纳米石墨碳对人L-02细胞系生长状况的影响

目的研究纳米石墨碳对人正常肝细胞系L-02生长状况的影响。方法电子显微镜观察纳米石墨碳颗粒的形态,激光粒度分析仪测定其粒径及Zeta电位;流式细胞术检测纳米石墨碳作用24 h对L-02肝细胞生长周期的影响;电镜观察细胞剖面,用以考察纳米石墨碳颗粒对L-02肝细胞亚显微结构的影响。结果电镜下纳米石墨碳颗粒呈微小球形,粒径在20～50 nm,表面带负电荷,电位值为-14.8 mV;流式细胞检测结果示实验组L-02肝细胞G0/G1细胞百分数低于对照组,G2/M细胞百分数高于对照组,S期细胞百分数高于对照组;电镜观察纳米石墨碳在细胞质和细胞核内均有分布,实验组肝细胞内的线粒体与对照组无明显差异,胞膜核膜均完整。结论纳米石墨碳颗粒促进了L-02肝细胞的增殖,纳米石墨碳颗粒可以很好地进入到L-02肝细胞内部,未见其对细胞亚显微结构造成损伤。     

病窦综合征的离子机制研究进展

近年来,病窦综合征的电生理机制的研究取得了诸多进展,对病窦综合征机制的研究已深入到离子通道水平。"膜钟"是指位于细胞膜上具有电压依赖性的膜离子通道的周期性激活与失活。"钙钟"是指局部肌浆网的兰尼碱受体的钙释放可促发内向的钠钙交换电流。"膜钟"和"钙钟"共同参与窦房结起搏活动的调控已成为共识,同时它们的异常在病窦综合征的进展中也起着重要的作用。     

槲皮素抑制异烟肼诱导的L-02细胞线粒体氧化应激性DNA损伤

目的:探讨活性氧(ROS)介导的线粒体氧化损伤在异烟肼(INH)诱导L-02细胞DNA损伤中的作用及槲皮素对细胞的保护作用。方法:建立体外培养INH致肝细胞L-02损伤的模型,将细胞分为对照(control)组、INH组、槲皮素低剂量(Que low)及高剂量(Que high)组。利用彗星试验评价细胞DNA损伤;制备L-02细胞线粒体,应用荧光探针DCFH-DA和rhodamine 123检测细胞线粒体ROS水平及线粒体膜电位(ΔΨm);采用TBA法测定丙二醛(MDA)含量;应用黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)的活性;采用Western blotting法检测细胞中Bcl-2和Bax蛋白表达,计算Bax/Bcl-2值。结果:INH可诱导L-02细胞DNA损伤,使细胞线粒体ROS水平、细胞MDA含量及Bax/Bcl-2值明显增高,并使细胞ΔΨm值和SOD活性明显下降。而槲皮素能减轻细胞DNA损伤,减少细胞ROS水平,增加细胞ΔΨm值,降低细胞MDA含量,增加SOD活性,减少Bax/Bcl-2值。结论:INH可通过诱导细胞线粒体氧化应激导致L-02细胞DNA损伤。槲皮素能减轻INH诱导L-02细胞的DNA损伤,对L-02细胞具有保护作用,可能与其抑制ROS介导的线粒体氧化损伤有关。     

Alterations of intestinal immune function and regulatory effects of L-arginine in experimental severe acute pancreatitis rats

ABM: To discuss the changes of intestinal mucosal immune function in rats with experimental severe acute pancreatitis (SAP) and the regulatory effect of L-arginine. METHODS: Male adult Wistar rats were randomly divided into pancreatitis group, sham-operation group, and L-arginine treatment group. Animals were killed at 24, 48, and 72 h after SAP models were developed and specimens were harvested. Endotoxin concentration in portal vein was determined by limulus endotoxin analysis kit. CD3+, CD4+, CD8+ T lymphocytes in intestinal mucosal lamina propria were examined by immunohistochemistry. Secretory immunoglobulin A (SIgA) in cecum feces was examined by radioimmunoassay. RESULTS: Compared to the control group, plasma endotoxin concentration in the portal vein increased, percentage of CD3+ and CD4+ T lymphocyte subsets in the end of intestinal mucosal lamina propria reduced significantly, CD4+/CD8+ ratio decreased, and SIgA concentrations in cecum feces reduced at 24, 48, and 72 h after SAP developed. Compared to SAP group, the L-arginine treatment group had a lower level of plasma endotoxin concentration in the portal vein, a higher CD3+ and CD4+ T lymphocyte percentage in the end of intestinal mucosal lamina propria, an increased ratio of CD4+/CD8+ and a higher SIgA concentration in cecum feces. CONCLUSION: Intestinal immune suppression occurs in the early stage of SAP rats, which may be the main reason for bacterial and endotoxin translocation. L-arginine can improve the intestinal immunity and reduce bacterial and endotoxin translocation in SAP rats.     

c-jun末端激酶在亚砷酸钠致人胚胎肝细胞损伤中的表达

目的探讨亚砷酸钠染毒对人胚胎肝(L-02)细胞中c-jun末端激酶(JNK)的变化。方法将处于对数生长期的L-02细胞分别暴露于终浓度为0(对照)、50、100、150μmol/L的亚砷酸钠溶液中培养24 h,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞生长情况,采用流式细胞术检测染毒24 h时的细胞周期及细胞凋亡率;采用蛋白杂交(Western-blot)法检测JNK及p-JNK的蛋白表达水平。结果与对照组相比,各浓度亚砷酸钠染毒组L-02细胞的存活率及G0-G1期构成比均较低,JNK、p-JNK的蛋白表达水平和S期构成比及凋亡率均较高;而G2-M期构成比在50μmol/L亚砷酸钠染毒组较低,在100、150μmol/L亚砷酸钠染毒组均较高,差异均有统计学意义(P0.05)。且随着亚砷酸钠染毒浓度的升高,L-02细胞凋亡率及JNK和p-JNK蛋白的表达水平均呈上升趋势,细胞存活率呈下降趋势。结论亚砷酸钠诱导L-02细胞凋亡可能与JNK及p-JNK表达的增加有关。     

L—精氨酸对动脉损伤后血浆α颗粒膜蛋白、纤溶活性和动脉内膜增生影响的实验研究

采用兔髂动脉球囊内皮剥脱术建立血管成形术动物模型,观察一氧化氮(NO)的前体L一精氨酸(L-Arg)对动脉损伤后血浆α颗粒膜蛋白(GMP-140)、组织型纤溶酶原激活物(tPA)、纤溶酶原激活物抑制物(PAI-1)的动态变化和动脉新生内膜形成的影响.结果表明,对照组术后6h、24h、48h血浆GMP-140活性明显高于正常水平,并于24h达到高峰,1周回到基础值;同时tPA活性明显受到抑制,PAI-1活性升高.L-Arg可显著降低血浆GMP-140活性,并伴有tPA升高,PAI一1下降(两组比较P<0.05或P<0.01).4周后动脉新生内膜面积、新生内膜面积/中膜面积比值明显降低(两组比较P<0 .01).提示L一Arg可明显抑制动脉损伤后血小板的活化,激活纤溶系统,使动脉中层平滑肌细胞的增殖减轻,达到降低新生内膜形成的目的.     

葛根素对大鼠海马CA1区锥体细胞L-型钙通道的影响

目的观察不同浓度葛根素对大鼠海马CA1区锥体细胞L-型钙离子通道的作用。方法采用酶加机械分离法,急性分离出成年大鼠海马CA1区锥体细胞后,将含有锥体细胞的细胞悬液滴加于盖玻片上,待贴壁后选取符合实验条件的细胞,运用膜片钳单通道技术记录同一钳制电压下离子通道活动情况。结果低浓度葛根素(1.2mmol/L、2.4mmol/L)对L-型钙离子通道的活动无明显影响;浓度达到4.8mmol/L、9.6mmol/L时,L-型钙离子通道平均开放时间对照组由(11.77±4.84)ms缩短到(7.95±2.51)ms和(4.53±0.83)ms(P<0.05),浓度进一步增加到19.2mmol/L时,通道开放时间降至(3.042±0.792)ms。当葛根素达到一定浓度(4.8mmol/L,9.6mmol/L)时,通道开放概率对照组由(1.1×10-3±1.0×10-4)%降低到(5.3×10-4±1.8×10-4)%和(3.2×10-4±1.3×10-4)%,随着浓度的进一步增加(19.2mmol/L),开放概率降至(2.1×10-3±9.0×10-5)%。结论葛根素可以抑制单个大鼠海马CA1区锥体细胞L-型钙离子通道活动,减少通道开放时间,降低通道开放概率。     

L-精氨酸对糖尿病大鼠NO-cGMP信号通路的影响

目的探讨L-精氨酸（Arg）对糖尿病（DM）大鼠一氧化氮（NO）-环磷酸鸟苷（cGMP）信号通路的调控作用。方法给大鼠腹腔注射链脲佐菌素制备DM模型，随机分为DM组、L—Arg治疗组及正常对照组；用药12W末处死大鼠，测定3组大鼠血糖、胰岛素含量以及血浆、心肌、肾脏、睾丸组织中NO、cGMP含量和NOS活性。结果DM组大鼠血糖含量较正常对照组显著升高（P〈0．01），而胰岛素水平（P〈0．01）及血浆、心肌、肾脏、睾丸组织NO水平（分别P〈0．01，P〈0．05，P〈0．05，P〈0．01）和血浆、心肌、睾丸组织cGMP含量（分别P〈0．01，P〈0．01，P〈0．05）及血浆、肾脏、睾丸组织一氧化氮合酶（NOS）活性（分别P〈0．01，P〈0．01，P〈0．05）均较正常对照组明显降低；L—Arg可明显降低DM大鼠血糖水平（P〈0．01），增加胰岛素含量（P〈0.01），同时显著增加血浆、心肌、肾脏、睾丸组织NO水平和血浆、心肌、睾丸组织cGMP含量及血浆、睾丸组织NOS活性（均P〈0．01）。结论DM大鼠NO-cGMP信号通路存在缺陷，L—Arg对DM大鼠NO—cGMP信号通路具有调控作用。     

Timothy综合征--一种新的L-型钙通道基因突变引起的综合征

随着心律失常研究的深入，致病基因不断被发现，基因型与临床表型的复杂关系正在逐步被认识。与长QT综合征、Brugada综合征一样，近几年来对钙离子通道基因异常引起的心律失常如儿茶酚胺性多形室速（catecholaminergic polymorphic ventficular tachycardia，CPVT）或家属性多形室速（family polymorphic ventricular tachycardia，FPVT）、致心律失常性右心室心肌病2型（arrhythmogenic right ventricular caldiomyopathy type2（ARVC2）有了更新的认识。2004年10月1日Splawski等在《Cell》杂志又描述了一种新的钙通道病并将其命名为“Timothy综合征”（Timothy syndrome），为钙通道心律失常研究叉进了一步。     

大豆异黄酮对培养心肌细胞钙电流和动作电位的影响

目的 观察大豆异黄酮（SI）对大鼠心肌细胞动作电位的影响和培养心室肌细胞钙电流的作用。方法 采用悬浮玻璃微电极法和全细胞膜片钳方法。结果 SI能剂量依赖性地降低动作电位幅值（APA）、超射（OS）、最大除极速率（Vmax）、缩短复极50％及90％水平的动作电位时程（APD50、APD90）；SI 0.1pg/ml对L-型钙电流可见不同程度的抑制作用。结论 SI可使心肌细胞动作电位除极参数降低，动作电位时程缩短，对钙电流的抑制作用可减轻心肌细胞钙超载，进而保护心肌。