%和98.65%。同时对14批不同药房或产地的药材中5种黄酮类成分的含量进行了检测。结论该方法快速简便、准确可靠,各主要化学成分均能达到基线分离,适用于淫羊藿药材的多成分分析,进而为淫羊藿药材质量控制的全面评价提供科学依据。     

建立UPLC法测定复方氨基酸胶囊(9-5)中氨基酸的含量

目的通过优化色谱条件建立UPLC法测定复方氨基酸胶囊(9-5)中氨基酸的含量。方法以9种氨基酸对照为外标物,异硫氰酸苯酯为柱前衍生剂,采用ACQUITY UPLCBEH C_(18)(2.1 mm×100 mm,1.7μm)柱,流动相A为0.1 mol/L的醋酸钠溶液(用冰醋酸调整pH至6.50)-乙腈(93∶7),流动相B为乙腈-水(4∶1),检测波长254 nm,流速为0.45 mL/min,柱温36℃。结果复方氨基酸胶囊(9-5)中9种氨基酸出峰时间与对照品出峰时间一致,其他物质无干扰;仪器精密度RSD为0.5%~1.2%,中间精密度RSD为1.3%~1.9%;各氨基酸的溶液浓度与其峰面积线性关系良好(r≥0.999),溶液稳定性RSD为0.6%~1.8%,各氨基酸的平均回收率在95.0%~105.0%之间。含量测定方法比对实验中UPLC法与HPLC法分析结果无明显差异,分析速度明显提高。结论建立的UPLC法高效,快速,灵敏,准确,可用于测定复方氨基酸胶囊(9-5)中氨基酸的含量。     

UPLC法测定小儿氨咖黄敏颗粒中对乙酰氨基酚、咖啡因和马来酸氯苯那敏的含量

目的使用超高效液相色谱(UPLC)法建立测定小儿氨咖黄敏颗粒中3种西药成分含量的方法。方法色谱柱为Acquity UPLC~BEH C18柱(7.5cm×0.21cm,1.7μm);柱温为35℃;流动相为0.03mol·L-1磷酸氢二铵溶液-乙腈(88∶12);检测波长为214nm。结果线性范围为:对乙酰氨基酚0.149~1.489μg,r=0.999 8;咖啡因0.010~0.101μg,r=0.999 4;马来酸氯苯那敏0.005~0.082μg,r=0.999 9。平均回收率:对乙酰氨基酚99.3%,RSD=0.42%;咖啡因98.8%,RSD=0.50%;马来酸氯苯那敏99.5%,RSD=0.78%。结论相对于现行药品执行标准中的含量测定方法,UPLC法测定3种西药含量更准确、方便,可较好地控制小儿氨咖黄敏颗粒的质量。     

UPLC测定不同产地半夏药材及其炮制品中的草酸钙

目的 采用UPLC法测定半夏药材及其炮制品中草酸钙的含量.方法 色谱柱为Acquity UPLC BEH C18柱(50 mm×2.1 mm,1.7 μm),流动相为0.5％ (NH4)H2PO4缓冲液(磷酸调pH2.8),流速0.5 mL· min-1,柱温30 ℃,检测波长210 nm.结果 线性方程为:y=1.8488×104X+4.146×103(r=0.9999),2.58 ～ 25.80 μg· mL-1草酸与峰面积的线性关系良好,平均加样回收率为98.58％,RSD=1.01％(n=9).结论 所用方法准确可靠,可为半夏药材的质量控制提供参考.     

一测多评法测定藏药小米辣中3种辣椒碱的含量

目的：建立藏药小米辣中3种辣椒碱类化学成分含量测定的一测多评法,探讨一测多评法在民族药质量控制中的应用。方法：采用超高压液相色谱法,使用Waters ACQUITY BEH C18（2.1 mm×100mm,1.7 μm）色谱柱,流动相为乙腈-水（50︰50）,流速：0.2 mL·min^-1,柱温30℃,检测波长280 nm,进样量1 μL。以辣椒素为内参物,分别建立二氢辣椒素、降二氢辣椒素相对于辣椒素的相对校正因子,分别采用外标法和一测多评法测定3种辣椒碱的含量,并通过相对标准偏差（RSD）和Pearson系数比较二者结果的相对误差。结果：降二氢辣椒素、辣椒素、二氢辣椒素进样量分别在2.21~22.1 ng、8.96~89.6 ng、3.75~37.5 ng范围内线性关系良好;降二氢辣椒素和二氢辣椒素相对于辣椒素的相对校正因子分别为0.970和1.159;且在不同实验条件下重现性良好（RSD < 3.0%）;一测多评法的计算结果与外标法测得结果无显著差异。10批不同产地小米辣样品中降二氢辣椒素、辣椒素和二氢辣椒素的含量范围分别为0.0281%~0.0534%、0.258%~0.389%和0.115%~0.209%。结论：建立的一测多评法可作为小米辣中3种辣椒碱类化学成分的含量测定方法,一测多评法为民族药质量控制提供了一个新的模式与方法。     

UPLC法测定银杏叶茶中总黄酮醇苷的含量

目的建立银杏叶茶中槲皮素、山柰素和异鼠李素的超高效液相色谱分析法。方法色谱柱:Thermo Scientific AcclaimTM RSLC 120C18 ODS(100mm×2.1mm,2.2μm);流动相:甲醇-4mL·L~(-1)磷酸溶液(50∶50);流速:0.3mL·min~(-1);检测波长:360nm。结果槲皮素在4.503~90.06ng、山柰素在3.586~71.72ng、异鼠李素在2.111~42.22ng范围内线性关系良好;平均回收率分别为98.95%(RSD=0.87%),98.80%(RSD=0.90%)和98.78%(RSD=1.39%)。结论该方法简单,分析速度快,准确度高,可用于快速检测银杏叶茶中总黄酮醇苷的含量。