基于UPLC/QTOF-MS的代谢组学研究辛伐他汀对不同性别小鼠尿液中代谢物的影响

目的:基于代谢组学技术研究辛伐他汀对小鼠尿液中脂类代谢物的影响。方法:收集给予药物辛伐他汀后不同天数的小鼠尿液样品,采用超高效液相色谱-高分辨飞行时间质谱(UPLC/Q-TOF MS)联用,Acquity BEH C₁₈色谱柱,流动相为水-乙腈,梯度洗脱,电喷雾离子源,负离子检测模式,通过数据采集进行代谢轮廓分析。采用MarkerLynxXS软件读取总离子流色谱图中峰信息,利用主成分分析和正交偏最小二乘法-判别分析对样品进行分类。筛选出候选的差异代谢物后,通过一级、二级质谱碎片信息,比对数据库鉴别差异代谢物的结构。结果:给药辛伐他汀后,雌鼠和雄鼠的体质量增长速率存在差异,尿液中的代谢物变化有所不同。鉴定出棕榈酸、胆甾烷五醇、羟睾酮葡糖醛酸苷、硝基亚油酸胆固醇、磷脂酸和磷脂酰乙醇胺共6个脂类代谢差异物,呈现出对体内脂类代谢的影响,在雌雄个体中呈现不同的变化规律。结论:研究结果提示辛伐他汀的临床用药需要考虑性别差异的因素。     

一种AP-2α选择性剪切的发现及其在MCF-7细胞中的功能研究

目的研究AP-2α的一种选择性剪切及其对MCF-7细胞生物学功能的影响。方法构建AP-2α基因表达质粒,得到pAP-2α和一个C-端编码产物完全不同于AP-2α的选择性剪切pAP-2αas表达质粒。通过荧光素酶法检测pAP-2αas和pAP-2α对含存活素(survivin)启动子核心序列的荧光素酶报告质粒pLuc-441活性影响的差异;并通过药物敏感性实验观察pAP-2αas和pAP-2α对乳腺癌细胞MCF-7药物敏感性影响的差异。结果采用荧光素酶法检测共转染pAP-2αas和pLuc-441的MCF-7细胞中survivin启动子活性,与对照pAP-2α相比,pAP-2αas也能抑制pLuc-441活性,但抑制的强度低于前者;药物敏感性实验显示,在MCF-7细胞中,转染pAP-2αas显著提高了药物敏感性,与pAP-2α产生的生物学功能近似。结论 AP-2αas作为一种体内的特异性剪切形式,具有和通常AP-2α相似但不完全相同的功能,推测这是基因表达调控的特殊方式,AP-2α对基因表达的调节在某些情况下可以不通过直接结合启动子发挥作用。     

4(3H)-喹唑啉酮衍生物的合成及体外抗肿瘤活性

将6-溴甲基-2-甲基-4(3H)-喹唑啉酮在无水磷酸钾存在下与二硫化碳以及不同的胺反应，合成了一系列具有二硫代氨基甲酸酯侧链的4(3H)-喹唑啉酮衍生物，其结构经ESI-MS，¹H NMR，元素分析或HRMS所证实。采用MTT法测定了目标化合物8a~8q对人慢性髓性白血病K562细胞和人宫颈癌Hela细胞的体外抗肿瘤活性，结果表明化合物8q对K562和Hela细胞的体外生长具有显著的抑制作用，IC₅₀值分别为0.5和12.0 μmol·L^-1，因而可作为抗肿瘤药物研究的先导化合物。     

肌酸激酶结构与功能研究进展

目的综述肌酸激酶的结构与功能研究进展以及应用。方法根据近年来的文献 ,介绍了肌酸激酶的结构、在不同条件下伴随构象变化其功能的改变机制、生理功能的研究进展以及实际应用。结果肌酸激酶是研究蛋白质体内折叠的机制的理想模型 ,已经取得了突破性的进展 ,为生物大分子的结构与功能理论提供了依据。肌酸激酶具有重要的生理功能 ,目前在临床如肿瘤检测方面已有广泛的应用。结论对肌酸激酶的结构与功能的研究 ,将会广泛地应用于临床诊断、新药研究等方面。     

液质联用法测定奶粉中单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM1)的含量

目的建立奶粉中单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM1)的含量测定方法。方法通过有机溶剂提取和C18SPE小柱对样品进行处理,采用RP-HPLC与MS联用法测定。色谱柱为Waters C4300A柱(2.1 mm×100 mm,3.5μm),流动相为乙酸铵-甲醇溶液,梯度洗脱,MS检测器选用负离子SIR模式。结果分析测定无干扰,GM1质量浓度在0.500~50.0μg.L-1内与峰面积呈良好的线性关系,定量限为0.500μg.L-1,批内与批间RSD均小于5%,回收率在94.4%~113.8%内。结论该法专属性强、灵敏度高、结果准确、重现性好,适用于奶粉中GM1的定量分析。     

Pokemon 基因对MCF-7 细胞增殖的影响

目的转染Pokemon表达载体到MCF-7细胞中,探究Pokemon对乳腺癌细胞增殖的影响。方法构建Pokemon基因表达质粒,瞬时转染Pokemon表达质粒到乳腺癌细胞中,Westernblot检测pokemon的蛋白水平表达情况,通过MTT和平板克隆形成试验法观察Pokemon对乳腺癌细胞增殖及克隆形成能力的影响。结果MTT法显示,随着培养时间的增加,MCF-7细胞在转染Pokemon后的生长速度明显增加;细胞平板克隆形成试验显示,MCF-7细胞在转染Pokemon后克隆数明显增加,由此可以说明Pokemon能增强癌细胞MCF-7克隆形成能力。结论Pokemon作为一个致癌基因,能促进乳腺癌MCF-7细胞系的增殖并增加其克隆形成能力。     

人肝癌细胞中原癌基因Pokemon上调Shp2的表达

目的研究人肝癌细胞中Pokemon对Shp2表达的影响。方法通过RT-PCR、Real time PCR和Western blot方法检测人肝癌细胞系QGY-7703和人正常肝细胞系HL-7702中Pokemon和Shp2的mRNA和蛋白表达水平差异;并通过瞬时转染si-Pokemon RNA沉默QGY-7703细胞中Pokemon使其低表达,再检测Shp2的mRNA和蛋白水平变化。结果 Pokemon在人肝癌细胞系QGY-7703中的表达水平高于人正常肝细胞系HL-7702,Shp2的表达水平高低与Pokemon表达一致;在QGY-7703细胞中沉默Pokemon表达之后,Shp2的表达也相应降低。结论原癌基因Pokemon作为一种转录因子,可能调控Shp2的表达。