3种浓度乙醇提取的樟芝多糖对免疫缺陷小鼠模型免疫功能的调节作用研究

目的探讨3种浓度乙醇提取的樟芝多糖对免疫抑制小鼠模型免疫功能的调节作用。方法在利用水提醇沉原理进一步纯化总樟芝多糖时,先后使用浓度为90%、70%、50%的乙醇提取到3种樟芝多糖（PW90、PW70、PW50）,腹腔注射环磷酰胺构建免疫抑制小鼠模型,分成模型组、总多糖组、PW90组、PW70组和PW50组,4组大鼠腹腔注入相应的樟芝多糖,模型组和另设的对照组腹腔注射0.9%氯化钠注射液,14d后分别检测细胞免疫和体液免疫的相关指标,包括胸腺指数、脾脏指数、T淋巴细胞亚群、淋巴细胞增殖活性、NK细胞杀伤能力,以及血清中IL-2、IL-6、TNF-α的表达水平。结果环磷酰胺可以抑制小鼠胸腺指数和脾脏指数,而樟芝多糖干预后可以不同程度的提高胸腺、脾脏指数,且PW90组胸腺、脾脏指数高于PW70组和PW50组（P＜0.05）。环磷酰胺可以抑制小鼠淋巴细胞增殖能力和NK细胞杀伤能力,樟芝多糖干预后显著提高淋巴细胞的增殖指数,尤其PW90组NK细胞的杀伤能力显著提高,与PW70组和PW50组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。环磷酰胺可以降低淋巴细胞亚群中CD3+、CD3+CD4+和CD3+CD8+的比例,樟芝多糖干预后可以提高3者的比例,且PW90组的效果优于PW70组和PW50组（均P＜0.05）。樟芝多糖还可以提高小鼠血清IL-2、IL-6和TNF-α的表达水平,PW90组效果显著优于PW70组和PW50组（均P＜0.05）。结论环磷酰胺构建的免疫抑制小鼠的免疫功能得到全面抑制,而3种樟芝多糖可以不同程度提高免疫抑制小鼠的免疫功能,且相同剂量下,90%乙醇沉淀得到的多糖效果优于其他2种。     

HPLC同时测定茵山莲颗粒中5个有效成分的含量

目的:建立多波长同时测定茵山莲颗粒中绿原酸、栀子苷、野黄芩苷、甘草酸和五味子醇甲含量的HPLC法。方法:采用Wonda Sil~(TM)-C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈(A)-0.4%磷酸水溶液(B)梯度洗脱(0~5 min,86%B;5~35 min,86%~20%B;35~45 min,20%B),流速1.0 m L·min~(-1),柱温30℃,检测波长分别为325 nm(绿原酸),240 nm(栀子苷),335 nm(野黄芩苷),250 nm(甘草酸),220 nm(五味子醇甲)。结果:绿原酸、栀子苷、野黄芩苷、甘草酸和五味子醇甲5个成分的线性范围分别为0.008 5~0.170μg(r=0.999 5),0.046 2~0.924μg(r=0.999 0),0.021 6~0.432μg(r=0.999 2),0.019 7~0.394μg(r=0.999 3),0.004 5~0.090μg(r=0.999 9);平均加样回收率95.8%~98.4%。3批样品中上述5个成分的含量分别为1.105~1.134,5.139~5.204,2.546~2.603,2.208~2.231,0.352~0.361 mg·g-1。结论:该方法符合方法学验证要求,可用于茵山莲颗粒的5个指标性成分的同时测定。     

基于UPLC-ESI/Q-TOF-MS/MS技术分析荷梗中的化学成分

应用高效液相色谱-电喷雾/四极杆飞行时间串联质谱联用技术(UPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS)对荷梗中的化学成分进行定性分析。以75%甲醇作为提取液制备供试液,色谱分离选用Agilent Zorbax SB-Aq柱(2.1 mm×100 mm,1.8 μm),以乙腈-水(φCH₂O₂=0.05%)为流动相进行梯度洗脱,电喷雾四极杆飞行时间质谱(ESI-Q-TOF-MS/MS)正离子模式下进行检测,根据精确分子量和碎片离子分析,并结合数据库匹配技术进行结构鉴定。结果从荷梗中鉴定出了22个成分,包含了11个单苄基异喹啉生物碱,5个阿朴啡类生物碱、5个双苄基异喹啉生物碱以及1个原阿朴啡类生物碱,其中,N-methylhigenamine为首次在植物莲中发现,初步推测了1种新化合物6-O-methylotusine。该文结果为进一步研究和利用中药荷梗提供了参考。     

樟芝多糖抑制6-OHDA诱导的多巴胺能神经元细胞炎症反应的作用机制研究

目的 探究樟芝多糖通过抑制ROS-NLRP3-caspase-1途径调节6-羟基多巴胺（6-hydroxydopamine,6-OHDA）诱导的多巴胺能神经元（dopaminergic neurons,DAN）细胞炎症反应的作用。方法 分离小鼠中脑DAN细胞,采用6-OHDA体外构建帕金森病细胞模型,将细胞分为正常组、模型组、对照组、实验组。正常组为常规培养的DAN细胞,模型组为6-OHDA处理的DAN细胞,对照组为ROS抑制剂乙酰半胱氨酸（NAC）+6-OHDA处理的DAN细胞,实验组为6-OHDA+樟芝多糖处理的DAN细胞。采用CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术和免疫荧光染色法检测ROS的水平,流式细胞术检测细胞凋亡水平,Hoechst 33342染色活细胞,蛋白免疫印迹（Western-bolt）法检测细胞中NLRP3、caspase-1、pro-caspase-1的表达水平,酶联免疫吸附（Elisa）法检测上清中IL-1β、IL-6和IL-18的分泌水平。结果 模型组中6-OHDA可以诱导DAN细胞炎症反应,ROS表达增高,NLRP3-caspase-1炎性小体水平增高,细胞凋亡率增高,相比正常组具有显著性差异（P<0.05）。樟芝多糖干预后,ROS的水平下调,NLRP3-caspase-1炎性小体水平降低,细胞凋亡率下调,相比模型组具有显著性差异（P<0.05）。结论 樟芝多糖可以通过抑制ROS-NLRP3-caspase-1途径调节6-OHDA诱导DAN炎症反应,这可能是樟芝多糖在帕金森病炎症反应中的作用机制之一。     

樟芝多糖保护小鼠急性肝损伤的机制研究

目的 研究樟芝多糖保护小鼠急性肝损伤的机制。方法 通过D-氨基半乳糖构建急性肝损伤小鼠,C57BL/6小鼠分为对照组、模型组、樟芝多糖高剂量组、樟芝多糖低剂量组,樟芝多糖高、低剂量组每日分别给予50,25 mg·kg^-1的樟芝多糖2次,对照组和模型组给予等体积的生理盐水。给药7 d后紫外比色法测试盒检测大鼠肝组织中谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）水平;TBA法试剂盒检测肝组织中丙二醛（MDA）的水平;ELISA试剂盒检测肝组织中白介素-6（IL-6）的表达;Western-Blot检测肝脏组织中NLRP-3、白介素-1β（IL-1β）、pro-caspase-1和caspase-1的表达;HE染色观察小鼠肝脏病理;RT-qPCR检测肝脏组织中Bcl-2、Bax、caspase-3、caspase-1的mRNA表达。结果 与模型组相比,樟芝多糖可以明显改善急性肝损小鼠的肝脏病理,降低ALT、AST的表达以及MDA和IL-6的表达（P<0.01）,肝脏组织中NLRP-3、IL-1β以及pro-caspase-1和caspase-1的表达相比模型组显著降低（P<0.05）,Bax、caspase-3、caspase-1的mRNA表达相比模型组显著降低（P<0.01）,Bcl-2显著升高（P<0.01）。结论 樟芝多糖对于小鼠急性肝损伤有着很好的保护作用,其作用机制与炎性小体NLRP-3及其相关炎症因子的抑制有关。     

芝莲化癞颗粒对荷瘤小鼠的免疫功能效应研究

目的：对芝莲化瘢颗粒影响荷瘤小鼠的免疫功能进行科学的实验研究,为确定该制剂的功能主治和临床疗效提供依据。方法：制备H22肝癌实体瘤荷瘤小鼠模型,选取主要指标：巨噬细胞吞噬百分率、吞噬指数,溶血素、溶血空斑的形成,外周血淋巴细胞转化率,进行各项对比实验。结果：芝莲化瘢颗粒以30g·kg-1、15g·kg-1、7．5g·kg-1的剂量给荷瘤小鼠连续10天灌服,中剂量组可显著提高荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬百分率和吞噬指数,大剂量组可显著促进荷瘤小鼠溶血素及溶血空斑的形成,可显著提高荷瘤小鼠外周血淋巴细胞转化率。结论：芝莲化瘢颗粒能够显著提高感染H22肝癌实体瘤小鼠的肌体免疫力,其功能主治项可以描述为：能够显著提高肌体免疫力,缓解肝细胞癌对肝脏的损害,延长生存期。     

香莲外洗液对白念珠菌阴道分离耐药株的实验研究

[目的]探讨香莲外洗液诱导白念珠菌阴道分离耐药株恢复对氟康唑的敏感性.[方法]香莲外洗液作用于白念珠菌阴道分离耐药株,采用肉汤微量稀释法测定氟康唑对原代及每代菌株的最低抑菌浓度(MIC)值,从而判断白念珠菌阴道分离耐药株恢复对氟康唑敏感所需的代数.[结果]经香莲外洗液作用后,临床耐药菌株A1～A10分别于第8、5、6、7、10、5、7、8、6、7代恢复对氟康唑敏感,而无香莲作用的耐药试验菌株白念珠菌A1～A10则分别在第19、14、15、12、17、12、17、19、14、17代恢复对氟康唑敏感.[结论]香莲外洗液能较快诱导临床耐药白念珠菌恢复对氟康唑的敏感性.     

人参药膳款款走来

人参莲肉汤（《经验良方》）白人参10g,莲子10枚,冰糖30g。制作：将白人参、莲子（去心）放在碗内,加洁净水适量发泡,再加入冰糖,再将碗置蒸锅内,隔水蒸炖1小时。     

有毒草药粉末六角莲的鉴定与分析

目的研究未知有毒中药粉末六角莲的鉴定与分析方法。方法显微鉴别、薄层色谱法、高效液相色谱法鉴别。结果显微特征与六角莲粉末特征相同；薄层色谱显示在与对照药材及对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；液相色谱显示样品主峰的保留时间与对照药材及对照品一致。结论此三种方法能够有效鉴别六角莲；高效液相色谱法能将其有效成分鬼臼毒素和山奈素完好分离，为今后进行较详细的指纹图谱研究、含量测定研究和体液分析打下基础。     

黄花倒水莲对辐射损伤小鼠防护作用的研究

目的: 初步探讨黄花倒水莲提取物对小鼠辐射损伤的防护作用。方法: 以辐射损伤小鼠作为研究对象,分别以黄花倒水莲提取物2,4,8 g·kg^-1·d^-1灌胃,阴性对照组、辐射模型组给予等量生理盐水。灌胃5 d后,除阴性对照组外各组小鼠接受6 Gy的⁶⁰Co γ射线一次性全身均匀照射,然后再继续灌胃10 d,最后1次灌胃24 h后,检测各组小鼠外周血中红细胞数(RBC)、白细胞数(WBC)、血小板数(PLT)、淋巴细胞数(Lymph),计算脾指数和胸腺指数,用单细胞凝胶电泳技术检测小鼠脾细胞、骨髓细胞的DNA损伤。结果: 与阴性对照组比,辐射模型组、黄花倒水莲各剂量组小鼠的RBC数、WBC数、PLT数、Lymph数、胸腺指数、脾指数明显减少(P<0.01或P<0.05),脾细胞、骨髓细胞的尾部DNA百分率(Tail DNA%)和尾矩(Tail Moment)明显增大(P<0.01或P<0.05);但与辐射模型组比, 黄花倒水莲各剂量组小鼠的RBC数、WBC数、PLT数、Lymph数、胸腺指数、脾指数明显增加(P<0.01或P<0.05),脾细胞、骨髓细胞的Tail DNA%和Tail Moment明显减少(P<0.01),存在剂量-反应关系。结论: 黄花倒水莲提取物对辐射所致小鼠造血系统和免疫器官损伤有一定的防护作用。