腺病毒介导CD/UPRT自杀基因系统治疗胰腺癌的实验研究

目的 探讨CD/UPRT自杀基因系统在胰腺癌基因治疗中的作用.方法 采用同源重组技术构建重组腺病毒Ad-CD、Ad-CD/UPRT和Ad-GFP;体外感染人胰腺癌SW1990细胞,RT-PCR检测UPRT mRNA表达;MTT法检测细胞对5-FC的敏感性及旁观者效应;流式细胞仪分析细胞凋亡率;建立胰腺癌裸鼠皮下移植瘤模型,瘤体内直接注射腺病毒,观察CD/UPRT自杀基因的原位治疗作用.结果 转染CD/UPRT的胰腺癌SW1990细胞对5-FC的敏感性明显提高,Ad-CD/UPRT组的IC50为25 μmol/L,而Ad-CD组和Ad-GFP组分别为100 μmol/L和＞1 000 μmol/L.Ad-CD组、Ad-CD/UPRT组和Ad-GFP组的细胞凋亡率分别为61.3%、40.5%和3.0%,3组比较有显著差异(P＜0.05).CD/UPRT基因转染存在旁观者效应.Ad-CD/UPRT瘤内注射治疗后种植癌体积缩小81%,Ad-GFP治疗肿瘤缩小63%.结论 CD/UPRT自杀基因系统能提高对胰腺癌细胞的杀伤作用.     

鱼藤酮诱导多巴胺能细胞α-突触核蛋白聚集和ERK1/2通路活化的研究

目的探讨鱼藤酮对多巴胺能细胞α-突触核蛋白聚集和细胞外信号调节激酶-1／2（ERK1／2）通路活化的影响。方法用鱼藤酮处理神经元样分化的PCI2细胞，四甲基偶氮唑盐法检测细胞活力，免疫荧光法检测α-突触核蛋白聚集，免疫细胞化学法检测ERK1／2通路活化情况。结果鱼藤酮处理后细胞活力呈时间依赖性下降；磷酸化ERK1／2水平逐渐升高（P均〈0．01）；处理16h后细胞内出现α-突触核蛋白聚集体，24h后进一步增多。结论鱼藤酮可诱导α-突触核蛋白聚集和ERK1／2通路活化，参与多巴胺能神经元损伤。     

帕金森病发病机制研究进展

帕金森病(PD)是临床上最常见的神经系统退行性疾病之一,具有特征性的临床表现和病理学特点,表现为黑质致密部多巴胺能神经元选择性缺失,残存的神经元内出现路易小体(Lewy body)。多年来国内外学者对其进行了大量的研究工作,发现PD发病与老龄化,男性,经常接触或暴露于杀虫剂,某些金属,居住在农村,某些职业等各种危险因素相关,是易感基因和环境因素共同作用的结果。虽然其确切的内在机制不明,但多项研究表明胞质内的多种因素如线粒体功能缺陷,氧化应激及免疫异常,小胶质细胞激活等均可能与PD的发生有关。而近年来PD致病基因的发现为其提供…     

PJ34对肺腺癌顺铂耐药细胞增殖及耐药性的影响

目的探讨第3代选择性PARP-1抑制剂PJ34对肺腺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP生长活性及耐药性的影响。方法使用不同浓度梯度的顺铂(DDP)、PJ34单药或联合作用于A549/DDP细胞,MTT法检测各药物对细胞的增殖抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测细胞内PARP-1蛋白、MDR相关蛋白(LRP、GST-π)的表达水平。结果PJ34单药对A549/DDP细胞有明显的抑制作用,无毒剂量的PJ34可明显增强A549/DDP细胞对顺铂的敏感性,诱导细胞凋亡,使细胞内PARP-1蛋白、MDR相关蛋白(LRP、GST-π)的表达水平明显降低。结论 A549/DDP细胞的顺铂耐药性与细胞内PARP-1蛋白的过度表达有关,PJ34有明显的顺铂增敏作用,能部分逆转A549/DDP细胞对顺铂的耐药性,其机制可能与诱导细胞凋亡,降低细胞内LRP、GST-π的蛋白表达水平有关。     

MGMT和Ki-67及P53蛋白在脑胶质瘤中表达及意义

目的：探讨DNA修复酶O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶（ MGMT）、细胞增殖相关核蛋白Ki-67和P53蛋白在脑胶质瘤中的表达情况与分级的关系及其临床意义。方法采用免疫组织化学SP法检测61例脑胶质瘤标本和16例外伤内减压正常脑组织标本MGMT、Ki-67和P53蛋白的表达情况。结果 MGMT（19.67%∶0,χ2＝3.729,P＝0.062）、Ki-67（39.34%∶0,χ2＝5.722,P＝0.016）和P53蛋白（27.87%∶0,χ2＝9.146,P＝0.002）在胶质瘤中的表达和正常脑组织中的表达差异均有统计学意义,且Ki-67在高级别胶质瘤（Ⅲ~Ⅳ级）与低级别胶质瘤（Ⅰ~Ⅱ级）差异有统计学意义（14∶10,χ2＝11.718, P＝0.001）。MGMT、P53未发现明显差异。结论 MGMT蛋白表达可作为胶质瘤检测的生物学标志物;Ki-67蛋白与病理分级存在正相关,可作为脑胶质瘤病理分级的参考指标;P53蛋白可能为胶质瘤治疗的潜在靶点。     

核酸疫苗免疫对帕金森病小鼠的治疗作用

目的探讨α-突触核蛋白（α-synuclein,α-syn）核酸疫苗免疫对MPTP慢性帕金森病（PD）小鼠的治疗效果。方法将该实验室成功构建的α-syn核酸疫苗-pVAX1-hα-Syn84-140用Qiagen试剂盒大量制备α-syn质粒;24只MPTP慢性PD小鼠随机分为3组：疫苗组、空质粒对照组和PBS对照组,各组小鼠分别肌注pVAX1-hα-Syn84-140重组质粒,pVAX1空质粒和PBS各100μl,共免疫3次,每次间隔3w,末次免疫后2w,观察小鼠行为学变化及中脑黑质α-syn表达和多巴胺能神经元数目变化。结果pVAX1-hα-Syn84-140核酸疫苗免疫组小鼠的类PD样症状与空质粒和PBS对照组相比显著减轻（P〈0.01）;小鼠中脑黑质α-syn表达较对照组减少约30%（P〈0.01）,且多巴胺能神经元数目较空质粒和PBS对照组增多了31%～39%（P〈0.01）。结论pVAX1-hα-Syn84-140核酸疫苗具有较强的免疫原性,能对帕金森病小鼠产生较好的免疫治疗作用。     

塞来昔布诱导大肠癌细胞凋亡与细胞色素C依赖性信号途径活化相关

目的　观察塞来昔布对大肠癌细胞株HT 2 9的凋亡诱导作用 ,并通过分析塞来昔布作用后的HT 2 9细胞的细胞色素C、Caspase 9和多聚ADP核糖多聚酶 (PARP)蛋白表达的变化 ,探讨其诱导大肠癌细胞凋亡的分子机制。方法　大肠癌细胞凋亡用吖啶橙 /溴化乙啶染色结合荧光显微镜、流式细胞仪 (FCM )技术测定 ,细胞色素C、Caspase 9和PARP蛋白表达用Western印迹技术检测。 结果　荧光染色法显示塞来昔布在 0～ 12 0 μmol/L呈浓度和时间依赖性诱导HT 2 9结肠癌细胞凋亡。FCM结果显示典型的亚二倍体“凋亡峰” ,凋亡率分别为 (7.31± 2 .37) %～ (4 8.30± 2 .86 ) %。塞来昔布诱导线粒体释放细胞色素C入胞质 ,激活Caspase 9,继而裂解活化PARP。结论　塞来昔布可诱导大肠癌细胞株HT 2 9细胞凋亡 ,其机制涉及细胞色素C依赖性凋亡调节信号通路。     

CpG寡脱氧核苷酸促进小鼠清除体内结核分枝杆菌的机制

目的 探讨CpG寡脱氧核苷酸(CpG-ODN)增强小鼠体内结核分枝杆菌清除能力的可能机制.方法 将雌性BALB/c小鼠随机分为免疫组36只和对照组24只,并分别腹腔注射CpG-ODN 30 μg(溶于200 μl生理盐水)和200 μl生理盐水.2周后每只小鼠经尾静脉注射结核分枝杆菌H37Rv 1×106 CFU.感染后3周和4周每组分别处死12只小鼠,免疫组小鼠饲养至感染后6周处死.肺和脾组织进行菌落计数,观察肺和脾组织的病理学变化.用实时定量聚合酶链反应方法检测肺和脾组织γ-干扰素、白细胞介素(IL)-4、IL-10、IL-12、IL-18和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达的相对含量.组间比较采用t检验.结果 感染后3周,免疫组小鼠的肺和脾组织经培养后无结核分枝杆菌生长.感染后4周,免疫组小鼠的肺和脾组织培养后有结核分枝杆菌生长,但明显少于对照组;肺组织中IL-18、γ-干扰素和iNOS的mRNA表达的相对含量分别为(3.6±0.5、0.32±0.14和23.2±4.7),均明显高于对照组的(1.6±1.1、0.20±0.10和16.2±5.1),IL-12p40 mRNA表达的相对含量(5.7±0.6)明显低于对照组(14.5±1.9),IL-4和IL-10 mRNA表达的相对含量(0.30±0.09和0.28±0.05)与对照组(0.26±0.05和0.29±0.08)无明显差别;脾组织中IL-18、γ-干扰素和iNOS mRNA表达的相对含量(5.5±1.3、0.52±0.07和9.1±1.8)明显高于对照组(0.8±0.4、0.21±0.06和6.0±1.4),IL-12p40、IL-4和IL-10 mRNA表达的相对含量(2.1±0.3、0.23 ±0.10和0.10±0.04)明显低于对照组(5.1±0.4、1.21±0.26和0.57±0.13).与感染后4周比较,免疫组小鼠感染后6周,肺组织γ-干扰素mRNA表达的相对含量(0.95±0.27)明显增高,IL-18、IL-4和IL-10 mRNA表达的相对含量(3.51±0.86、0.45±0.35和0.24±0.21)无明显变化,IL-12p40和iNOS mRNA表达的相对含量(1.72±1.41和1.1±0.5)明显降低;脾组织IL-12p40和IL-18 mRNA表达的相对含量(0.08±0.02)和(0.11±0.03)明显降低,IL-10 mRNA表达的相对含量(0.39±0.11)明显增高,γ-干扰素、IL-4和iNOS mRNA表达的相对含量(0.63±0.32、0.30±0.16和8.4±2.7)无明显变化.结论 CpG-ODN增强小鼠清除体内结核分枝杆菌的能力与IL-18、γ-干扰素和iNOS的表达增强及IL-4和IL-10的表达抑制密切相关.     

术前化疗对hOGG1及PARP在原发性肝癌组织中表达的影响

目的:探讨术前化疗对损伤修复机制的影响.方法:应用EnVision免疫组化法检测41例正常肝组织、187例(术前未做化疗患者99例和术前行经肝动脉插管化疗患者88例1原发性肝癌患者的肝癌组织和癌旁组织中hOGG1和PARP的表达.结果:正常肝组织、术前化疗组与术前未化疗组肝癌组织中,hOGG1蛋白细胞核表达阳性分度依次递增,而PARP蛋白细胞核表达阳性分度依次递减,三者之间差异均有显著性差异(均P<0.05).PARP癌旁组织阳性表达强度(P=0.038)、ALT(P=0.001)、病理分级(P=0.040)是肿瘤复发的危险因素,外周血淋巴细胞数(P=0.026)、化疗(P=0.049)是肿瘤复发的保护因素.结论:术前化疗可以杀伤对氧化损伤敏感的肝癌细胞.     

银杏内酯B对MPP+诱导的帕金森病SH-SY5Y细胞模型中α-synuclein表达的影响北大核心CSCD

目的探讨银杏内酯B(ginkgolide B,GB)对1-甲基-4苯基-吡啶离子(N-methyl-4-phenylpyridiniumiodide,MPP^(+))诱导的帕金森病(Parkinson’s disease,PD)SH-SY5Y细胞模型的α-突触核蛋白(α-synuclein,α-syn)表达的影响和潜在的机制。方法将SH-SY5Y细胞分为溶媒(DMSO)对照组、MPP^(+)组(1.0 mmol·L^(-1)MPP^(+)孵育48 h)、MPP^(+)+GB组(用50μmol·L^(-1)的GB处理1 h后,再用1.0 mmol·L^(-1)MPP^(+)孵育48 h)、第1转染组(转染miR阴性对照物)、第2转染组(转染miR-207模拟物)、第3转染组(转染miR-207抑制剂)、MPP^(+)+GB+第2转染组(细胞转染miR-207模拟物后,用50μmol·L^(-1)的GB处理1 h,再用1.0 mmol·L^(-1)MPP^(+)孵育48 h)、MPP^(+)+GB+第3转染组(细胞转染miR-207抑制剂后,用50μmol·L^(-1)的GB处理1 h,再用1.0 mmol·L^(-1)MPP^(+)孵育48 h)、第4转染组(先转染miR-207模拟物,再转染p CMV6-XL5)和第5转染组(先转染miR-207模拟物,再转染p CMV6-XL5-LAMP2A)。结果与MPP^(+)组(3.51±0.23)比较,MPP^(+)+GB组miR-207的相对表达量(2.07±0.26)的差异有统计学意义(P<0.05)。第1转染组、第2转染组和第3转染组α-syn基因相对表达量分别为1.03±0.09,1.56±0.13,0.78±0.09;α-syn蛋白相对表达量分别为1.02±0.08,1.81±0.20,0.53±0.23;与第1转染组比较,第2转染组和第3转染组α-syn表达的差异均有统计学意义(均P<0.05)。第2转染组和第5转染组α-syn基因相对表达量分别1.03±0.12,0.71±0.10;α-syn蛋白相对表达量分别为1.09±0.07,0.22±0.11;与第2转染组比较,第5转染组α-syn表达的差异均有统计学意义(均P<0.05)。MPP^(+)+GB组、MPP^(+)+GB+第2转染组和MPP^(+)+GB+第3转染组α-syn基因相对表达量分别为1.02±0.09,1.62±0.15,0.71±0.12;α-syn蛋白相对表达量分别为1.02±0.10,2.01±0.35,0.63±0.14;与MPP^(+)+GB组比较,MPP^(+)+GB+第2转染组和MPP^(+)+GB+第3转染组α-syn表达的差异均有统计学意义(均P<0.05)。LAMP2A是miR-207的靶基因。结论在MPP^(+)诱导的PD SH-SY5Y细胞模型中,GB能通过介导miR-207/LAMP2A信号轴来降低α-syn的表达。