槲皮素对INH诱导的大鼠肝损伤及肝组织Bcl-2和Bax表达的影响

目的探讨槲皮素对异烟肼(INH)致大鼠肝损伤的保护作用。方法将动物随机分为正常对照组、INH组、槲皮素低剂量组、槲皮素高剂量组,灌胃染毒,每天1次,14d后测定大鼠血清中天冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)的活性,肝匀浆中丙二醛(MDA)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活性,用Westernblot法检测肝组织中Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果与正常对照组比较,INH组大鼠血清AST和ALT的活性增强,肝组织的MDA含量升高,SOD和GSH-Px活性降低,Bcl-2蛋白表达减少,而Bax蛋白表达增加;高剂量槲皮素可减轻INH所致的损伤。结论槲皮素对INH所致的大鼠肝损伤具有保护作用,可能与其抗脂质过氧化作用及调节凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达有关。     

第三丁基过氧化氢损伤皮层神经元线粒体并诱导凋亡

目的：探讨第三丁基过氧化氢（t-BHP）诱导大鼠皮层神经元凋亡的可能机制。 方法： 体外培养大鼠皮层神经元，MTT法测定细胞存活率，DNA断裂评价细胞凋亡，流式细胞术测定线粒体跨膜电位（ΔΨm），分光光度计法测定细胞内谷胱甘肽（GSH）浓度，Western blot法测定Bcl-2和Bax蛋白和胞浆细胞色素c以及活化型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（caspase-3）和多聚（ADP-核糖）聚合酶（PARP）水平。 结果： tBHP（25－400 μmol/L）可明显抑制皮层神经元的生长，引起ΔΨm下降和线粒体内细胞色素c向胞浆释放，同时细胞内GSH浓度以及Bcl-2蛋白水平下降，Bax蛋白水平增加，caspase-3和PARP得以激活并最终导致神经细胞凋亡。 结论： tBHP引起的氧化应激可通过损伤线粒体诱导皮层神经元凋亡。     

异土木香内酯通过介导ROS 产生及线粒体损伤诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡

目的:探讨异土木香内酯通过介导ROS 产生及线粒体损伤诱导人宫颈癌Hela 细胞凋亡机制。方法:不同终浓度异土木香内酯体外诱导Hela 细胞24 h 及加入抑制剂NAC 作为实验组,以正常细胞作为对照组,MTT 测定细胞活性;Hoechst 33258 染色观察Hela 细胞凋亡细胞核变化;流式细胞仪检测细胞凋亡及周期和ROS 产生变化和MMP 水平;Western blot 方法测定细胞色素C 蛋白、Bcl-2、Bax 和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase-3)蛋白表达水平。结果:异土木香内酯以浓度依赖性抑制Hela 细胞生长;20 mol/ L 和40 mol/ L 终浓度异土木香内酯处理Hela 细胞24 h 后,细胞核出现典型的核固缩及核碎裂凋亡形态,细胞凋亡率增加,可抑制细胞生长于S 期,细胞内均可诱导ROS 的产生。ROS 抑制剂NAC 可以明显阻断异土木香内酯对Hela 细胞生长的抑制作用,降低细胞凋亡率;20 mol/ L 和40 mol/ L 终浓度异土木香内酯处理Hela 细胞24 h后,Bax 蛋白表达水平明显增加而Bcl鄄2 蛋白表达水平明显降低,同时Caspase-3 蛋白也被活化,出现cleaved Caspase 蛋白,线粒体内细胞色素C 蛋白释放增加。结论:异土木香内酯在体外可通过介导ROS 产生及线粒体损伤来抑制人宫颈癌Hela 细胞生长且诱导其凋亡,且伴随Bax 蛋白表达上调、Bcl-2 蛋白表达下调及Caspase-3 活化相关变化。     

白桦脂酸对 H2O2 诱导的 PC12 神经细胞氧化损伤和细胞凋亡影响 #br#

目的探讨白桦脂酸对 H2O2诱导的 PC12 神经细胞氧化损伤和凋亡的影响。 方法PC12 神经细胞分成 Control、 Model (H2O2刺激)、 BA-L (1 μmol / L 的白桦脂酸和 H2O2刺激)、 BA-M (2 μmol / L 的白桦脂酸和 H2O2刺激)、 BA-H (4 μmol / L 的白桦脂酸和 H2O2 刺激)、 BA-H + PMA 组 (1 μmol / L 的白桦脂酸、H2O2 、 NF-κB 信号通路激活剂 PMA 刺激), CCK-8 方法分析细胞增殖活性变化, 流式细胞术分析细胞凋亡水平变化, Western 印迹分析细胞中 Bax、 Bcl-2、 P65 蛋白表达变化, 黄嘌呤氧化法检测 SOD 水平, 比色法检测 GSH-Px 水平、 硫代巴比妥酸法检测 MDA 水平、 CellROX Green 荧光法检测 ROS 水平。 结果与 Control 组比较, Model 组 PC12 神经细胞增殖活性降低, 细胞凋亡率升高, 细胞中 Bax 蛋白表达水平升高, Bcl-2蛋白表达水平降低, SOD、 GSH-Px 活性降低, MDA、 ROS 水平升高, P65 蛋白水平升高。 与 Model 组比较,BA-L、 BA-M、 BA-H 组 PC12 神经细胞增殖活性逐渐升高, 细胞凋亡率逐渐降低, 细胞中 Bax 蛋白表达逐渐减少, Bcl-2 蛋白表达逐渐增加, SOD、 GSH-Px 活性逐渐升高, MDA、 ROS 水平逐渐降低, P65 蛋白水平逐渐降低。 与 BA-H 组比较, BA-H + PMA 组 C12 神经细胞增殖活性降低, 细胞凋亡率升高, 细胞中 Bax、P65 蛋白表达增多, Bcl-2 蛋白表达减少, SOD、 GSH-Px 活性降低, MDA、 ROS 水平升高。 结论白桦脂酸通过下调 NF-κB 信号抑制 H2O2诱导的 PC12 神经细胞氧化损伤和细胞凋亡。     

芒果苷对H_2O_2诱导的BRL细胞氧化损伤的保护作用

目的探讨芒果苷对过氧化氢诱导的正常大鼠肝BRL细胞氧化损伤的保护作用。方法选取正常大鼠肝细胞株BRL,通过过氧化氢诱导法制备细胞氧化损伤模型,实验设对照组、H_2O_2组、芒果苷组。HE染色、台盼蓝染色观察细胞形态变化和存活率变化;比色法检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量;Western blot检测细胞中Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达变化。结果对照组BRL细胞贴壁生长良好,排列紧密。H_2O_2诱导后细胞形态不规则,胞膜皱缩,贴壁能力下降;细胞存活率降低;抗氧化酶SOD、GSH-Px活性降低,MDA含量升高(P0.05);Bax和Caspase-3蛋白表达升高(P0.05)、Bcl-2蛋白表达降低(P0.05)。与H_2O_2组相比,芒果苷可显著改善H_2O_2引起的细胞形态变化,提高细胞存活率;提高SOD、GSH-Px活性,降低MDA含量(P0.05);抑制Bax和Caspase-3蛋白表达(P0.05),上调Bcl-2蛋白表达(P0.05)。结论芒果苷对BRL细胞氧化损伤具有保护作用,其作用机制可能与其提高细胞清除氧自由基能力和抑制细胞凋亡有关。     

槲皮素抑制鱼藤酮诱导的PC12细胞凋亡

目的: 探讨槲皮素对鱼藤酮诱导的PC12细胞凋亡的影响及其作用机制。方法: 运用鱼藤酮诱导损伤PC12细胞,经300 μmol/L槲皮素预处理后,观察细胞形态学改变,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting检测Bax和Bcl-2蛋白的表达,JC-1染色检测细胞线粒体膜电位,比较各组的差异。结果: 与鱼藤酮组相比,槲皮素加鱼藤酮处理组细胞形态明显改善,凋亡率降至6.3%(P<0.01),Bcl-2表达增加(P<0.01),Bax表达降低(P<0.01),线粒体膜电位上升(P<0.01)。结论: 槲皮素对鱼藤酮诱导的PC12细胞凋亡具有抑制作用,上调Bcl-2和下调Bax蛋白的表达,维持线粒体膜电位可能是其作用的机制之一。     

丙泊酚减轻H2O2诱导的心肌细胞系H9C2损伤

目的研究丙泊酚对过氧化氢(H_2O_2)诱导的心肌细胞系H9C2损伤及活性氧(ROS)水平的影响。方法将心肌细胞分成对照组、H_2O_2处理组和15、30和60μmol/L丙泊酚干预组。MTT检测细胞活力;二硝基苯肼显色法检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出率;流式细胞计量术检测细胞凋亡;Western blot检测细胞中激活型caspase-3(cleaved caspase-3)、胞质和线粒体中细胞色素C(cytochrome C)蛋白水平;黄嘌呤氧化法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性;钼酸铵法检测过氧化氢酶(CAT)活性;二硫代二硝基苯甲酸法检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性;硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA)含量;二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯法检测ROS活性;JC-1法检测线粒体膜电位。结果与对照组比较,H_2O_2处理组细胞活力降低;LDH漏出率和凋亡率升高;cleaved caspase-3蛋白水平及胞质中cytochrome C水平升高;线粒体cytochrome C水平降低;SOD、CAT和GSH-Px活性降低;MDA及ROS含量升高;线粒体膜电位下降(P0.05)。与H_2O_2处理组比较,15、30和60μmol/L丙泊酚组细胞活性升高;LDH漏出率降低;凋亡率和cleaved caspase-3水平降低;胞质中cytochrome C蛋白水平减少;线粒体中cytochrome C水平升高;细胞SOD活性、CAT活性和GSH-Px活性升高;MDA含量和ROS含量降低;线粒体膜电位升高(P0.05)。结论丙泊酚可以减轻H_2O_2诱导的心肌细胞损伤,减少细胞凋亡并降低细胞ROS水平。     

交变磁场作用下磁性Fe3O4纳米粒子诱导肝癌细胞凋亡机制

目的:观察磁性四氧化三铁纳米粒子(Fe3O4)在交变磁场(EMF)作用下对肝癌细胞凋亡相关因子的影响。方法:培养大鼠肝癌CBRH-7919细胞,分为正常对照组、交变磁场照射组、100μg/m L Fe3O4纳米粒子组、交变磁场+100μg/m L纳米Fe3O4组。酶生化法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量;Western Blot检测Bax、Bcl-2表达及细胞色素C从线粒体至胞浆的释放;荧光酶标仪测定Caspase-3活性。结果:交变磁场协同磁性Fe3O4纳米粒子作用于CBRH-7919细胞能使Bax表达上调,而凋亡抑制基因Bcl-2表达下调,促进细胞色素C从线粒体释放至胞浆,增加Caspase-3活性。交变磁场、磁性Fe3O4纳米粒子单独作用组对结果无影响。结论:在交变磁场作用下,Fe3O4纳米粒子诱导CBRH-7919细胞凋亡的机制与Bax表达增加、Bcl-2表达减少、细胞色素C的释放及Caspase-3活性增加有关。     

绞股蓝不同有效成分对氧化损伤内皮细胞线粒体膜电位的影响

目的探讨绞股蓝不同成分(绞股蓝总皂苷Gps、绞股蓝皂苷XILX GpXILX、绞股蓝皂苷A GpA、人参皂苷GRb3)对氧化低密度脂蛋白诱导内皮细胞氧化应激损伤线粒体膜电位的影响。方法采用CCK-8法分别观察不同浓度Gps、GpXILX、GpA、GRb3对EA.Hy926细胞活力的影响,明确它们作用于EA.Hy926细胞的浓度;采用ox-LDL诱导氧化应激损伤模型,分别予Gps、GpXILX、GpA、GRb3处理24h。用微量法检测细胞氧化应激损伤丙二醛(MDA)的含量、超氧化物歧化酶(SOD)的活性及T-AOC含量,流式细胞仪检测各组细胞线粒体膜电位的变化。结果不同浓度Gps、GpXILX、GpA、GRb3对EA.hy926细胞增殖无明显的抑制效应。ox-LDL诱导细胞后使细胞中MDA含量增高,SOD活力降低,T-AOC含量降低。而Gps、GpXILX、GpA、GRb3预处理能降低MDA的含量,Gps、GpXILX、GRb3能增强SOD的活性,提高T-AOC含量。线粒体膜电位数据显示,ox-LDL诱导细胞后使细胞线粒体膜电位降低。而Gps、GpXILX、GpA、GRb3处理细胞后能显著增加EA.hy926细胞线粒体膜电位。结论不同成分绞股蓝对ox-LDL所致内皮细胞氧化应激损伤具有不同程度的保护作用,可能与降低EA.hy926细胞氧化应激,提高抗氧化防御和稳定线粒体膜电位有关。     

地佐辛通过上调miR-204-3p减轻LPS诱导的心肌细胞H9C2损伤北大核心CSCD

目的:探讨地佐辛对脂多糖(LPS)诱导的心肌细胞损伤的影响及可能机制。方法:体外培养心肌细胞H9C2,分为Con组、LPS组、不同剂量(4、8、16μmol/L)地佐辛组、16μmol/L地佐辛+anti-miR-NC组和16μmol/L地佐辛+anti-miR-204-3p组,CCK-8检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测CyclinD1、p21、Bcl-2和Bax蛋白表达,试剂盒检测细胞培养上清中LDH水平及细胞中MDA、SOD和GSH-Px水平,RT-qPCR检测细胞miR-204-3p表达。结果:与Con组比较,LPS组H9C2细胞OD值、CyclinD1和Bcl-2蛋白表达、SOD和GSH-Px活性及miR-204-3p表达降低(P<0.05),细胞凋亡率、p21和Bax蛋白表达及MDA和LDH含量升高(P<0.05)。与LPS组比较,不同剂量(4、8、16μmol/L)地佐辛组H9C2细胞OD值、CyclinD1和Bcl-2蛋白表达、SOD和GSH-Px活性及miR-204-3p表达升高(P<0.05),细胞凋亡率、p21和Bax蛋白表达及MDA和LDH含量降低(P<0.05),且呈剂量依赖性。与16μmol/L地佐辛+anti-miR-NC组比较,16μmol/L地佐辛+anti-miR-204-3p组H9C2细胞OD值、CyclinD1和Bcl-2蛋白表达、SOD和GSH-Px活性及miR-204-3p表达降低(P<0.05),细胞凋亡率、p21和Bax蛋白表达及MDA和LDH含量升高(P<0.05)。结论:地佐辛可能通过上调miR-204-3p表达促进LPS诱导的心肌细胞H9C2增殖,并抑制H9C2细胞凋亡和氧化应激,减轻LPS诱导的H9C2细胞损伤。     

欧前胡素增强多柔比星对HeLa细胞的抗肿瘤效应

目的:研究欧前胡素是否能提高宫颈癌HeLa细胞株对多柔比星的敏感性。方法:MTT法检测HeLa细胞用欧前胡素和多柔比星处理后的活力。Western blot检测HeLa细胞用欧前胡素和多柔比星处理后Bcl-2蛋白家族成员(Mcl-1、Bcl-2、Bcl-x L、Bad和Bax)的表达水平。流式细胞术检测HeLa细胞用欧前胡素和多柔比星处理后的凋亡水平和线粒体膜电位的变化情况。构建Mcl-1真核表达载体,MTT法检测Mcl-1表达载体转染对欧前胡素联合多柔比星治疗宫颈癌效果的影响。结果:欧前胡素在体外可显著提高多柔比星对宫颈癌细胞系HeLa的杀伤活性。欧前胡素可显著降低HeLa细胞Mcl-1的表达,而多柔比星对Mcl-1的表达水平无影响。相比于欧前胡素或多柔比星单治疗组,两者联合可显著诱导HeLa细胞发生凋亡并降低其线粒体膜电位。体外转染Mcl-1真核表达载体显著降低多柔比星联合欧前胡素对HeLa细胞的杀伤活性。结论:欧前胡素通过靶向于Mcl-1增强多柔比星对宫颈癌细胞的杀伤活性。     

四硫代钼酸铵作为新型硫化氢供体的鉴定及其对皮肤细胞的保护作用

 目的: 本研究旨在检测金属络合物四硫代钼酸铵(ATTM)的硫化氢(H₂S)释放能力并进一步观察其减轻氧化应激诱导的皮肤细胞损伤的作用。方法:反应瓶法检测ATTM在细胞培养基中释放的H₂S,二氯二氢荧光素二乙酸酯或罗丹明123染色结合荧光显微镜照相术分别检测细胞内活性氧簇(ROS)的含量和线粒体膜电位(ΔΨ_m),用试剂盒检测细胞存活率和乳酸脱氢酶(LDH)的释放。结果:与H₂S供体GYY4137类似,ATTM在细胞培养基中可剂量依赖性地释放H₂S。在25~400 μmol/L 的浓度范围内,ATTM处理对人皮肤细胞(HaCaT细胞)的存活率无明显影响(P>0.05)。紫外线照射或外源性给予ROS供体(过氧化氢,H₂O₂)处理均可增加HaCaT细胞内ROS的含量。400 μmol/L H₂O₂处理可明显降低HaCaT细胞的存活率(P<0.01),而在H₂O₂处理前给予ATTM预处理,细胞存活率明显提高,其中在100和200 μmol/L浓度时ATTM具有最好的细胞保护作用(P<0.01)。400 μmol/L H₂O₂处理还可损害细胞的ΔΨ_m和细胞膜并使LDH释放增加(P<0.01)。而在细胞遭受损伤前给予200 μmol/L ATTM预处理可明显改善ΔΨ_m的水平(P<0.05)并抑制LDH从细胞内释放(P<0.01)。结论:ATTM具有释放H₂S的能力并可保护人皮肤细胞对抗氧化应激诱导的损伤效应。     

环孢菌素D衍生物PSC833逆转K562/DOX细胞的凋亡抗性及其机制

 目的:研究环孢菌素D衍生物PSC833对K562/DOX细胞多药耐药的逆转作用。方法:MTT法进行阿霉素（doxorubicin, DOX）和长春新碱（vincristine, VCR）的细胞毒测定;流式细胞术测定细胞周期;Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡;活性氧测定以DCFH-DA标记,线粒体跨膜电位测定用JC-1标记,细胞内钙测定用Fluo-3/AM标记,均以流式细胞术检测;Western blotting法测定细胞色素C（Cyt C）、Bcl-2、Bax和cleaved caspase-3蛋白表达。结果:环孢菌素D衍生物PSC833能显著增强DOX/VCR的细胞毒作用,使细胞阻滞在G2/M期;通过降低线粒体膜电位,升高细胞内活性氧和Ca2+水平,释放Cyt C、下调Bcl-2、上调Bax、激活cleaved caspase-3,增加DOX诱导的耐药细胞凋亡。结论: PSC833与DOX合用后,可阻滞细胞周期于G2 /M期,通过线粒体通路诱导K562/DOX细胞凋亡。     

干扰长链非编码RNA MNX1-AS1对卵巢癌细胞的干样特性、 氧化应激以及线粒体功能损伤的影响*

目的：探讨干扰长链非编码RNA（lncRNA） MNX1-AS1对卵巢癌细胞的干样特性、氧化应激以及线粒体 功能损伤的影响。方法：将KOV3 细胞随机分组,进行处理及培养,RT-PCR 检测RNA MNX1-AS1 的表达,筛选 干扰效果最明显的序列;观察干细胞成球情况;免疫印迹检测干细胞标记物蛋白八聚体结合转录因子4（OCT4）、 性别决定区Y 框蛋白（SOX2）和ATP 结合转运蛋白G 超家族成员2（ABCG2）的表达;检测氧化应激标记物丙 二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）的含量;荧光探针检测活性氧（ROS）的含量;流式细胞仪检测线粒体 膜电位的变化;免疫印迹检测B 淋巴细胞瘤-2 基因（Bcl-2）/Bcl-2 相关X蛋白（Bax）、活化胱天蛋白酶3（cleaved cas3）/cas3、c-Myc 的表达。结果：3 个序列对比显示MNX1-AS1-shRNA3 干扰组最为显著,选择此组为后续实 验干扰组,分组为对照组、阴性对照组（shRNA-NC）、干扰组（MNX1-AS1-shRNA3）;与对照组相比,MNX1- AS1-shRNA3 干扰组SKOV3 干细胞成球数量、直径减小,干细胞标记物蛋白OCT4、 SOX2、ABCG2 的表达显著 降低,SOD 活性、c-Myc 蛋白表达均显著降低,线粒体损伤标记物蛋白的表达（Bax/Bcl-2、cleaved cas3/cas3）、 MDA与ROS 含量均显著升高,线粒体的膜电位下降。结论：干扰lncRNA MNX1-AS1 诱导卵巢癌细胞的干样特 性降低、氧化应激增强、线粒体损伤加重,干扰lncRNA MNX1-AS1 对SKOV3 细胞抑制效果显著,具有靶向治 疗卵巢癌的潜力。     

蜕皮甾酮减轻心肌细胞氧化应激损伤

目的:研究蜕皮甾酮对心肌细胞氧化损伤的作用。方法:H9c2细胞常规培养,经过氧化氢(H_2O_2)处理后建立损伤模型,分为:对照组,蜕皮甾酮高剂量(2μmol/L)、中剂量(1.5μmol/L)和低剂量(1μmol/L)组,H_2O_2组。CCK-8法检测蜕皮甾酮对H9c2细胞活力的影响;流式细胞术检测H9c2细胞的凋亡率;用分光光度法检测乳酸脱氢酶、肌酸激酶同工酶的活性以及丙二醛、超氧化物歧化酶含量;激光共聚焦联合流式细胞术观察细胞内活性氧簇(ROS)的产生和线粒体膜电位的变化;用Western blot法检测H9c2细胞内Bax、Bcl-2和cleaved caspase-3的蛋白水平。结果:在所选浓度范围内,蜕皮甾酮对H9c2细胞的活力无明显影响。与对照组比较,H_2O_2组H9c2细胞的LDH、CK-MB、ROS、MDA及凋亡率明显增加,通过不同浓度的蜕皮甾酮作用后,H9c2细胞的LDH、CK-MB、ROS、MDA及凋亡率显著下降,与H_2O_2组比较差异有统计学显著性。与对照组比较,H_2O_2组H9c2细胞的SOD和线粒体膜电位明显下降;与H_2O_2组比较,蜕皮甾酮高、中、低剂量组H9c2细胞的SOD和线粒体膜电位明显提高。对比对照组,H_2O_2组中H9c2细胞Bax和cleaved caspase-3的蛋白水平明显升高,Bcl-2的表达水平明显下降;与H_2O_2组比较,蜕皮甾酮高、中、低剂量组中H9c2心肌细胞表达Bcl-2蛋白上升,Bax和cleaved caspase-3的蛋白水平下降。结论:蜕皮甾酮对氧化应激条件下的H9c2细胞具有保护功能,其机制可能和减少氧化应激产物,增强抗氧化酶功能,调节线粒体功能和抑制细胞凋亡相关。     

脑源性神经营养因子保护H_2O_2诱导的氧化损伤血管内皮细胞

目的:研究脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)对过氧化氢(H2O2)诱导的氧化损伤血管内皮细胞的保护作用及其作用机制。方法:离体培养人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),建立H2O2致HUVECs氧化损伤模型后,利用不同浓度(1、10和100μg/L)BDNF处理HUVECs,同时设置未损伤对照组、H2O2损伤后PBS处理组和Trk B inhibitor组(同时加入100μg/L BDNF和1∶1 000的Trk B inhibitor)。利用MTT方法检测各组细胞存活率;同时测定各组细胞中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和还原型谷胱甘肽(GSH)水平变化;ELISA方法检测各组细胞分泌一氧化氮(NO)、内皮素1(ET-1)及细胞间黏附分子1(ICAM-1)的浓度变化;流式细胞术检测各组细胞中活性氧簇(ROS)含量及细胞凋亡的变化;Western blot检测各组细胞中Trk B、p-Trk B、cleaved caspase-3、Bcl-2及Bax的蛋白水平。结果:与未损伤组相比,经H2O2氧化损伤后,PBS处理组的HUVECs存活率显著下降,LDH和MDA含量显著上升而SOD和GSH的活性显著下降,细胞中NO分泌功能显著降低而ET-1和ICAM-1的分泌浓度则显著增加,ROS的含量和细胞凋亡率均显著上升,cleaved caspase-3和Bax的蛋白水平显著上升,Bcl-2蛋白表达则显著下降;与PBS处理组相比,不同浓度BDNF处理组中HUVECs的存活率逐渐上升,LDH和MDA含量逐渐下降,而SOD和GSH活性逐渐上升,细胞中的NO分泌量显著上升而ET-1和ICAM-1分泌量逐渐下降;ROS含量和细胞凋亡率则逐渐下降,Trk B和p-Trk B水平均显著上升,cleaved caspase-3和Bax的蛋白水平逐渐下降而Bcl-2蛋白表达逐渐上升,但BDNF的作用均受到Trk B inhibitor的抑制。结论:BDNF能够通过提高HUVECs细胞存活率,增强细胞抗氧化损伤能力,降低ROS产生和细胞凋亡率而保护氧化损伤的血管内皮细胞,并通过其与Trk B结合后激活BDNF-Trk B信号通路发挥作用。     

Role of quercetin in preventing thioacetamide-induced liver injury in rats

In hepatic toxicity induced in rats by two injections of thioacetamide (TAA, 350 mg/kg with an interval of 8 hr), the action of quercetin was investigated. After 96 hr, TAA administration resulted in hepatic necrosis, significant increases in serum transaminase activity, and increases in hepatic lipoperoxidation. Thioacetamide-induced hepatotoxicity also showed changes in antioxidant enzymes in the liver of rats, with alterations in p-ERK 1/2 (phosphorylated extracellular-signal related kinase 1/2) as well as an imbalance between proapototic protein Bax and anti-apoptotic protein Bcl-2 expression. With administration of the flavonoid quercetin (50 mg/Kg i.p.) for four consecutive days following TAA, serum aspartate aminotransferase (AST) and alanine aminotransferase (ALT) activity were close to normal values in rats. Histological findings suggested that quercetin had a preventive effect on TAA-induced hepatic necrosis. Quercetin treatment caused significant decreases in lipid peroxide levels in the TAA-treated rats, with some changes in antioxidant enzymes superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), and glutathione peroxidase (GPx). Quercetin also inhibited the change of the p-ERK1/2 by TAA and significantly prevented the increase in Bax/Bcl-2 ratio, thus preventing apoptosis. Findings indicate that quercetin may have a preventive effect on TAA-induced hepatotoxicity by modulating the oxidative stress parameters and apoptosis pathway.     

Quercetin regulates inflammation,oxidative stress,apoptosis, and mitochondrial structure and function in H9C2 cells by promoting PVT1 expression

ObjectiveTo investigate the effect and potential mechanism of quercetin on inflammation, oxidative stress, apoptosis, and mitochondrial structure and function in H9C2 cells.Materials and methodsH9C2 cells were obtained from the Shanghai Institutes for Biological Sciences, Chinese Academy of Science, and randomly divided into six groups: control, model, PVT1 overexpression (OV), quercetin, OV + quercetin, and NAC groups. The CCK-8 assay was performed to examine cell proliferation. Flow cytometry was used to examine cell apoptosis, cell membrane potential, and ROS levels. The expression of endothelial nitric oxide synthase (eNOS), malondialdehyde (MDA), and superoxide dismutase (SOD) was measured by ELISA and a Biochemical kit. Western blotting was used to determine the levels of p-DRP1 (s637), MFN2, NF-kB, p-NF-kB, IkB, and p-IkB. IL-6, IL-10, TNF-α, and IL-1β mRNA expression was examined by RT-PCR. Electron microscopy was used to observe the structure of mitochondria in H9C2 cells.ResultsMDA, p-NF-κB, p-IKB, IL-6, IL-1β, and TNF-α expression levels, and the cell apoptosis rate were significantly higher in the model group than in the control group (P < 0.05). In contrast, the cell proliferation rate and IL-10, SOD, eNOS, and ATP levels were significantly lower in the model group (P < 0.05). Moreover, MDA expression was significantly lower in the OV, quercetin, quercetin + OV, and NAC groups than in the model group (P < 0.05), while SOD, eNOS, and ATP levels were higher. The electron microscopy results showed that PVT1 overexpression or quercetin treatment could inhibit inflammation-induced mitochondrial fission and promote mitochondrial fusion.ConclusionQuercetin promotes the proliferation of H9C2 cells, while inhibiting inflammation, oxidative stress, and cell apoptosis, and alleviating the structural and functional dysfunction of mitochondria. These effects are achieved by promoting PVT1 expression.     

亚甲蓝对百草枯中毒大鼠胸腺T淋巴细胞亚群与氧化应激的影响

目的:研究亚甲蓝(methylene blue,MB)对百草枯(paraquat,PQ)中毒大鼠胸腺T淋巴细胞亚群免疫功能与氧化应激的影响。方法:选取Wistar雄性大鼠40只,随机分为正常组、模型组、MB低剂量(2 mg·kg~(-1)·d~(-1))组和MB高剂量(4 mg·kg~(-1)·d~(-1))组。72 h后HE染色法观察胸腺组织形态,比色法测定各组胸腺组织SOD活性及MDA含量,免疫组化试剂盒检测Bcl-2和Bax和CD4及CD8的表达。结果:MB组胸腺皮、髓质分界清楚,胸腺细胞MDA含量减少,SOD活性增加,抗氧化能力提高,Bcl-2和Bax表达量下调、Bcl-2/Bax的比值增加,CD4阳性表达提高。结论:MB能够改善PQ对胸腺细胞的氧化损伤,调节胸腺T淋巴细胞亚群在皮质和髓质区的分布,从而缓解机体持续性损伤。