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61.
应用SDS-PAGE,蛋白免疫印迹(Westernblot)、单克隆抗体(McAb)等技术,对鼠疫菌外膜蛋白(OMP)组成成分及免疫学特性进行了研究、在SDS-PAGE图谱上,鼠疫菌锡林郭勒高原型较其他型强、弱毒菌少一条亚基分子量为32KD的蛋白带。以EV76p、EV苗的OMP为免疫原,所获抗体进行Westernblot分析,认为OMP具有良好的免疫原性及免疫反应性。采用杂交瘤技术,得到七株抗鼠疫菌的McAb。四株为IgG,三株为IgM。经Westernblot鉴定。四株McAb抗OMP的分子量,4G5株为210KD,3B9、ID10株为40KD,2C6株为10KD。以七株MCAb对鼠疫菌强、弱毒株32株作全菌体ELISA进行鼠疫菌分型的初步研究发现,3B9株McAb与24株强毒菌发生阳性反应,而不与弱毒菌反应;1D10株与锡型及弱毒菌不发生反应,与其它强毒菌发生阳性反应。 相似文献
62.
63.
血管壁具有有序的层状结构,按其形态可分为内膜、中膜及外膜三层。外膜是位于血管最外层的组成结构,其结构非常复杂,含有许多细胞成分(如成纤维细胞、神经节细胞和肥大细胞等)及致密的细胞外基质成分(如胶原纤维和弹性纤维等)。长期以来人们对外膜认识仅停留在支撑血管,为神经纤维和滋养血管提供支架等。然而,近些年的一些研究证明,损伤外膜引起内膜和中膜的病理性改变与损伤内膜引起的改变相似,并且外膜在血管损伤早期也可引起内膜及中膜的重塑[1]。其中,成纤维细胞向肌成纤维细胞转化是血管重塑的一个重要标志,它不仅在损伤修复[2]和组织纤维化[3-4]的过程中起到极其关键的作用,更在血管重塑过程中发挥重要作用[5]。 相似文献
64.
目的:建立大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞组织贴块法培养模型。方法:分离大鼠胸主动脉外膜,切成1 mm×1 mm×1 mm大小组织块,均匀贴于细胞培养瓶壁上,加入含20%血清的细胞培养液DMEM,置入细胞培养箱于37℃,5%CO2条件下传代培养。结果:第3~4 d,少量细胞从组织块周边游出,第6~8 d后,细胞围绕组织块生长至亚融合状态,0.25%胰酶消化后传代,可得到较纯成纤维细胞。结论:利用组织贴块法培养大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞存活率高,操作简单,结果稳定,在血管重塑、血管纤维化、细胞凋亡、细胞表型转变等研究领域具有应用价值。 相似文献
65.
目的颅内血管外膜细胞瘤(HPC)发病率低,临床诊治困难,本研究是为了提高对颅内HPC的认识。方法回顾总结6例颅内HPC患者的临床表现、影像、病理特点以及手术切除和预后情况,并且复习相关文献。结果 6例患者均行开颅手术治疗,其中全切除4例,近全切除2例;术后2例行放射治疗。术后随访1~10个月,尚未发现肿瘤复发及转移。结论颅内HPC生长活跃,血供丰富,尤其是位于大脑镰及矢状窦旁时,因此要明确诊断,做好充分的术前准备;手术切除是最佳的治疗手段,应尽量全切,切除范围要广泛,放射治疗是主要的辅助治疗手段。 相似文献
66.
现代生物技术的飞速发展,使传统的疫苗生产方式发生了根本的变化.疫苗研究领域变得异常活跃,从而使新型载体蛋白不断被发现,其作用机制得到全面研究.寻找安全、有效的载体蛋白是目前疫苗领域的课题之一.近年来的初步研究结果为载体蛋白的应用展现了广阔的前景.此文阐述了载体蛋白的作用机制和几种常用的载体蛋白. 相似文献
67.
68.
[目的]构建幽门螺杆菌(H. pylori) NCTC11637菌株36kDa (OMP36)外膜蛋白基因原核表达系统,探索研制H. pylori疫苗的新途径.[方法]培养和收集H. pylori NCTC11637菌株,提取基因组DNA, PCR扩增目的基因片断.将其克隆到T载体并测序,再将目的基因克隆入PET32a( ),构建重组表达载体PET32a-OMP36.转化E.coliBL21后IPTG诱导表达,经SDS-PAGE鉴定、镍亲和层析纯化、Western blot检测表达蛋白.(结果)测序分析表明,插入的基因片断为987bp,表达的蛋白的相对分子质量(Mr)约为36kDa,并显示具有良好的抗原性.SDS-PAGE检测表明,表达量占细菌总蛋白的37%,镍亲和层析纯化率约92%.Western blot检测表达蛋白具有良好的抗原活性.[结论]成功克隆了外膜蛋白OMP 36kDa的编码基因,其表达产物OMP 36有望成为新的Hp疫苗候选分子,为H. pylori疫苗的研制和试剂盒的开发奠定了良好的基础. 相似文献
69.
目的构建问号状钩体强毒赖型56601株外膜蛋白Loa22的重组质粒,表达Loa22蛋白,研究该蛋白对豚鼠的保护作用。方法以问号状赖型钩体56601株基因组为模板扩增目的基因,将Loa22基因克隆至原核表达载体PQE-31,构建PQE31-Loa22重组体,将其转入大肠杆菌M15中诱导表达目的蛋白。于0、2、4周将蛋白及对照PBS分别经豚鼠腹股沟、腋下免疫豚鼠。每次剂量为蛋白50μg/只,末次免疫后2周,用培养3d的56601株钩体从腹腔攻击各免疫组豚鼠(1ml/只)。连续观察15d,观察各免疫组豚鼠发病情况,并取各免疫组豚鼠的肺、肝、肾做病理切片。分析蛋白Loa22对豚鼠的免疫保护作用。结果成功扩增出Loa22基因,构建原核重组质粒PQE31-Loa22。重组质粒能在大肠杆菌M15中高效表达Loa22蛋白。用Loa22蛋白主动免疫的豚鼠用56601株钩体攻击,结果显示无发病现象,而免疫对照组的豚鼠中出现了食欲不振、活动减少等现象,病理切片有明显改变。结论成功构建了Loa22重组原核表达质粒,表达纯化的蛋白可以使豚鼠抵抗同型钩体的攻击,免疫保护作用为82%。 相似文献
70.
目的对赖型钩端螺旋体Loa22基因进行表达和功能研究。方法构建赖型钩端螺旋体Loa22成熟肽重组质粒,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)对重组质粒进行蛋白诱导表达,SDS-PAGE和Western Blotting检测目标蛋白表达情况。经亲和层析获得目标蛋白并作用于小鼠巨噬细胞ANA-1,检测细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活力、四氮唑复合物(XTT)吸光度值和细胞凋亡率以评价其细胞毒性。结果成功构建Loa22成熟肽原核表达质粒,通过鉴定并纯化得到Loa22成熟肽,该蛋白使培养ANA-1细胞上清液中LDH活力升高,XTT吸光度值下降,细胞凋亡率增加。结论Loa22对ANA-1具有明显的毒性效性,该基因可能是致病钩体的一个重要毒力相关基因。 相似文献